微流化水包油乳状液和疫苗组合物制造技术

本发明专利技术提供了可用作疫苗佐剂以提高抗原免疫原性的亚微型水包油乳状液。本发明专利技术还提供了含有固有地或非固有地与这种乳状液结合的抗原的疫苗组合物。本发明专利技术还提供了制备乳状液和疫苗的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及疫苗领域，并特别涉及用于在动物体内提高免疫应答的辅佐制剂。具体而言，本专利技术涉及亚微型水包油乳状液作为疫苗佐剂以提高抗原免疫原性的用途。本专利技术提供了亚微型水包油乳状液制剂、含有并入这种乳状液中的抗原的疫苗组合物、以及这种乳状液和疫苗的制备方法。本专利技术还提供了包含由适用于疫苗的皂草糖苷和甾醇形成的络合物的组合物。
技术介绍
细菌、病毒、寄生物和支原体传染广泛分布在动物中，例如牛、猪和宠物。由这些传染剂引起的疾病通常对杀菌剂药物治疗具有抵抗力，由此没有有效的治疗手段。因此，越来越多地使用疫苗学途径控制动物中的传染病。整个传染性病原体可以在化学灭活或适当基因操作之后适用于疫苗制剂。或者，病原体的蛋白质亚单位可以在重组表达系统中表达并提纯以用于疫苗制剂。佐剂通常是指提高对抗原的体液和/或细胞免疫应答的任何材料。传统的疫苗是由灭活的致病微生物的粗制品构成的，并且与病理微生物的培养物共存的杂质可以充当提高免疫应答的佐剂。然而，当使用病理微生物或纯化蛋白质亚单位的均一制品作为疫苗接种的抗原时，这些抗原引发的免疫性差并因此必须添加佐剂之类的某些外源材料。此外，合成和亚单位疫苗的制造昂贵。因此，借助于佐剂，激发免疫应答需要较少剂量的抗原，由此节省疫苗的制造成本。佐剂已知以许多不同的方式发挥作用以提高免疫应答。许多佐剂改变了与免疫应答相关的细胞因子网络。这些免疫调节佐剂即使没有与抗原结合，也可以发挥它们的效用。一般而言，免疫调节佐剂造成某些细胞因子的总体上调(general up-regulation)和其它细胞因子的伴生下调(concomitant down regulation)，从而产生细胞Th1和/或体液Th2应答。一些佐剂具有保持抗原构造完整性的能力，由此可以有效地将抗原呈递给合适的免疫效应细胞。由于辅佐制剂对抗原构造的这种保持性，疫苗具有提高的贮存寿命，例如对免疫刺激复合物表现出的那样(ISCOMs)。Ozel M.等人；Quarternary Structure of theImmunestimmulating Complex(Iscom)，J.of Ultrastruc.and Molec.Struc.Res.102，240-248(1989)。一些佐剂具有使抗原作为基地(depot)保存在注射部位的性能。由于这种基地效应，抗原不会通过肝脏清除迅速流失。铝盐和油包水乳状液通过这种基地效应作用较短的时间。例如，可以使用作为油包水乳状液的弗氏完全佐剂(FCA)获得长期基地。FCA通常保留在注射部位直至生物降解可以通过抗原呈递细胞去除抗原。基于它们的物理性质，佐剂可以分成两大类，也就是粒状佐剂和非粒状佐剂。粒状佐剂以微粒形式存在。免疫原能够与微粒结合或并存。铝盐、油包水乳状液、水包油乳状液、免疫刺激复合物、脂质体以及纳米微粒和微粒是粒状佐剂的例子。非粒状佐剂通常是免疫调节剂，并且它们通常与粒状佐剂结合使用。胞壁酰二肽(从分枝杆菌中提取出的肽聚糖的佐剂活性组分)、非离子嵌段共聚物、皂草苷(从皂皮树的树皮中提取出的三萜系化合物的复合混合物)、脂质A(含有两个磷酸根基团和五个或六个通常C12至C16长度的脂肪酸链的葡糖胺的二糖)、细胞因子、碳水化合物聚合物、衍生的多糖、和细菌毒素(例如霍乱菌毒素和不耐大肠杆菌的毒素(LT))是非粒状佐剂的例子。一些公知的佐剂是非粒状免疫调节剂和能够赋予辅佐制剂基地效应的粒状材料的结合。例如，FCA将结核杆菌组分的免疫调节性能与油乳剂的短期基地效应结合在一起。油乳剂很早以前就用作疫苗佐剂。Le Moignic和Pinoy在1916年发现，灭活鼠伤寒沙门氏菌在矿物油中的悬浮液提高了免疫应答。随后在1925年，Ramon描述了作为增强对白喉类毒素的抗毒响应的物质之一的淀粉油。然而，油乳剂直至1937年才开始普及，当时Freund公布了他的现在被称作弗氏完全佐剂(FCA)的辅佐制剂。FCA是由与灭活分枝杆菌和失水山梨醇酯A(Arlacel A)混合的矿物(石蜡)油构成的油包水乳状液。Arlacel A主要是单油酸二缩甘露醇酯，并用作乳化剂。尽管FCA能够优异地诱发抗体反应，但其造成严重的疼痛、脓肿形成、发烧和肉芽肿性炎症。为了避免这些不合意的副反应，开发出不完全的弗氏佐剂(IFA)。IFA在组成上与FCA类似，只是不存在分枝杆菌组分。IFA通过基地配方在注射部位发挥作用，并在抗体生成细胞的刺激下减缓抗原释放。另一种改进FCA的途径是基于下述概念一用生物相容油代替矿物油将有助于在注射部位消除与FCA相关的反应。乳状液也被认为应该是水包油型，而非油包水型，因为后者在注射部位产生长期基地。Hilleman等人描述了油基佐剂“Adjuvant65”，其是由86％花生油、10％作为乳化剂的Arlacel A和4％作为稳定剂的单硬脂酸铝构成。Hilleman，1966，Prog.Med.Virol.8131-182；Hilleman和Beale，1983，在NewApproaches to Vaccine Development中(Eds.Bell，R.and Torrigiani，G.)，Schwabe，Basel。在人体中，Adjuvant 65是安全和有效的，但是与IFA相比表现出较低的辅助性。然而，由于使用纯化或合成乳化剂代替Arlacel A时许多疫苗对人类的反应原性和辅助性的降低，停止了Adjuvant65的使用。美国专利5,718,904和5,690,942提出，水包油乳状液中的矿物油可以被替换成可代谢油以改进安全性。除了辅助性和安全性，乳状液的物理外观也是重要的商业考虑因素。物理外观取决于乳状液稳定性。乳状液分层、沉积和聚集是乳状液不稳定的指征。当乳状液的油相和水相具有不同的比重时，发生乳状液分层。当乳状液的初始液滴尺寸很大且乳状液滴没有任何布朗运动时，也会发生乳状液分层。当液滴尺寸很大时，存在界面破坏的趋势且液滴聚结成大粒子。乳状液的稳定性由许多因素决定，例如所用乳化剂的性质和量、乳状液中的液滴尺寸、和油相与水相之间的密度差。乳化剂通过降低界面自由能和对液滴聚结产生物理或静电阻碍，促进分散的液滴的稳定性。已经使用非离子型和离子型洗涤剂作为乳化剂。非离子型乳化剂在界面上取向并产生相对松散(bulky)的结构，从而导致分散的液滴的空间空缺(steric avoidance)。阴离子或阳离子乳化剂通过吸引抗衡离子引发电双层的形成；这种双层推斥力使液滴在互相接近时互相推斥。除了使用乳化剂，也可以通过用机械装置降低乳状液的液滴尺寸来实现乳状液稳定性。通常，使用推进式混合器、涡轮转子、胶体磨、均化器和超声波仪制造乳状液。微流化是提高乳状液中液滴尺寸均一性的另一种方式。微流化可以产生优异的物理稳定的乳状液，其具有亚微范围的一致粒度。除了提高乳状液的稳定性，微流化方法能够实现终端过滤，这是优选的确保最终产物无菌性的方式。此外，亚微型油粒子可以从注射部位进入淋巴，然后进入排泄链的淋巴结、血液和脾。这降低了在注射部位形成油状基地的可能性，其可能产生局部炎症和明显的注射部位反应。微流化器现已市售。当两种流化流在互作用室中高速互相作用时，在微流化器中形成乳状液。微流化器是空本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包括皂草糖苷、＊醇和抗原的疫苗，其中所述皂草糖苷和所述甾醇互相结合以形成螺旋状微胞形式的复合物，并且其中所述抗原与所述螺旋状微胞混合，但是没有结合到其中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：PJ多米诺维斯奇，PK克洛斯，RL克雷布斯，RM曼南，
申请(专利权)人：辉瑞产品有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]