热致可逆的免疫佐剂乳液制造技术

本发明专利技术涉及水包油乳液佐剂，至少含有角鲨烯、水性溶剂、属于聚氧乙烯烷基醚的非离子表面活性剂和热致可逆的疏水性非离子表面活性剂，在该佐剂中，油滴体积分布的９０％的粒度小于２００ｎｍ。本发明专利技术还涉及制备免疫原性组合物的方法，其中将至少一种疫苗抗原与水包油乳液混合。本发明专利技术特征在于该水包油乳液通过温度变化的转相方法来获得。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】热致可逆的免疫佐剂乳液本专利技术涉及疫苗领域；更具体地说，本专利技术涉及包括乳液佐剂的疫 苗领域。现有技术中有许多含有一种或多种佐剂的疫苗。US专利6 299 884 尤其公开了包括水包油乳液的佐剂制剂，其中油滴的粒度为100-1000nm。该乳液用高压均化器(微流化仪microfluidiseur )获得，在 生产过程中，使用高机械能，以获得足以减小油滴粒度的剪切力。根据 该教导，虽然所获得的液滴的粒度范围的最小值为100nm，但平均值要大 得多，最好也不过是在170nm的范围内，更通常在500nm的范围内。希望可以获得可替代该专利中提出的佐剂的制剂，该制剂可以通过 更简单的方法(不需要任何特定的剪切技术)得到，该方法是低能量方 法，同时可再现和完全可靠；另外，该佐剂制剂必须能够有效辅佐疫苗， 尤其可以提高所获得的免疫应答或降低抗原的存在剂量，同时不表现对 其完全安全给药有害的毒性迹象。为了实现该目标，本专利技术的主题是水包油乳液佐剂，特征在于它至少包凌舌下列组分-角鲨烯， -水性溶剂，-属于聚氧乙烯烷基醚的亲水性非离子表面活性剂， -疏水性非离子表面活性剂，其中该佐剂是热致可逆的，并且按容积计的油滴总数的90%具有小 于200nm的4立度。根据本专利技术，这种乳液可以用转相温度方法来获得，从工业的观点 来看，该方法提供了很大的优点。这种方法提供了制药工业所需的所有 安全和盈利保证。另外，用该方法可以获得单分散乳液，其液滴尺寸是 非常小的，这使得这样获得的乳液尤其稳定和便于用截止阈值为200nm 的除菌过滤器过滤。根据一个特定的特征，按容积计的油滴总数的90%(或d90 )具有小于160nm，甚至小于150nm的粒度。根据本专利技术的一个特定实施方案，本专利技术的乳液还包括醛醇；这使 得可以在低于不含任何醛醇的相同组合物所需的温度的温度下获得转 相，从而可以降低生产成本以及乳液成分热致变性的风险。根据一个特别有利的实施方案，本专利技术的疏水性非离子表面活性剂 是脱水山梨醇酯或二缩甘露醇酯。这种表面活性剂具有能够完全安全的 用于注射液的优点。根据本专利技术的一个特定实施方案，该乳液还包括烷基聚糖苷和冷冻 保护剂如糖，尤其十二烷基麦芽糖苷和/或蔗糖。因此，还可以获得可冻干乳液，在冻干和重构后恢复其性能，尤其 粒度性能，即，冻干和重构的乳液仍然是单分散的，由总数的90% (按 容积计)具有小于200nm的粒度的油滴组成。这种性能在疫苗领域中是 特别重要的，因为由于稳定性(某些抗原或某些佐剂)的原因，疫苗有 时必须以冻干形式保存。本专利技术的一个主题也是制备免疫原性组合物的方法，根据该方法， 将至少一种疫苗抗原与水包油乳液混合，特征在于，该水包油乳液用转 相温度方法获得。才艮据一个实施方案，本专利技术的方法包括至少一个通过冷却油包水倒 相乳液制备水包油乳液的步骤，该乳液至少包^":-角鲨烯，-水性溶剂，-属于聚氧乙烯烷基醚的亲水性非离子表面活性剂， -疏水性非离子表面活性剂。利用从工业的观点来看非常有利的这种方法，获得了即使在很低的 抗原剂量下也非常有效的稳定性免疫原性组合物。另外，利用该制备方法，乳液的全部油滴被测定为具有同样的极小 的粒度；事实上，当测量粒度性能(粒度和粒度分布)时，可以发现， 该乳液是单分散乳液，具有高斯型分布曲线，该曲线是非常窄的，集中 于一低值，通常大约80 - 90nm。根据本专利技术的方法的一个具体实施方案，油包水倒相乳液通过下列步骤制备将角篁烯、水性溶剂、属于聚氧乙烯烷基醚的非离子表面活 性剂和疏水性非离子表面活性剂混合，首先获得水包油粗乳液，然后将 该乳液加热到至少转相温度，以获得倒相乳液。以这种方式实施该方法 具有限制乳液的各种成分接触高温的时间的优点。根据另一个实施方案，本专利技术的方法包括下列步骤 -首先将包括水性溶剂和聚氧乙烯烷基醚的水相和其次将包括角 篁烯和疏水性表面活性剂的油相单独加热到至少等于转相温度的温度， 然后-将该2个相混合，以获得油包水倒相乳液。根据本专利技术的 一个特定实施方案，水性和油相各自在混合之前单独 加热到低于转相温度的温度。然后将该2个相混合，以便获得油包水乳 液；然后将整个乳液加热到至少等于转相温度的温度，以获得油包水倒 相乳液。根据一个特定实施方案，本专利技术的制备方法还包括冻干步骤。因此， 本专利技术的方法可用于制备包括因为稳定性的原因而必须以冻千形式保存 的抗原的免疫原性组合物。在阅读了以下的说明后，将会了解到本专利技术的许多其它优点。对于本专利技术的说明书来说，本专利申请中提到的参数d50和d90是 与容积有关的值；d50值表示按容积计的液滴总数的50%的值。对于本专利技术来说，术语"水包油乳液"用来表示油相在水相中的分 散体，该水相可以由水或盐水溶液组成，并任选进行了緩冲。根据本发 明的一个特定实施方案，乳液的水相由緩冲液，例如Dulbecco磷酸盐緩 冲液(D-PBS，不含钩或镁)组成。术语"乳液佐剂"用来表示免疫佐剂 乳液，即，与在没有该乳液的情况下获得的应答相比，能够改进在给予 抗原期间诱发的免疫系统的应答的乳液；该免疫系统应答可以反映在抗 体的产生或某些细胞，尤其抗原提呈细胞(例如树突状细胞)、T淋巴细 胞和B淋巴细胞的激活上。该细胞激活可以通过细胞表面存在的激活标 志物或细胞因子的释放来证实。由佐剂乳液诱发的免疫应答的改进可以是量上的改变，即，增强了诱发的应答，或者是质的改变，即，获得了 不同性质或不同方向的应答，或者获得了另外的应答。术语"佐剂乳液"对于本专利技术来说，术语"免疫原性组合物"用来表示包括至少一种 抗原并且可以给药于人或动物以便获得免疫系统应答的组合物。该应答 可以是体液应答(抗体产生)或者细胞应答(免疫细胞的增殖和/或激活)。 该免疫原性组合物可以是用于预防目的或治疗目的或二者的组合物。根 据本专利技术获得的免疫原性组合物可以经由疫苗正常使用或推荐使用的任何途径给药胃肠外或粘膜途径，并且可以制成各种形式，尤其液体或 冻千形式。它可以用注射器或肌内、皮下或皮内注射用无针头注射器或 鼻喷入法给药。对于本专利技术来说，术语"抗原"用来表示可在疫苗中使用的任何抗 原，不论它包括整个微生物还是亚单位抗原，也不论它的性质如何；该 抗原事实上可以是肽，蛋白，糖蛋白，多糖，糖脂，脂肽等。根据本发 明的佐剂乳液尤其适合于病毒抗原；实际上，用人巨细胞病毒、人类免 疫缺陷性病毒和流感病毒抗原已经获得特别好的结果。至于流感病毒抗 原，可以使用来源于单 一 病毒抹的抗原或来源于多个病毒抹的抗原混合 物。可采用来源于用卵或细胞常规培养的病毒。利用本专利技术，已经发现， 不论是单抹还是多抹混合物，均可以获得令人满意的免疫系统应答，同 时，显著减少了疫苗剂中存在的抗原量。这在制备针对流行性感冒的疫 苗的情况下具有特别重大的价值，因为在该情况下必须要在很短的时间 内生产出大量的疫苗剂。根据本专利技术，水包油乳液包括角鲨烯，它是最初来源于鲨鱼肝脏的 油；该油的实验化学式为C3。H5。，包括6个双4定；该油是可代谢的，具备 可允许用于注射药品的品质。还有从橄榄油中提取的植物来源的角鲨烯。 使用动物来源的由Fluka公司提供的角鲨烯尤其获得了好的结果。用于 制备浓缩乳液的角鲨烯的量有利地为5 - 45 % ;该浓缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
水包油乳液佐剂，特征在于它至少包括下列组分：　　　　－角鲨烯，　　　　－水性溶剂，　　　　－属于聚氧乙烯烷基醚的非离子表面活性剂，　　　　－疏水性非离子表面活性剂，　　　　其中该佐剂是热致可逆的，并且按容积计的油滴总数的９０％具有小于２００ｎｍ的粒度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MF克卢克，F达伦康，P普罗贝克奎勒克，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]