一种使含佐剂的疫苗组合物稳定的方法技术

本发明专利技术涉及一种使干态的含佐剂的疫苗组合物、佐剂化的疫苗组合物稳定的方法，具体地讲，一种使干态的流感疫苗组合物，特别是佐剂化的流感疫苗组合物稳定的方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是2009年3月2日提交的题为“一种使含佐剂的疫苗组合物稳定的方法”的国家申请号为200980108363.4(PCT/EP2009/052460)的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种使干态的含佐剂的疫苗组合物、佐剂化的疫苗组合物稳定的方法，具体而言，一种使干态的流感疫苗组合物，特别是佐剂化的流感疫苗组合物稳定的方法。
技术介绍
US 3,655,838公开了通过在冷冻剂如液氮中冷冻溶液液滴，随后冻干以获得冻干的含试剂微粒、球珠或冻球(lyosphere)来将分析或免疫试剂制粒的方法。EP 0 081 913 B1描述了通过在惰性液体冷冻剂中冷冻液滴(该惰性液体冷冻剂的密度高于液滴的密度)，然后将冷冻颗粒从该液体冷冻剂表面移走来制备球状冷冻颗粒的方法。WO 94/25005公开了在冻球状促性腺激素的稳定化，一种制备这种冻球的方法及包含所述冻球的药物制剂。EP 0 799 613(US 5,897,852)公开了一种疫苗包，所述疫苗包包括疫苗容器，所述疫苗容器容纳一种或多种含所述疫苗组分的冻干体，所述疫苗组分的至少一种是直径为至少0.2mm的冻球或微粒。WO 2006/008006(US 2008/0060213)公开了一种制备装填冻干产物的容器的方法，其中所述产物的液滴被冻成小球，所述小球经过冻干、测定并装入所述容器中。已知获得冷冻颗粒或小球的其它技术可用于食品工业(例如US 5,036,673或US 2007/0281067 A1)。冻干技术能改善许多产品的稳定性，所述产品可为有佐剂或无佐剂的疫苗。例如，EP 0 475 409公开了一种保存含缓冲剂和任选抗冻剂的微观生物材料悬浮液的方法，其通过将所述悬浮液雾化成微液滴，在旋转的低温表面上冷冻所述液滴并干燥所述微液滴。优选所述液滴的直径约小于200μm。已在文献中对流感抗原的冻干进行研究，并有一篇详细的综述(Amorij等人，2008:Development of stable Influenza vaccine powder formulations:challenges and possibilities(稳定的流感疫苗粉末制剂的开发：挑战与前景)，Pharmaceutical Research,Vol 25,1256-1273)。US 3 674 864公开了一种使流感病毒疫苗稳定的方法，其基本上通过将所述病毒悬浮于含蔗糖的水溶液并
冻干所得悬浮液进行。也已在文献中讨论了破伤风和白喉类毒素的稳定化(参见例如S.P.Schwendeman等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.92,pp.11234-11238,1995)。最近，已提出了使破伤风类毒素冻干的优化制剂(P.Matejtschuk等人，Biologicals 37(2009)1-7)。冻干通常是医药工业中的最后步骤，其在装入小瓶、注射器或较大容器的步骤之后。这种情况下，干产品在使用前必须再水合化(此文献中的同义词：再生或溶解)。以微丸的形式冻干使得干态疫苗产品获得与仅进行冻干相同的稳定效果或改善储存稳定性。此外，与现有冻干技术相比，微丸技术具有一些优点，这是由于它能，例如：-在填充之前(或通过连续填充)混合干产品-在填充之前调节效价(其可用于产品堆积的情况下)-使得产品间的相互作用最小化(再水合后仅存在产品相互作用力)，和-在一些情况下改善稳定性。由于这些原因，微丸技术的优点使得可用以下方法干燥佐剂化的疫苗：-将抗原与佐剂一起干燥(在同一阶段)：通过将两者(抗原和佐剂)限制在玻璃状基质中来使它们稳定并使它们之间的相互作用稳定，在所述基质中所有分子运动和化学反应受到严重阻碍。这种固态能在整个储存过程中(甚至在较高温度下)保持所述抗原的功效、所述佐剂的物理和免疫性能及两者之间相互作用的性质和效力。-干燥抗原和独立干燥佐剂(抗原和佐剂在不同阶段)，然后在填充前将两者混合或连续填充。一些情况下，在+5℃或更高或更低温度下液态长期储存的单独佐剂的稳定性可能是一个问题(乳液的化学稳定性，铝凝胶、脂质体和其它物质的物理稳定性)。微丸技术能通过产生独立的抗原和佐剂微丸来改善佐剂化的疫苗的稳定性。可独立地优化各抗原和佐剂的稳定制剂。接着，抗原和佐剂的微丸可随后填充到小瓶中或在填充到小瓶中之前混合。独立的固体能在整个储存过程中(甚至在较高温度下)避免抗原和佐剂之间的相互作用，以保持抗原的功效和佐剂的物理和免疫性能。这种结构中，小瓶中的容纳物能比具有液态的抗原或佐剂之一的任何其它结构或抗原和佐剂在同一颗粒中干燥时更稳定。抗原和佐剂之间的相互作用是这样标准化的，正如它们仅在用选定的稀释剂使干组合物再水合后产生，所述稀释剂可包含注射用水、缓冲剂和稳定赋形剂。因此，仅在疫苗再水合和注射之间的短时
间内需要控制相互作用。因此，可能通过两种产品干燥的分开改善这两种产品的整体稳定性(各产品配制的优化而不是两者一起的折中)和疫苗本身的稳定性、在储存后和填充之前调节两者之一的效价，以方便制备过程。专利技术概述本专利技术提供了一种使含佐剂的疫苗组合物稳定的方法，所述方法包括如下步骤：用包含稳定剂的水溶液稀释包含抗原或抗原制剂的液态原液组合物，处理稀释的组合物以形成直径接近约200μm-约1500μm的规则液滴，在冷冻剂中冷冻所述规则液滴以形成冷冻的规则球状微丸或颗粒，和干燥所得冷冻的规则球状微丸或颗粒以形成直径为约200μm-约1500μm的干态规则球状微丸或颗粒。合适的疫苗组合物有例如包含整个病毒或抗原，如流感病毒、轮状病毒、巨细胞病毒、甲型和乙型肝炎病毒，整个细菌或细菌蛋白或多糖抗原(缀合或非缀合的)如流感嗜血杆菌、脑膜炎球菌多糖、破伤风、白喉、细胞性和非细胞性百日咳、肉毒中毒、炭疽热和艰难梭菌的组合物。可例如实现液滴的冷冻，其中将稀释的组合物，即配制的液体产品制成小球以制得直径为200μm-1500μm、粒度分布非常窄的校准液滴。这些液滴落入低温室，其中通过冷冻剂或通过液氮的直接注入/喷雾或逆流非常冷(T°<-110℃)的气体如氮气、CO2或空气来保持温度在-110℃以下。所述液滴在落入过程中冷冻以形成校准冷冻颗粒。获得校准液滴和随后的标准冷冻颗粒的其它技术在本领域中是已知的，如超声波喷雾(Sindayihebura D.,Dobre M.,Bolle L.,1997-Experimental study of thin liquid film ultrasonic atomization(薄液膜超声波喷雾的试验研究).ExHFT'97,Bruxelles.)，或如上所述是食品工业已知的，通过如US 5,036,673中所公开的特定冷冻转鼓。所述方法可还包括将包含一种或多种佐剂和任选稳定剂的水溶液加入所述液态原液抗原组合物中。或者，本专利技术方法还包括用包含稳定剂的水溶液稀释一种或多种佐剂的独立液态原液溶液或乳液，处理该稀释的佐剂或乳液以形成直径接近约200μm-约1500μm的规则液滴，在冷冻剂中冷冻所得规则液滴以形成冷冻的规则球状微丸或颗粒，干燥所得冷冻的规则球状微丸或颗粒以形成直径为约200μm-约1500μm的干态规则球状微丸或颗粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使疫苗组合物稳定的方法，所述方法包括如下步骤：‑用包含单糖、寡糖和/或糖醇或其混合物的水溶液稀释包含抗原或抗原制剂的液态原液组合物，以获得所得稀释的组合物中单糖、寡糖和/或糖醇含量为2％(w/v)至溶解极限，‑使已稀释的组合物制粒，所述制粒为层流射流破碎技术，以形成直径为200μm‑1500μm的规则液滴，‑在冷冻剂或低温室中冷冻所述规则液滴，以形成冷冻的规则球状微丸或颗粒，和‑干燥所述冷冻的规则球状微丸或颗粒以形成直径为200μm‑1500μm的干态规则球状微丸或颗粒。

【技术特征摘要】
2008.03.05 EP 08290216.41.一种使疫苗组合物稳定的方法，所述方法包括如下步骤：-用包含单糖、寡糖和/或糖醇或其混合物的水溶液稀释包含抗原或抗原制剂的液态原液组合物，以获得所得稀释的组合物中单糖、寡糖和/或糖醇含量为2％(w/v)至溶解极限，-使已稀释的组合物制粒，所述制粒为层流射流破碎技术，以形成直径为200μm-1500μm的规则液滴，-在冷冻剂或低温室中冷冻所述规则液滴，以形成冷冻的规则球状微丸或颗粒，和-干燥所述冷冻的规则球状微丸或颗粒以形成直径为200μm-1500μm的干态规则球状微丸或颗粒。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述疫苗组合物包含佐剂。3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包含：-将包含一种或多种佐剂的水溶液加入所述液态原液抗原组合物，或-将包含一种或多种佐剂和稳定剂的水溶液加入所述液态原液抗原组合物，其中所述稳定剂包含单糖、寡糖和/或糖醇或其混合物。4.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括:-用包含稳定剂的水溶液稀释一种或多种佐剂的独立的液态原液溶液或乳液，其中所述稳定剂包含单糖、寡糖和/或糖醇或其混合物，以获得所得稀释的佐剂溶液或乳液中单糖、寡糖和/或糖醇含量为2％(w/v)至溶解极限，-使已稀释的佐剂溶液或乳液制粒，所述制粒为层流射流破碎技术，以形成直径为200μm-1500μm的规则液滴，-在冷冻剂或低温室中冷冻所述规则液滴，以形成冷冻的规则球状微丸或颗粒，-干燥所述冷冻的规则球状微丸或颗粒以形成直径为200μm-1500μm的干态规则球状微丸或颗粒，和-与根据权利要求1获得的包含抗原的干态规则球状微丸混合并一起填充到小瓶或其它合适容器中。5.根据权利要求2-4中任一项所述的方法，其中所述佐剂选自脂质体、脂质和去污胶束、病毒颗粒、蛋白螺旋体、聚合物纳米颗粒和微粒、可溶性聚合物、蛋白颗粒、矿物凝胶、矿物微粒和纳米颗粒、聚合物/铝纳米杂化体、水包油和油包水乳液、皂角苷提取物、细菌细胞壁提取物和天然免疫受体的刺激剂。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，-其中所述液态原液组合物包含源自单一病原体或病原体血清型的抗原或抗原制剂，或-其中所述液态原液组合物包含两种或更多种抗原或抗原制剂，所述各抗原或抗原制剂源自不同的病原体或病原体血清型。7.根据权利要求6所述的方法，所述方法还包括将两种或更多种微丸或颗粒计量、混合和填充到小瓶或其它合适容器中。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述干燥通过选自如下的方法进行：冻干法、常压冷冻干燥、流化床干燥、真空转鼓干燥、搅拌冷冻干燥、振动冷冻干燥、微波冷冻干燥。9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述抗原选自减毒活和灭活的全病毒，或病毒的抗原组分，所述病毒如脊髓灰质炎、流感病毒、轮状...

【专利技术属性】
技术研发人员：P舒韦，A弗朗孔，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德有限公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR