经皮免疫之佐剂制造技术

经皮免疫体系不伤及皮肤而将抗原送递给免疫细胞，在动物或人中诱导免疫应答。对动物或人的完整皮肤经皮施用含有抗原和佐剂的制剂之后，该体系使用佐剂，优选使用ＡＤＰ－核糖基化外毒素诱导抗原特异性免疫应答（如体液和／或细胞效应物）。在经皮送递体系中加入水合剂（如脂质体）、渗透增强剂或封闭性敷料可增强免疫效力。此体系可激活皮肤中的朗格汉斯细胞，将朗格汉斯细胞迁移至淋巴结并呈递抗原。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
本专利技术涉及经皮免疫及可用于其中的佐剂，以诱导抗原特异性免疫应答。经皮免疫既要求抗原能穿过通常无法穿透的皮肤表面屏障，又要求对该抗原的免疫应答。美国申请号08/749,164中用霍乱毒素作抗原，刺激产生了强烈的抗体应答，并有较好重复性；该抗原可以盐溶液形式用于皮肤，其中含或不含脂质体。本申请将展示使用佐剂的经皮免疫，所述佐剂例如有细菌外毒素及其亚基，以及相关毒素等。Paul等(1995)曾报道使用转移体进行经皮免疫。在该报道中，利用转移体作为蛋白质(牛血清白蛋白和间隙连接蛋白)的载体，针对该蛋白质，产生了对抗原致敏化脂质体的补体介导的溶解作用。将含有该蛋白质的溶液施用于皮肤并未诱导免疫应答；只有转移体能运送抗原穿过皮肤，并产生免疫效应。如美国申请号08/749,164所述，转移体均非脂质体。Paul等(1995)的附图说明图1显示，对抗原致敏的脂质体的裂解分析可知只有抗原加转移体的制剂才诱导免疫应答。溶液形式抗原的制剂、抗原与混合微团的制剂及抗原与脂质体的制剂(即smecticmesophases)用于皮肤时，所诱导的免疫效果均不及皮下注射的。因此，有阳性对照(抗原加转移体)可证实Paul等的阴性结论，即抗原加脂质体不能诱导经皮免疫。Paul等(1995)在第3521页称，皮肤是有效的保护性屏障，“分子量多达750 DA的物质就无法穿过”，大免疫原无法透过完整皮肤实现非侵入性免疫。因此根据该文献，不应使用霍乱毒素(85,000道尔顿)这样的分子，因为不能指望它们穿过皮肤，就不能指望获得免疫效果。因此本专利技术公开之前的观点均认为皮肤屏障是佐剂或霍乱毒素类抗原无法穿透的。Paul和Ceve(1995)在第145页称，“大分子通常不能透过哺乳动物皮肤。因此不可能用单纯肽或蛋白质溶液进行外表皮免疫。”他们得出结论，“皮肤上施用脂质体或混合微团式免疫原，不管它们是否与免疫佐剂脂质A联合作用，均如同单纯蛋白质溶液一样不具备生物学活性”。Wang等(1996)将卵白蛋白(OVA)水溶液置于剃毛小鼠皮肤上以诱导过敏型应答，作为特应性皮炎模型。将小鼠麻醉，敷一封闭性补片，内含不超过10mg OVA，持续与皮肤接触4天。两周后重复操作一次。在Wang等(1996)的图2中，用ELISA测定IgG2a抗体应答，结果显示没有对OVA的IgG2a抗体应答，但能测到与过敏反应相关的IgE抗体。进一步的实验中，小鼠被敷贴上更大面积OVA溶液，贴4天，隔两周重复一次，其重复5次，即小鼠共贴补片20天。如此高剂量的OVA仍然没能产生显著的IgG2a抗体，却产生了显著水平的IgE抗体。作者们在第4079页称“我们建立了一种动物模型，显示外表皮接受蛋白质抗原(Ag)刺激，即使无佐剂，也能致敏动物，并诱导较强的Th2样应答，同时伴有高水平IgE”。外表皮大面积接触高剂量蛋白质抗原并不能产生显著的IgG抗体，但能诱导出IgE抗体，这是过敏型反应的标志。故Wang等(1996)告诫上述OVA接触方式是特应性皮炎的模型，并非免疫接种模式。因此，根据该文献的教导，可以推论，抗原经皮免疫方式如确有抗原穿过皮肤并诱导免疫应答，就会产生高水平IgE抗体。然而，我们意外地发现，将抗原盐溶液加佐剂置于皮肤上诱导的是高水平IgG和一些IgA，而非IgE。与上述引用文献相比，本专利技术人发现，将抗原加佐剂施用于皮肤，产生了经皮送递抗原体系，可诱导IgG和IgA的抗原特异性应答。佐剂优选是ADP-核糖基化外毒素。此外，也可在经皮送递体系中使用水化作用、促穿透剂或封闭敷料。专利技术简述本专利技术旨在提供一种经皮免疫体系，在动物或人体内诱导免疫应答(如体液和/或细胞效应物)。该体系只需简单地将含佐剂和抗原的制剂施用于生物体的完整皮肤，就能诱导针对该抗原的特异性免疫应答。具体地说，该佐剂可激活免疫体系的抗原呈递细胞(如表皮朗格汉斯细胞，皮肤树突细胞，树突细胞，巨噬细胞，B淋巴细胞)，还/或可诱导抗原呈递细胞吞噬抗原。然后抗原呈递细胞将抗原呈递给T细胞和B细胞。在朗格汉斯细胞的情形中，抗原呈递细胞可能从皮肤移行至淋巴结，将抗原呈递给淋巴细胞(如T和/或B细胞)，由此诱导抗原特异性免疫应答。除了激发免疫反应导致产生抗原特异性B淋巴细胞和/或T淋巴细胞(包括细胞毒性T淋巴细胞，CTL)之外，本专利技术的另一目的是用经皮免疫体系影响抗原特异性T辅助淋巴细胞(Th1，Th2或两种全影响)，从而对免疫体系的各成分进行正和/或负调节。在本专利技术的第一个实施方案中，将含有佐剂和抗原的制剂施用于生物体的完整皮肤后，抗原被呈递给免疫细胞，未经皮肤穿孔就诱导产生了抗原特异性免疫应答。该制剂中可以包含其他抗原，使得经皮施用制剂可诱导对多种抗原的免疫应答。此时，所用各种抗原可以是来源相同，也可不同，但应具备不同化学结构，以便诱导对不同抗原特异的免疫应答。抗原特异性淋巴细胞有可能参与免疫应答，如在B淋巴细胞的参与下，抗原特异性抗体可能是一部分免疫应答。本专利技术的第二个实施方案中，上述方法被用来处理生物体。如果所用抗原来自病原体，则进行接种，使该生物体可抵抗该病原体的侵袭，或抵抗其致病作用，如因毒素分泌而导致的致病作用。包含肿瘤抗原的制剂也许能治疗癌症，包含自身抗原的制剂也许能治疗该生物体自身免疫体系所致疾病(如自身免疫疾病)，包含变应原的制剂也许可用于对变态反应性疾病作免疫治疗。在本专利技术的第三个实施方案中，提供了可用于上述方法的补片。补片中含有敷料，有效量的抗原和佐剂。敷料可为封闭性或非封闭性的。补片中可能还包含其他抗原，使得敷用该补片后，会诱导针对多种抗原的免疫应答。在这种情况下，所用抗原可以来源相同，也可不同，但应有不同化学结构，以便激发对不同抗原特异的免疫应答。为达到有效处理效果，可间隔性地多次重复敷用多块补片一段时间，也可持续敷用一段时间。此外，在本专利技术的第四个实施方案中，使用一块或多块补片，将制剂敷到完整皮肤上，接触部位涵盖不止一个引流淋巴结区。制剂中可能含有其他抗原，使得敷到完整皮肤上时，可诱导对多种抗原的免疫应答。在这种情况下，所用抗原可来源相同，也可不同，但应有不同化学结构，以便诱导对诸不同抗原特异的免疫应答。本专利技术的产品及方法可用于治疗已有疾疾，预防疾病，或减轻病性和/或缩短病程。但以不诱导过敏反应、特应性疾病、皮炎或接触性超敏反应为佳。制剂中不止含有抗原和佐剂，还可含水化剂(如脂质体)，促穿透剂，或二者均有。例如，抗原-佐剂制剂中可能还含有用AQUAPHOR制成的乳剂(凡士林，矿物油，矿物蜡，羊毛蜡，泛酰醇，bisabol和甘油)，乳剂(如水性乳膏)，水包油乳剂(如油性乳膏)，无水脂质加水包油乳剂，无水脂质加油包水乳剂，脂肪，蜡，油，蛙酮，湿润物(如甘油)，凝胶(如SURGILUBE，KY凝胶)，或以上各试剂的组合物。制剂可以制成水溶液形式。制剂中较优选不含有机溶剂。可在用酒精擦拭皮肤后施用制剂。但不优选在经脱发剂处理除去了角质细胞层的皮肤表面给药。抗原可得自能感染生物体的病原体(如细菌、病毒、真菌或寄生虫)，或可得自细胞(如肿瘤细胞或正常细胞)。抗原也可以是肿瘤抗原或自身抗原。从化学角度看，抗原可以是糖类、糖脂、糖蛋白、脂类、脂蛋白、磷脂、多肽或以上各类的化学或重组偶联物。抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有抗原和佐剂的经皮免疫制剂，其中给完整的皮肤施用所述制剂即可诱导特异于所述抗原的免疫应答，而无需穿透皮肤。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：GM格伦，CR阿尔文，
申请(专利权)人：由国防部长代表的美利坚合众国政府，
类型：发明
国别省市：US[美国]