本发明专利技术提供一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，具体涉及医药检测分析领域
【技术实现步骤摘要】
叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法
[0001]本专利技术属于医药检测分析领域，具体涉及一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法
。
技术介绍
[0002]根据国家食品药品监督管理总局药品审评中心发表的文章
、
欧洲发布的警示结构指南
、LutzM
ü
ller
等文献资料及商业软件，对叶酸
API
合成工艺中用到的试剂
、
物料
、
中间体等进行
(
潜在
)DNA
反应性
(
致突变
)
杂质评估，触发
DNA
反应性
(
致突变
)
警示基团的杂质中包含亚硝酸钠
(
警示结构为亚硝酸根
)
，依据基因毒杂质
Thresholdof ToxicologicalConcern(TTC
，毒理学关注阈值
)
：
1.5
微克
/
天，按叶酸片的用法用量可得，叶酸最大日服用剂量
30mg
，即该杂质的限度应为
50ppm
，为对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估，我公司开发了一种能够检测叶酸原料药中基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法
。
技术实现思路
[0003]为对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估，本专利技术的目的是提供一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，该方法检出限低，准确度高
。
[0004]本专利技术提供了如下的技术方案：
[0005]一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：
[0006]把叶酸原料药通过蒸馏水溶解获得供试品溶液；亚硝酸根离子标准溶液加入蒸馏水稀释获得对照品溶液；然后精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入离子色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算即获得目标值；
[0007]其中，离子色谱仪的色谱条件为采用阴离子交换色谱柱和匹配的保护柱，以
13mM
～
17mM
氢氧化钠溶液为淋洗液，磷酸溶液为再生液，流速
0.6
‑
0.8ml/min
，柱温
40
‑
50℃
，进样体积
100
μ
l。
[0008]优选的，取叶酸原料药
20mg
，精密称定，置
20ml
量瓶中，加
15mM
氢氧化钠溶液适量溶解后，再加溶剂定容至刻度，摇匀；经
0.22
μ
m
×
13mm
水系膜过滤，作为供试品溶液；
[0009]优选的，精密量取浓度为
1000
μ
g/ml
的亚硝酸根离子标准溶液适量，加溶剂定量稀释制成每
1ml
含亚硝酸根离子
0.05
μ
g
的溶液
。
[0010]优选的，供试品溶液中亚硝酸根离子小于
0.005
％
。
[0011]优选的，采用阴离子交换色谱柱
MetrosepA supp 7
‑
250/4.0
柱或效能相当的色谱柱，保护柱
MetrosepA supp 5
‑
Guard/4.0
，以
15mM
氢氧化钠溶液为淋洗液，
200mM
磷酸溶液为再生液，流速
0.7ml/min
，柱温
45℃
，进样体积
100
μ
l
；
[0012]本专利技术的有益效果：
[0013]本专利技术检出限低，精密度良好，且准确度高，可以对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估
。
补充了企业对于基因毒杂质亚硝酸盐痕量测定的技术短板
。
附图说明
[0014]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制
。
在附图中：
[0015]图1为实施例一对照品溶液检测色谱图；
[0016]图2为实施例一供试品品溶液检测色谱图；
[0017]图3为实施例二对照品溶液检测色谱图；
[0018]图4为实施例二供试品品溶液检测色谱图；
[0019]图5为实施例三对照品溶液检测色谱图；
[0020]图6为实施例三供试品品溶液检测色谱图；
[0021]图7为实施例四对照品溶液检测色谱图；
[0022]图8为实施例四供试品品溶液检测色谱图；
[0023]图9为实施例五对照品溶液检测色谱图；
[0024]图
10
为实施例五供试品品溶液检测色谱图；
[0025]图
11
为实施例六对照品溶液检测色谱图；
[0026]图
12
为实施例六供试品品溶液检测色谱图；
[0027]图
13
为实施例七对照品溶液检测色谱图；
[0028]图
14
为实施例七供试品品溶液检测色谱图；
具体实施方式
[0029]实施例一
[0030]对照品溶液：精密量取亚硝酸根离子标准溶液
(
浓度
1000
μ
g/ml)
适量，加溶剂定量稀释制成每
1ml
约含亚硝酸根离子
0.05
μ
g
的溶液
。
[0031]供试品溶液：取本品约
20mg
，精密称定，置
20ml
量瓶中，加
15mM
氢氧化钠溶液适量溶解后，精密加入亚硝酸根离子标准溶液的贮备液
(0.5
μ
g/ml)2ml
，再加溶剂定容至刻度，摇匀
。
经
0.22
μ
m
×
13mm
水系膜过滤，作为供试品溶液
。
[0032]精密吸取对照品溶液及供试品溶液
100
μ
l
，采用以下色谱条件进行洗脱：
[0033]色谱条件：采用阴离子交换色谱柱
(MetrosepA supp 7
‑
250/4.0
柱，保护柱
Metrosep A supp 5
‑
Guard/4.0)
，以
15mM
氢氧化钠溶液为淋洗液，
200mM
磷酸溶液为再生液，流速
0.7本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：把叶酸原料药通过蒸馏水溶解获得供试品溶液；亚硝酸根离子标准溶液加入蒸馏水稀释获得对照品溶液；然后精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入离子色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算即获得目标值；其中，离子色谱仪的色谱条件为采用阴离子交换色谱柱和匹配的保护柱，以
13mM
‑
17mM
氢氧化钠溶液为淋洗液，磷酸溶液为再生液，流速
0.6
‑
0.8ml/min
，柱温
40
‑
50℃
，进样体积
100
μ
l。2.
根据权利要求1所述的一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：取叶酸原料药
20mg
，精密称定，置
20ml
量瓶中，加
15mM
氢氧化钠溶液适量溶解后，再加溶剂定容至刻度，摇匀；经
0.22
μ
m
×
13mm
水系膜过滤，作为供试品溶液
。3.
【专利技术属性】
技术研发人员：杨方程，燕立波，徐慧，金永华，
申请(专利权)人：江苏开元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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