一种同时测定人血中多种抗菌药的方法技术

本发明专利技术提供一种同时测定人血中多种抗菌药的方法

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定人血中多种抗菌药的方法、试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于物质检测领域，尤其涉及同时测定人血中多种抗菌药的方法
、
试剂盒及应用
。

技术介绍

[0002]本部分的陈述仅仅是提供了与本专利技术相关的
技术介绍
信息，不必然构成在先技术
。
[0003]在重症监护病房
(ICU)
，普遍合并严重感染甚至危及生命的重症感染
。
现有研究表明，在这些危重患者中，疾病以及其他因素的存在会导致抗菌药物的分布
、
代谢和清除等特征发生不可预测的变化，促使患者暴露于低剂量或高剂量的抗菌药物水平，从而增加治疗失败或毒副作用的风险
。
因此，对危重患者血浆抗菌药物水平进行精确的治疗药物监测
(TDM)
，实现个体化抗菌治疗至关重要
。
遗憾的是，在全球范围内，抗菌药物
TDM
的实施一直进展缓慢，多数处于起步阶段，在技术要求和相关成本等方面面临诸多障碍
。
[0004]临床或实验室常规的测定方法有基于抗体的免疫测定法
、
紫外光谱法
(UV)、
高效液相色谱法
(HPLC)
等
。
尽管上述的这些传统检测方法在实验室得到广泛应用，然而繁琐复杂的操作过程
、
漫长的运行时间
、
较大的样本量
、
以及较低的灵敏度以及特异性等因素在很大程度上限制了它们在
TDM
领域的进一步发展
。
高效液相色谱
‑
串联质谱法
(HPLC
‑
MS/MS)
兼具高灵敏度与特异性
、
高通量
、
宽动态范围
、
多重检测能力
、
低样本量
、
运行时间短等优点，已经逐渐成为包括
TDM
在内的定量分析领域中的重要分析技术
。
[0005]目前，数种基于
HPLC
‑
MS/MS
的抗菌药物分析方法已经经过方法学验证并应用于临床样本的检测
。
但是，大多数的研究更多的集中于某一类或几类抗菌药物上，只有少数方法允许测定多种抗菌药物的血浆水平，其中，能够同时定量
10
种及以上抗菌药物的分析方法更是少之又少，并且大多不能涵括
ICU
的常见抗菌药物，不足以满足临床检测的需求，因为对于这些
ICU
患者而言，危重的病情通常会促使医生选择多种抗菌药物的联合应用方案，其处方方案的改变也更为频繁，而繁多的抗菌药物种类带来的某些问题，诸如一些抗菌药物因相似性极高难以分离
、
或者具有较强的溶剂作用等，也进一步限制了
HPLC
‑
MS/MS
方法分析抗菌药物，导致检测效率不高
。
同样考虑到患者病情的多变，对分析方法周转时间的要求也应更为苛刻，以便能在下一次给药前及时获知检测结果，从而进一步优化给药方案，提高治疗效果，降低毒副作用
。
值得注意的是，现有的多数方法并不具备足够宽广的分析范围，要么定量下限
(LLOQ)
太高，高于最小抑菌浓度
(MIC)
，要么定量上限
(ULOQ)
太低，需要稀释后重新分析样本，严重降低了结果的可用性
。
除此之外，高昂的同位素内标和复杂的提取方案带来的负担也不容小觑，尽管这些措施在一定程度上具备提高分析结果的准确度
、
精密度以及方法的可靠性等优势
。
[0006]研究发现，目前能够同时检测血浆内美罗培南
、
伏立康唑
、
卡泊芬净
、
利奈唑胺
、
万古霉素
、
去甲万古霉素
、
头孢哌酮
、
头孢他啶
、
舒巴坦
、
阿维巴坦等十种
ICU
常规抗菌药物浓度的
HPLC
‑
MS/MS
方法未有报道，仅有检测其中一种或多种报道
。
大多数分析方法的运行时
间在4‑
12min
以内，但尚未有能够涵盖以上药物的分析方法允许以低于
10min
的运转时长完成检验
。
再者，由于繁多的抗菌药物种类，部分分析方法难以获取良好的峰形，对结果的准确度与精密度带来了较大影响
。
大多数分析方法的分析范围与临床不符，实践中容易受限，需根据临床实践以及参考文献拟定更为合理的浓度范围并进行验证
。
大多数分析方法或是采用外标法或极少内标，亦或是采用大量同位素作为内标，前者容易影响结果的准确度以及精密度，而后者则带来巨大的成本负担
。
[0007]因此，考虑到上述这些情况，建立一种简单
、
快速
、
廉价
、
灵敏
、
同时测量多种常用抗菌药物浓度的分析方法是十分必要的
。

技术实现思路

[0008]为克服上述现有技术的不足，本专利技术提供一种同时测定人血中多种抗菌药的方法
、
试剂盒及其应用
。
本专利技术通过优化前处理方法，从而实现对美罗培南
、
伏立康唑
、
卡泊芬净
、
利奈唑胺
、
万古霉素
、
头孢哌酮
、
去甲万古霉素
、
头孢他啶
、
舒巴坦
、
阿维巴坦等
10
种物质的准确检测，具有良好的实际应用之价值
。
[0009]为实现上述目的，本专利技术的一个或多个实施例提供了如下技术方案：
[0010]本专利技术的第一方面，提供了一种同时测定人血中多种抗菌药的方法，其特征在于，所述抗菌药为美罗培南
、
伏立康唑
、
卡泊芬净
、
利奈唑胺
、
万古霉素
、
头孢哌酮
、
去甲万古霉素
、
头孢他啶
、
舒巴坦
、
阿维巴坦；
[0011]所述方法包括：基于
HPLC
‑
MS/MS
对经过前处理后的待测样品进行检测；
[0012]其中，所述前处理方法包括对去除蛋白质的样品加水稀释
。
[0013]本专利技术的具体实施方式中，所述去除蛋白质的样品包括阿维巴坦
、
舒巴坦和他唑巴坦；所述稀释比例为去除蛋白质的样品：水为
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种同时测定人血中多种抗菌药的方法，其特征在于，所述抗菌药为美罗培南
、
伏立康唑
、
卡泊芬净
、
利奈唑胺
、
万古霉素
、
头孢哌酮
、
去甲万古霉素
、
头孢他啶
、
舒巴坦
、
阿维巴坦；所述方法包括：基于
HPLC
‑
MS/MS
对经过前处理后的待测样品进行检测；其中，所述前处理方法包括对去除蛋白质的样品加水稀释
。2.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除蛋白质的样品包括阿维巴坦
、
舒巴坦和他唑巴坦；所述稀释比例为去除蛋白质的样品：水为
1:1.2
‑2；优选为：1：
1.5。3.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为受试者血液样品，包括全血
、
血浆或血清，进一步优选为血浆
。4.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测方法中还包括以校准品制作标准曲线定量，同时采用质控品进行质控；优选的，校准品工作液制备方法包括：用含
0.1
％甲酸的甲醇：乙腈：水
(1
：1：
2)
溶液进行配制，向上述溶液中添加适量混合标准溶液，并以等量空白血浆稀释，作为标准工作溶液；优选的，用含
0.1
％甲酸的甲醇：乙腈：水
(1
：1：
2)
溶液进行配制，向上述溶液中添加适量混合标准溶液，并以等量空白血浆稀释，获得高
(H)、
中
(M)、
低
(L)
三种浓度的溶液，作为质控样本
。5.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理方法还包括：将待测样品与内标工作液混合，离心，取上清液进行上机检测；所述同位素内标工作液制备方法为：将上述各抗菌药的内标原料加入提取液中溶解即得；所述提取液为含1％
‑3％甲酸的甲醇：乙腈
(1
：
1)
溶液；优选的，各抗菌药的内标原料包括他唑巴坦
、
美罗培南
‑2H6、
伏立康唑
‑2H3、
卡泊芬净
‑2H4、
利奈唑胺
‑2H3、
头孢他啶
‑2H4。6.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述
HPLC
‑
MS/MS
对待测样品进行检测具体方法为：液相色谱条件包括：采用梯度洗脱，流动相
A
相：
10mM
甲酸铵
‑
水溶液，流动相
B
相：含
0.1
％甲酸的
90
％乙腈
‑
水溶液；流动相流速为
0.2
～
0.6ml/min(
优选为
0.3ml/min)
；色谱柱：
Phenomenex Kinetex XB
‑
C18
色谱柱
(50mm*3mm
；
2.6
μ
m)
；柱温为
40
～
50℃(
优选为
45℃)
；进样量1～
10
μ
L(
优选为2μ
L)。7.
如权利要求6所述的方法，其特征在于，梯度洗脱方式具体为：0‑
0.7...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘安昌，姜晓燕，赵春春，赵丽霞，程萌，胡志恒，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：