血浆中辛伐他汀的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种血浆中辛伐他汀的检测方法。所述检测方法包含如下步骤：标曲样品和待测样品预处理后，进行液相色谱

【技术实现步骤摘要】
血浆中辛伐他汀的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种血浆中辛伐他汀的检测方法。

技术介绍

[0002]辛伐他汀为2,2
‑
二甲基丁酸(4R,6R)
‑6‑
[2
‑
[(1S,2S,6R,8S,8aR)
‑
1,2,6,7,8,8a
‑
六氢
‑8‑
羟基
‑
2,6
‑
二甲基
‑1‑
萘基]乙基]四氢
‑4‑
羟基
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
酮
‑8‑
酯；是一类新型降血脂的药物，结构中的六元内酯环在体内水解成开环羟基酸形式，即辛伐他汀酸后，才能呈现药理活性。开链的羟基酸结构部分竞争性抑制HMG
‑
CoA还原酶从而抑制内源性胆固醇的合成，降低对人体有害的低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯，同时中等程度提高对人体有益的高密度脂蛋白胆固醇的血浆浓度。
[0003]研究表明，作为他汀类药物，辛伐他汀可通过降低极低密度脂蛋白胆固醇浓度、诱导低密度脂蛋白受体的生成而降低低密度脂蛋白，从而导致低密度脂蛋白胆固醇的产生减少、分解代谢增加。一般用于控制血液中胆固醇的含量以及预防心血管疾病。因此，对辛伐他汀的血药浓度检测也尤为重要。
[0004]近年来随着科研工作者对新药安全评价方法的深入研究，色谱法已经广泛应用于大量的小分子药物代谢检测中，方法开发过程中主要对所使用的溶剂和试剂、基质以及配制和处理步骤进行筛选，从而形成精确测定的方法。然而，辛伐他汀在血浆基质中极不稳定，甚至存于
‑
80℃的超低温环境下也难以保证其稳定性，无疑对检测血浆中的真实浓度提出了挑战；且现有技术中大多采用液液萃取的方法，步骤复杂，操作不易。因此，辛伐他汀的检测方法的开发至关重要。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术检测血浆中辛伐他汀浓度时所存在的真实性、准确度较差，操作复杂等缺陷，本专利技术提供了一种血浆中辛伐他汀的检测方法。相比之下，本专利技术检测方法中辛伐他汀在血浆中以更稳定的状态存在，检测结果更准确，检测步骤更简单。
[0006]为实现如上目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种血浆中辛伐他汀的检测方法，其包含如下步骤：标曲样品和待测样品预处理后，进行液相色谱
‑
质谱联用法检测，建立标准曲线，计算浓度；其中，
[0008]所述标曲样品包括辛伐他汀标准品、稳定剂、“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”和空白血浆；所述待测样品包括稳定剂和待测血浆；
[0009]所述预处理包括：分别将所述标曲样品和所述待测样品与内标物工作液混合，离心取上清，以“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”稀释；
[0010]所述稳定剂为敌敌畏；所述内标物工作液包括内标物和蛋白沉淀剂。
[0011]本专利技术中，所述敌敌畏(2,2
‑
Dichlorovinyl dimethyl phosphate，DDVP)是有机磷化合物的一种，其化学名称为O,O
‑
二甲基
‑
O
‑
(2,2
‑
二氯乙烯基)磷酸酯，化学式为C4H7Cl2O4P，其结构式如下：
[0012][0013]本专利技术中，所述空白血浆指未经任何处理、无辛伐他汀和内标物的空白血浆。所述空白血浆可为大鼠空白血浆或比格犬空白血浆，例如SD大鼠EDTA
‑
K2空白血浆。
[0014]本专利技术中，所述“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”中乙腈和醋酸
‑
醋酸钠缓冲液的体积比可为1:1。
[0015]本专利技术中，所述“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”中醋酸
‑
醋酸钠缓冲液的pH可为3
‑
6，较佳地为4.5。
[0016]本专利技术中，所述内标物可选自甲苯磺丁脲、双氯芬酸钠和拉贝洛尔中的任一种，较佳地为甲苯磺丁脲。
[0017]本专利技术中，所述蛋白沉淀剂可选自甲醇、乙腈和体积比为1:1的甲醇/乙腈中的任一种，较佳地为乙腈。
[0018]本专利技术中，所述检测方法还可包含如下步骤：
[0019]所述标曲样品的制备包括：辛伐他汀标曲工作液、稳定剂溶液和空白血浆混合；
[0020]所述待测样品的制备包括：稳定剂溶液和待测血浆混合；
[0021]其中，所述辛伐他汀标曲工作液包括辛伐他汀标准品、溶剂和“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”，所述稳定剂溶液包括稳定剂和溶剂。
[0022]较佳地，所述标曲样品的制备包括：所述稳定剂溶液和所述空白血浆混合后，再与所述辛伐他汀标曲工作液混合。
[0023]较佳地，所述辛伐他汀标曲工作液的制备包括：以所述溶剂溶解所述辛伐他汀标准品后，再以所述“乙腈和/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”稀释。
[0024]较佳地，所述稳定剂溶液的制备包括：所述稳定剂和所述溶剂混合。
[0025]本专利技术中，所述内标物工作液还可包括溶剂；较佳地，所述内标物工作液的制备包括：以所述溶剂溶解所述内标物后，再以所述蛋白沉淀剂稀释。
[0026]本专利技术中，所述溶剂可各自独立地选自甲醇、乙腈、二甲基亚砜及其水溶液中的一种或多种；当所述溶剂为甲醇/水溶液时，所述甲醇和水的体积比可为1:1；当所述溶剂为乙腈/水溶液时，所述乙腈和水的体积比可为1:1；当所述溶剂为二甲基亚砜/水溶液时，所述二甲基亚砜和水的体积比可为1:1；较佳地，所述溶剂均为甲醇。
[0027]本专利技术中，所述稳定剂溶液中稳定剂的浓度可为1mg/mL；所述空白血浆和所述稳定剂溶液、所述待测血浆和所述稳定剂溶液的体积比均可为(1
‑
20):1，较佳地为10:1。
[0028]本专利技术中，所述标曲样品中辛伐他汀标准品的系列浓度可为1、2.5、5、10、50、200、500和1000ng/mL。
[0029]本专利技术中，所述内标物工作液中内标物的浓度可为10
‑
100ng/mL，较佳地为10ng/mL。
[0030]本专利技术中，所述标曲样品和所述内标物工作液、所述待测样品和所述内标物工作液的体积比均可为1:(1
‑
20)，较佳地为1:4。
[0031]本专利技术中，所述液相色谱
‑
质谱联用法中的液相色谱可按照本领域常规的操作步骤进行，较佳地为采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱。
[0032]其中，所述流动相A可为含乙酸铵和甲酸的水溶液。
[0033]其中，所述流动相B可为极性有机溶剂。
[0034]所述流动相A和流动相B的选用可降低处理后的生物基质在辛伐他汀出峰位置的信号强度，同时提升辛伐他汀的峰信号，即提高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血浆中辛伐他汀的检测方法，其特征在于，其包含如下步骤：标曲样品和待测样品预处理后，进行液相色谱
‑
质谱联用法检测，建立标准曲线，计算浓度；其中，所述标曲样品包括辛伐他汀标准品、稳定剂、“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”和空白血浆；所述待测样品包括稳定剂和待测血浆；所述预处理包括：分别将所述标曲样品和所述待测样品与内标物工作液混合，离心取上清，以“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”稀释；所述稳定剂为敌敌畏；所述内标物工作液包括内标物和蛋白沉淀剂。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述空白血浆为大鼠空白血浆或比格犬空白血浆，例如SD大鼠EDTA
‑
K2空白血浆；和/或，所述“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”中乙腈和醋酸
‑
醋酸钠缓冲液的体积比为1:1；和/或，所述“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”中醋酸
‑
醋酸钠缓冲液的pH为3
‑
6，较佳地为4.5；和/或，所述内标物选自甲苯磺丁脲、双氯芬酸钠和拉贝洛尔中的任一种，较佳地为甲苯磺丁脲；和/或，所述蛋白沉淀剂选自甲醇、乙腈和体积比为1:1的甲醇/乙腈中的任一种，较佳地为乙腈。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其还包含如下步骤：所述标曲样品的制备包括：辛伐他汀标曲工作液、稳定剂溶液和空白血浆混合；所述待测样品的制备包括：稳定剂溶液和待测血浆混合；其中，所述辛伐他汀标曲工作液包括辛伐他汀标准品、溶剂和“乙腈/醋酸
‑
醋酸钠缓冲液”，所述稳定剂溶液包括稳定剂和溶剂。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述标曲样品的制备包括：所述稳定剂溶液和所述空白血浆混合后，再与所述辛伐他汀标曲工作液混合；和/或，所述辛伐他汀标曲工作液的制备包括：以所述溶剂溶解所述辛伐他汀标准品后，再以所述“乙腈和/醋酸
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醋酸钠缓冲液”稀释；和/或，所述稳定剂溶液的制备包括：所述稳定剂和所述溶剂混合；和/或，所述内标物工作液还包括溶剂；较佳地，所述内标物工作液的制备包括：以所述溶剂溶解所述内标物后，再以所述蛋白沉淀剂稀释。5.如权利要求4所述的检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王娜，黄钰敏，楼向南，陈木娣，彭海樱，
申请(专利权)人：深圳市益诺思生物医药安全评价研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：