一种叶酸及其八种杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种叶酸及其八种杂质的检测方法，涉及药物分析领域，本发明专利技术方法中通过对流动相、柱温、流速等色谱条件的优化改进，以及各个色谱条件的相互协同作用，从而得到对叶酸及其杂质专属性极高的检测分析方法。采用本发明专利技术方法进行叶酸杂质检测分析，不仅杂质C和杂质E于叶酸主成分间分离度良好，同时其他各组分分离度均大于1.5，专属性高，可以精确的对叶酸产品中的杂质进行定量检测分析。叶酸产品中的杂质进行定量检测分析。叶酸产品中的杂质进行定量检测分析。

【技术实现步骤摘要】
一种叶酸及其八种杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物领域，具体涉及一种叶酸及其八种杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]蝶酰谷氨酸又名叶酸，又叫维生素B9，淡黄色晶体，微溶于水、甲醇。叶酸在空气中相对稳定，受紫外光照射后易分解，酸性溶液对热不稳定，在中性和碱性环境中十分稳定。叶酸是一类六元杂环类苯甲酸衍生物，对DNA、嘌呤、嘧啶的合成具有重要作用。女性在怀孕初期的3个月叶酸补充不足会导致胎儿的神经管发育缺陷、早产和唇腭裂等先天畸形。
[0003]叶酸不能在人体合成，只能通过食物或膳食补充剂摄取，叶酸的不稳定性会导致自身降解，故合成产品纯度不高，而杂质的存在可能会引起毒副作用。因此对叶酸产品中的杂质进行分析监测至关重要。
[0004]为了保证药物的安全有效，需要对药物中的有关杂质进行研究、检测和监控。有关物质主要为工艺副产物及降解产物，药品在放置过程中，杂质谱在发生变化，因此需要根据不同的合成路线和生产工艺、储藏条件建立合适的检测方法，达到叶酸中有关物质准确，有效的检测和监控。叶酸及其八种杂质的结构如下所示：
[0005]叶酸结构：
[0006][0007]杂质A：
[0008](2S)
‑2‑
(4
‑
aminobenzamido)pentanedioic acid and(N
‑
(4
‑
aminobenzoyl)
‑
L
‑
glutamic acid)；
>[0009][0010]杂质B：
[0011]2,5,6
‑
triaminopyrimidin
‑
4(1H)
‑
one；
[0012][0013]杂质C：
[0014](2S)
‑2‑
[4
‑
[[(2
‑
amino
‑4‑
oxo
‑
1,4
‑
dihydropteridin
‑7‑
yl)]pentanedioic aicd(sofolic acid)；
[0015][0016]杂质D：
[0017]4‑
[[(2
‑
amino
‑4‑
oxo
‑
1,4
‑
dihydropteridin
‑6‑
yl)methyl]amino]benzocin acid(pteroic acid)；
[0018][0019]杂质E：
[0020](2S)
‑2‑
[4
‑
bis[(2
‑
amino
‑4‑
oxp
‑
1,4dihydropteridin
‑6‑
yl)amino]benzamido]pentanedoic acid(6
‑
pterinyfolic acid)；
[0021][0022]杂质F：
[0023]2‑
amino
‑7‑
(chloromethyl)pteridin
‑
4(1H)
‑
one；
[0024][0025]杂质G：
[0026](2S)
‑
[4
‑
[(2
‑
amino
‑7‑
methyl
‑4‑
oxo
‑
1,4
‑
dihydropterin
‑6‑
yl)amino]benzamido]pentanedioic acid；
[0027][0028]杂质H：
[0029](2S)
‑2‑
[4
‑
[4
‑
[[(2
‑
amino
‑4‑
oxo
‑
1,4
‑
dihydropteridin
‑6‑
yl)methyl]amino]benzamido]‑4‑
car boxybutanamido]benzamido]pentanedioic acid；
[0030][0031]现有技术中，《中国药典》2020版、《美国药典》43版和《英国药典》2020版等药典标准均记载有叶酸及其杂质采用高效液相色谱法进行分析测定。但是根据目前现有药典标准记载的方法进行检测分析，存在主成分与杂质分离度不高，尤其是杂质C和杂质E与叶酸主成分无法基线分离的问题，甚至在最终检测结果中，部分杂质并未出峰，无法进行含量测定。综上所述，可以看出由于现有技术中的叶酸检测方法专属性不高，导致叶酸产品很难进行杂质定量监测分析。

技术实现思路

[0032]为了解决以上技术问题，本专利技术通过以下技术方案来实现的：
[0033]一种叶酸及其八种杂质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙酸铵溶液(12:88)为流动相，柱温为25℃，检测波长为280nm。
[0034]所述乙酸铵溶液的为0.1mol/L的乙酸铵水溶液，采用醋酸溶液调节乙酸铵溶液pH值至6.5。
[0035]优选地，所述色谱柱规格为chromcore120 C8 5um 4.6*250mm。
[0036]所述色谱条件还包括流速为0.4ml/min。
[0037]一种叶酸及其八种杂质的检测方法，具体地，包括以下步骤：
[0038](1)主成分及各杂质对照品混合溶液的配置：称取叶酸原料药至容量瓶中，精密称定，加入28.6g/L碳酸钠溶液使其完全溶解后，分别加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G及杂质H各杂质对照品后，采用流动相进行定量稀释制成叶酸浓度为1mg/mL，各杂质浓度为5μg/mL的混合溶液；
[0039](2)取上述主成分及各杂质对照品混合溶液5μl进行进样，采用上述色谱条件进行检测分析。
[0040]本专利技术具有如下的有益效果：
[0041](1)本专利技术方法中通过对流动相、柱温、流速等色谱条件的优化改进，以及各个色谱条件的相互协同作用，从而得到对叶酸及其杂质专属性极高的检测分析方法。
[0042](2)采用本专利技术方法进行叶酸杂质检测分析，不仅杂质C和杂质E于叶酸主成分间分离度良好，同时其他各组分分离度均大于1.5，专属性高，可以精确的对叶酸产品中的杂质进行定量检测分析。
附图说明
[0043]图1是实施例1的高效液相色谱色谱图；
[0044]图2是实施例2的高效液相色谱色谱图；
[0045]图3是实施例3的高效液相色谱色谱图；
[0046]图4是实施例4的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种叶酸及其八种杂质的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇—乙酸铵溶液(12:88)为流动相，柱温为25℃，检测波长为280nm。2.根据权利要求1所述的叶酸及其八种杂质的检测方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的为0.1mol/L的乙酸铵水溶液。3.根据权利要求2所述的叶酸及其八种杂质的检测方法，其特征在于，采用醋酸溶液调节乙酸铵溶液pH值至6.5。4.根据权利要求1所述的叶酸及其八种杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱规格为chromcore120 C8 5um 4.6*250mm。5.根据权利要求1所述的叶酸及其八种杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括流速为0.4m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王娅，徐慧，杨方程，
申请(专利权)人：江苏开元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：