一种人制造技术

本发明专利技术提供了一种人

【技术实现步骤摘要】
一种人ISG15报告基因稳转细胞株及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种人
ISG15
报告基因稳转细胞株及其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]干扰素（
Interferon, IFN
）属于Ⅱ类细胞因子家族的一部分，该家族除
IFNs
之外，还包括
IL
‑
10
相关细胞因子
(IL
‑
10
，
IL
‑
19
，
IL
‑
20
，
IL
‑
22
，
IL
‑
24
和
IL
‑
26)。
基于序列同源性被分为三大类：Ⅰ型
、Ⅱ型和Ⅲ型
。
在人类中，
IFN
‑Ⅰ
家族由
IFN
‑
α
(
含
13
个亚型
)、IFN
‑
β
、IFN
‑
δ
、IFN
‑
ε
、IFN
‑
κ
、IFN
‑
τ
和
IFN
‑
ω1‑3组成
。IFN
‑Ⅱ
仅含
IFN
‑
γ
一个成员，<br/>2003
年首次从人类基因组序列中鉴定出
IFN
‑Ⅲꢀ
(
也被称为
IFN
‑
λ
)
家族，由
IFN
‑
λ1（
IL
‑
29
）
、IFN
‑
λ2（
IL
‑
28A
）
、IFN
‑
λ3（
IL
‑
28B
）和
IFN
‑
λ4组成
。IFN
‑Ⅰ
基因位于人类9号染色体，仅含1个外显子；而
IFN
‑Ⅲ
基因位于人类
19
号染色体，与其他
IL
‑
10
家族细胞因子共享5个保守的外显子，但在
IFN
‑
λ2和
IFN
‑
λ3基因中含额外的第6个外显子
。
对人类氨基酸序列比对发现，
IFN
‑Ⅲ
与
IL
‑
10
和
IFN
‑Ⅰ
的序列同源性较低，其中，与
IL
‑
10
的氨基酸同源性
11%
–
13%
；与
IFN
‑
α
和
IL
‑
22
的氨基酸同源性是
15%
‑
19%。
在人类4种
IFN
‑Ⅲ
中，
IFN
‑
λ2和
IFN
‑
λ3氨基酸同源性最高为
96%
，而
IFN
‑
λ1和
IFN
‑
λ2的氨基酸同源性为
81%
，
IFN
‑
λ4与以上3种
IFN
‑Ⅲ
的氨基酸同源性较低，仅具有
29%
同源性
。
[0003]IFN
‑Ⅰ
和
IFN
‑Ⅲ
均通过结合受体而诱导下游信号传导
。
所有
IFN
‑Ⅰ
通过共有的异二聚体受体
IFNAR (interferon
‑
alpha/beta receptor subunit
，
IFNAR)
激发信号，其中，
IFNAR
由
IFNAR1
和
IFNAR2
亚基组成
。IFN
‑Ⅰ
以高亲和力结合
IFNAR2
，然后募集低亲和力的
IFNAR1
，产生具有信号传导能力的
IFNAR1
‑
IFN
‑Ⅰ‑
IFNAR2
复合物
。IFN
‑Ⅲ
用于信号传导的异二聚体受体不同于
IFN
‑Ⅰ
，由
IFNLR1(interferon lambda receptor 1
，
IFNLR1)
链和
IL
‑
10R2
链组成
。
其中，
IFN
‑Ⅲ
和其他
IL
‑
10
家族细胞因子共享
IL
‑
10R2
链，该链是所有
IL
‑
10
家族异二聚体受体的一部分
。IFN
‑Ⅲ
与
IFNLR1
和
IL10R2
以
1︰1︰1
的化学计量比结合，而
IL
‑
10
与
IL10R1
和
IL10R2
的结合比值为
2︰1︰1。IFN
‑Ⅲ
以高亲和力结合
IFNLR1
，然后募集低亲和力的
IL
‑
10R2
，产生具有信号传导能力的
IFNLR1
‑
IFN
‑Ⅲ‑
IL
‑
10R2
复合物
。
[0004]IFN
‑Ⅰ
受体
IFNAR
广泛分布于各细胞表面，可产生全身性保护作用
。
不同于
IFN
‑Ⅰ
，
IFN
‑Ⅲ
受体中，虽然
IL
‑
10R2
链几乎存在于所有细胞表面，但
IFNLR1
链仅在特定组织或细胞中表达，由于单独的链无受体活性，只有两条链同时存在才能发挥受体作用，使得
IFNLR
的分布具有组织或细胞特异性
。IFN
‑Ⅲ
受体主要分布于上皮来源的细胞，包括呼吸道
、
肠道和生殖道上皮细胞
、
肺细胞
、
肝细胞和角质形成细胞等
。IFN
‑Ⅲ...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人
ISG15
报告基因稳转细胞株的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1) 制备人
ISG15
报告基因质粒：将人
ISG15
基因启动子序列插入至报告基因质粒中，从而获得人
ISG15
基因启动子驱动报告基因表达的人
ISG15
报告基因质粒；其中，所述的人
ISG15
基因启动子序列如
SEQ ID NO
：1所示；
(2) 将步骤
(1)
中制备的所述的人
ISG15
报告基因质粒转染至人上皮细胞中，所述人上皮细胞为
HNEPC
细胞；
(3) 根据所述质粒中携带的抗性基因，采用合适的抗生素对转染后的细胞进行抗性筛选，从而获得人
ISG15
报告基因稳转细胞
。2.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：
(4) 通过有限稀释法从步骤
(3)
的稳转细胞中筛选获得人
ISG15
报告基因稳转单克隆细胞株
。3.
如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述报告基因质粒为荧光素酶报告基因质粒
。4.
如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的荧光素酶报告基因质粒为
pGL6
‑
TA
，将人
ISG15
基因启动子序列插入至
pGL6
...

【专利技术属性】
技术研发人员：吁亭，万涛，陈国友，
申请(专利权)人：上海惠盾因泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：