【技术实现步骤摘要】
一种低脱靶碱基编辑器及其构建
[0001]本专利技术涉及生物技术和基因编辑
,具体涉及一种低脱靶碱基编辑器及其构建
。
技术介绍
[0002]基因组编辑是指在基因组层面对细胞进行有效设计与高效改造,
CRISPR/Cas9
基因组编辑技术因其设计简单
、
操作便捷
、
编辑效率高,目前已经成功的应用于多种目的细胞的基因组编辑研究
。CRISPR/Cas9
基因组编辑技术主要利用向导
RNA(guide RNA
,
gRNA)
引导
Cas9
蛋白在基因组的靶向位点进行精准切割造成
DNA
双链断裂
(double strand break
,
DSB)
,宿主细胞利用自身的非同源末端连接
(non
‑
homologous end
‑
joining
,
NHEJ)
或基于同源末端重组
(homologous end recombination repair
,
HDR)
进行修复,但难以实现针对单碱基的特定编辑
。
由于
DNA
的双链断裂具有很多的不确定性,
HDR
发生的概率很低,而
NHEJ
会引起碱基的随机插入或缺失,因此,传统的
CRISPR/Cas
技术在针对 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种碱基编辑器,含有或表达
Cas9
突变体,所述
Cas9
突变体为对
Cas9
的第
1010
‑
1031
位间的氨基酸残基进行突变得到的突变蛋白质,或为对
Cas9
的第
1010、1013、1014、1016、1018、1019、1027
和
/
或
1031
位氨基酸残基进行突变得到的突变蛋白质,或为对
Cas9
进行如下任一种或多种突变得到的突变蛋白质:
M1)
将
Cas9
第
1010
位的酪氨酸残基突变为天冬氨酸残基;
M2)
将
Cas9
第
1013
位的酪氨酸残基突变为天冬氨酸残基;
M3)
将
Cas9
第
1014
位的赖氨酸残基突变为脯氨酸残基;
M4)
将
Cas9
第
1016
位的酪氨酸残基突变为天冬氨酸残基;
M5)
将
Cas9
第
1018
位的缬氨酸残基突变为天冬氨酸残基;
M6)
将
Cas9
第
1019
位的精氨酸残基突变为天冬氨酸残基;
M7)
将
Cas9
第
1027
位的谷氨酰胺残基突变为天冬氨酸残基;
M8)
将
Cas9
第
1031
位的赖氨酸残基突变为天冬氨酸残基
。2.
根据权利要求1所述的碱基编辑器,其特征在于:所述
Cas9
为序列表中序列2或序列6所示的蛋白质
。3.
根据权利要求1或2所述的碱基编辑器,其特征在于:所述
Cas9
突变体为对
Cas9
进行
M1)、M2)、M4)、M5)、M6)、M7)
和
M8)
的七种突变得到的突变蛋白质,或为对
Cas9
进行
M1)、M2)、M5)、M7)
和
M8)
的五种突变得到的突变蛋白质,或为对
Cas9
进行
M1)
‑
M8)
的八种突变得到的突变蛋白质
。4.
根据权利要求1‑3中任一所述的碱基编辑器,其特征在于:所述碱基编辑器还含有或还表达靶向靶序列的
sgRNA
和
/
或具有碱基修饰活性的结构域
。5.
权利要求1‑4中任一所述
Cas9
突变体
。6.
与权利要求1‑4中任一所述
Cas9
突变体相关的生物材料,为下述
B1)
至
B5)
中的任一种:
B1)
编码权利要求1‑4中任一所述
Cas9
突变体的核酸分子;
B2)
含有
B1)
所述核酸分子的表达盒;
B3)
含有
B1)
所述核酸分子的重组载体
、
或含有
B2)
所述表达盒的重组载体;
B4)
含有
B1)
所述核酸分子的重组微生物
、
或含有
B2)
所述表达盒的重组微生物
、
或含有
B3)
所述重组载体的重组微生物;
B5)
含有
B1)
所述核酸分子的细胞系
、
或含有...
【专利技术属性】
技术研发人员:张学礼,毕昌昊,赵东东,侯雪亭,王杰,魏占东,陈旭旭,
申请(专利权)人:中国科学院天津工业生物技术研究所,
类型:发明
国别省市:
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