【技术实现步骤摘要】
质粒及PV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法
[0001]本专利技术属于生物
，涉及抗病毒药物筛选方法，尤其涉及一种质粒及
PV
蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法
。
技术介绍
[0002]绿色荧光蛋白（
GFP
）最初是在维多利亚多管发光水母（
Aequorea victoria
）中发现的，它在没有任何外源底物的情况下吸收蓝光并发出绿色荧光
。
在过去的二十年中，设计了几种改进荧光光谱的绿色荧光蛋白变体，包括增强型绿色荧光蛋白
EGFP、YFP、Venus
等
。
[0003]基于
GFP
的诸多优点，譬如广谱性
、
稳定性
、
易于载体构建与检测
、
无毒害，
GFP
在细胞筛选
、
基因表达
、
细胞标记
、
遗传跟踪等领域被广泛应用
。GFP
作为一种活体报告蛋白同时它的荧光强度很高，易于活体观测和用仪器进行定量检测
。GFP
主要由
11
股
β
链组成的桶状结构和其中的发色团组成，而发色团通过大量氢键稳定在中间位置
。
其三级结构对于荧光的产生是十分重要的，蛋白质变性及分离的发色团都无法产生荧光
。
通常情况下，为了不破坏
GFP
的三级结构，均是在其
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种可用于检测脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒，其特征在于，所述质粒包含改造的
GFP
荧光蛋白的编码核苷酸序列以及脊髓灰质炎病毒蛋白酶的编码核苷酸序列，所述的改造的
GFP
荧光蛋白内部包含可被脊髓灰质炎病毒蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列，所述可被脊髓灰质炎病毒蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列插入于野生型
GFP
荧光蛋白的位置包括
site1
，
site2
或者
site3
，
site1
位于如
SEQ ID NO.5
所示的氨基酸序列的
KQ
和
KN
之间，
site2
位于如
SEQ ID NO.6
所示的氨基酸序列的
EG
和
DT
之间，
site3
位于如
SEQ ID NO.7
所示的氨基酸序列的
QK
和
NG
之间；所述的脊髓灰质炎病毒蛋白酶为
3C。2.
根据权利要求1所述的可用于检测脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒，其特征在于，所述的脊髓灰质炎病毒蛋白酶的氨基酸序列如
SEQ ID NO.3
所示，所述蛋白酶切割序列包括：
cut1
如
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列或者
cut2
如
SEQ ID NO.2
所示的氨基酸序列
。3.
根据权利要求1或2所述的可用于检测脊髓灰质炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒，其特征在于，所述的野生型
GFP
...
【专利技术属性】
技术研发人员：武小琰，潜奕青，方晨捷，周毓绚，宋家升，
申请(专利权)人：浙江迪福润丝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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