【技术实现步骤摘要】
质粒及HCV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法
[0001]本专利技术属于生物
,涉及抗病毒药物筛选方法,尤其涉及一种质粒及
HCV
蛋白酶抑制剂筛选及药效评价的方法
。
技术介绍
[0002]绿色荧光蛋白
(Green fluorescent protein
,简称
GFP)
,是一个由约
238
个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色荧光
。
野生型绿色荧光蛋白,最开始是 238
个氨基酸的肽链,约 25KDa。
然后按一定规则,
11 条
β
‑
折叠在外周围成圆柱状的栅栏;圆柱中,
α
‑
螺旋把发色团固定在几乎正中心处
。
发色图被围在中心,能避免偶极化的水分子
、
顺磁化的氧分子或者顺反异构作用与发色团,致使荧光猝灭
。
[0003]荧光是荧光蛋白最特别的特点,而其中的发色团起着主要的作用
。
在 α
‑
螺旋上的 65、66、67
位氨基酸
——
丝氨酸
、
酪氨酸
、
甘氨酸经过环化
、
脱氢等作用后形成发色团
。
有意思的是,发色团形成过程是由外周栅栏上的残基催化,底物只需要氧气
。
这暗示绿色荧光蛋白被广泛用于不同物种的潜力:在不同物种 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种可用于检测丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒,其特征在于,所述质粒包含改造的
GFP
荧光蛋白的编码核苷酸序列以及丙型肝炎病毒蛋白酶的编码核苷酸序列,所述的改造的
GFP
荧光蛋白内部包含可被丙型肝炎病毒蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列,所述可被蛋白酶裂解的蛋白酶切割序列插入于野生型
GFP
荧光蛋白的位置包括
site1
与
site3
,
site1
位于如
SEQ ID NO.7
所示的氨基酸序列的
KQ
和
KN
之间,
site3
位于如
SEQ ID NO.9
所示的氨基酸序列的
QK
和
NG
之间,所述丙型肝炎病毒蛋白酶为
NS3/4A。2.
根据权利要求1所述的可用于检测丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒,其特征在于,所述的丙型肝炎病毒蛋白酶的氨基酸序列如
SEQ ID NO.5
所示,所述蛋白酶切割序列包括:
cut1
如
SEQ ID NO.1
所示的氨基酸序列或者
cut2
如
SEQ ID NO.2
所示的氨基酸序列
。3.
根据权利要求1或2所述的可用于检测丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂活性的质粒,其特征在于,所述的野生型
GFP
荧光蛋白的氨基酸序列如
SE...
【专利技术属性】
技术研发人员:方晨捷,武小琰,陈瑞婷,徐安文,宋家升,
申请(专利权)人:浙江迪福润丝生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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