【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗生产，特别涉及一种低毒性的cta黏膜佐剂及相应的重组ndv载体和疫苗。
技术介绍
1、新型冠状病毒(sars-cov-2，以下简称新冠病毒)具有高传染性和高隐蔽性，主要通过呼吸道黏膜感染人体，口鼻咽喉的腔道黏膜是新冠病毒入侵宿主的第一个据点。随着新冠疫情的发生发展，全球各国都意识到通过肌肉注射的疫苗有严重的短板，即无法在病毒入侵的第一道防线处产生iga黏膜抗体，以及所激发的igg抗体无法到达这些部位或分布极少。这就使得现有疫苗防重症而不能防止感染，引起大量新冠病毒无症状携带者，造成病毒进一步传播和变异。所以，必须研发能够通过呼吸道接种的黏膜免疫疫苗，才能够有效筑立起人群免疫屏障。
2、黏膜佐剂的选择对于黏膜免疫至关重要，一些细菌来源的物质已被用作黏膜疫苗的佐剂，首先，被证实具有极大潜力的黏膜佐剂是霍乱毒素(ct)。霍乱毒素(ct)由1个a亚基(cta)和5个b亚基(ctb)组成。虽然ctb无毒，但由于其对巨噬的负性免疫调节作用和弱的辅助作用，ctb可能不是一种很好的佐剂。相比之下，cta被证明是ct辅助活性不可或缺的组成部分。然而，cta通过g蛋白的adp-核糖基化导致电解质失衡，具有一定的毒性，所以长久以来，仍然没有安全有效的含cta黏膜佐剂的疫苗产品出现。在以往的研究中，降低cta细胞毒性的方法主要有两种，一是将多肽融合到cta1结构域，二是对其催化中心进行位点定向诱变，然而，目前为止，仍然没有真正可用于临床的黏膜佐剂。
技术实现思路
1、本专利技
2、本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
3、一种低毒性的cta黏膜佐剂，是对cta黏膜佐剂的氨基酸序列进行截短后形成，选自以下截短的cta中的一种：
4、cta黏膜佐剂氨基酸序列第55-59位缺失的ctaδ55～59，
5、cta黏膜佐剂氨基酸序列第65～69位缺失的ctaδ65～69，
6、cta黏膜佐剂氨基酸序列第70-74位缺失的ctaδ70～74，
7、cta黏膜佐剂氨基酸序列第85-89位缺失的ctaδ85～89，
8、cta黏膜佐剂氨基酸序列第95-99位缺失的ctaδ95～99，
9、cta黏膜佐剂氨基酸序列第100-104位缺失的ctaδ100～104，
10、cta黏膜佐剂氨基酸序列第110-114位缺失的ctaδ110～114，
11、cta黏膜佐剂氨基酸序列第140-144位缺失的ctaδ140～144，
12、cta黏膜佐剂氨基酸序列第180-184位缺失的ctaδ180～184，
13、cta黏膜佐剂氨基酸序列第185-189位缺失的ctaδ185～189；
14、所述cta黏膜佐剂氨基酸序列见seq id no.1所示。
15、区别于现有技术的方案，本专利技术通过对cta进行特定位置的截短，发现了一批低毒性的cta佐剂，能有效降低佐剂毒性，保证了安全性。
16、一种含低毒性的cta黏膜佐剂基因的重组ndv载体，所述重组ndv载体包含ndv载体编码核苷酸序列，以及低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列。
17、作为一种实施方式，低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列选自以下截短的cta所对应的编码核苷酸序列中的一种：
18、cta黏膜佐剂氨基酸序列第55-59位缺失的ctaδ55～59，
19、cta黏膜佐剂氨基酸序列第65～69位缺失的ctaδ65～69，
20、cta黏膜佐剂氨基酸序列第70-74位缺失的ctaδ70～74，
21、cta黏膜佐剂氨基酸序列第85-89位缺失的ctaδ85～89，
22、cta黏膜佐剂氨基酸序列第95-99位缺失的ctaδ95～99，
23、cta黏膜佐剂氨基酸序列第100-104位缺失的ctaδ100～104，
24、cta黏膜佐剂氨基酸序列第110-114位缺失的ctaδ110～114，
25、cta黏膜佐剂氨基酸序列第140-144位缺失的ctaδ140～144，
26、cta黏膜佐剂氨基酸序列第180-184位缺失的ctaδ180～184，
27、cta黏膜佐剂氨基酸序列第185-189位缺失的ctaδ185～189；
28、所述cta黏膜佐剂氨基酸序列见seq id no.1所示。
29、一种含低毒性的cta黏膜佐剂基因的重组ndv载体，所述重组ndv载体包含ndv载体编码核苷酸序列，低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列，以及抗原基因。
30、作为优选，低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列选自以下截短的cta所对应的编码核苷酸序列中的一种：
31、cta黏膜佐剂氨基酸序列第55-59位缺失的ctaδ55～59，
32、cta黏膜佐剂氨基酸序列第65～69位缺失的ctaδ65～69，
33、cta黏膜佐剂氨基酸序列第70-74位缺失的ctaδ70～74，
34、cta黏膜佐剂氨基酸序列第85-89位缺失的ctaδ85～89，
35、cta黏膜佐剂氨基酸序列第95-99位缺失的ctaδ95～99，
36、cta黏膜佐剂氨基酸序列第100-104位缺失的ctaδ100～104，
37、cta黏膜佐剂氨基酸序列第110-114位缺失的ctaδ110～114，
38、cta黏膜佐剂氨基酸序列第180-184位缺失的ctaδ180～184，
39、所述cta黏膜佐剂氨基酸序列见seq id no.1所示。
40、采用上述优选的低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列，与抗原基因组合形成重组载体，进一步得到重组病毒，免疫原性与全长的cta相比没有明显差异，保证免疫效果的同时能有效降低毒性，保证了安全性。
41、作为优选，抗原基因为新型冠状病毒s蛋白重组蛋白的编码核苷酸序列。需要指出的是，新型冠状病毒s蛋白重组蛋白仅是一种实施代表，相关专业人员可以依照本专利技术的毒株构建模式，选用其他类型抗原进行重组ndv病毒构建，均属于本专利技术的保护范围。
42、作为优选，新型冠状病毒s蛋白重组蛋白包括dels2p/gsas-ap7，dels2p/gsas-ap7的氨基酸序列见seq id no.2所示。本专利技术选择delta变异株的s蛋白重组蛋白可产生较广谱的中和抗体，同时，其免疫原性相比其他变异株也较优异。del代表delta变异株。需要指出的是，dels2p/gsas-ap7仅是一种实施代表，相关专业人员可以依照本专利技术的毒株构建模式，选用其他类型新冠病毒变异株的s蛋白序列进行重组ndv病毒构建，均属于本专利技术的保护本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种低毒性的CTA黏膜佐剂，其特征在于，是对CTA黏膜佐剂的氨基酸序列进行截短后形成，选自以下截短的CTA中的一种：
2.一种含低毒性的CTA黏膜佐剂基因的重组NDV载体，其特征在于：所述重组NDV载体包含NDV载体编码核苷酸序列，以及低毒性的CTA黏膜佐剂的编码核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的重组NDV载体，其特征在于：低细胞毒性的CTA黏膜佐剂的编码核苷酸序列选自以下截短的CTA所对应的编码核苷酸序列中的一种：
4.一种含低毒性的CTA黏膜佐剂基因的重组NDV载体，其特征在于：所述重组NDV载体包含NDV载体编码核苷酸序列，低毒性的CTA黏膜佐剂的编码核苷酸序列，以及抗原基因。
5.根据权利要求4所述的重组NDV载体，其特征在于：低毒性的CTA黏膜佐剂的编码核苷酸序列选自以下截短的CTA所对应的编码核苷酸序列中的一种：
6.根据权利要求5所述的重组NDV载体，其特征在于：抗原基因为新型冠状病毒S蛋白重组蛋白的编码核苷酸序列，新型冠状病毒S蛋白重组蛋白包括delS2P/GSAS-AP7，delS2P/GSAS
7.一种含低毒性的CTA黏膜佐剂基因的重组NDV病毒，其特征在于，由权利要求4-6所述的重组NDV载体经反向遗传学技术拯救得到。
8.一种预防新型冠状病毒传播和感染的疫苗，其特征在于，包括权利要求7所述的含低毒性的CTA黏膜佐剂基因的重组NDV病毒。
...【技术特征摘要】
1.一种低毒性的cta黏膜佐剂，其特征在于，是对cta黏膜佐剂的氨基酸序列进行截短后形成，选自以下截短的cta中的一种：
2.一种含低毒性的cta黏膜佐剂基因的重组ndv载体，其特征在于：所述重组ndv载体包含ndv载体编码核苷酸序列，以及低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的重组ndv载体，其特征在于：低细胞毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列选自以下截短的cta所对应的编码核苷酸序列中的一种：
4.一种含低毒性的cta黏膜佐剂基因的重组ndv载体，其特征在于：所述重组ndv载体包含ndv载体编码核苷酸序列，低毒性的cta黏膜佐剂的编码核苷酸序列，以及抗原基因。
5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙慧敏，简书令，方晨捷，毛水花，武小琰，宋家升，
申请(专利权)人：浙江迪福润丝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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