【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药材料，更具体地说，它涉及一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法。
技术介绍
1、癌症是全球第二大死因，2021年全球新发病例超过2000万。目前，常用的乳腺癌治疗方法是切除乳房的halsted乳癌根治术，然而手术对于转移病灶无效，多数乳腺癌死亡病例是由于病灶转移所致。此外，乳腺癌实体瘤的致密肿瘤外基质限制了放疗和化疗药物的渗透，导致治疗效果差且副作用严重。因此，迫切需要寻找新的乳腺癌治疗手段。
2、在肿瘤治疗的研究中，光动力治疗(pdt)作为一种新兴的治疗方法，获得了一定的应用。光动力治疗的作用机制是利用特定波长的光激活光敏剂与肿瘤组织中的氧气分子发生反应，产生活性氧物质(ros)，从而杀伤肿瘤细胞。此外，pdt还能通过免疫原性细胞死亡机制激活肿瘤免疫反应，进一步杀伤肿瘤细胞。相比传统治疗方法，光动力治疗具有高效杀伤肿瘤细胞的优势，同时副作用相对较小，因此被认为是一种相对安全的治疗手段。
3、目前，乳腺癌常用的治疗方法是halsted乳癌根治术，需要切除乳房，给女性带来心理和生理的极大创伤。然而，手术无法有效治疗转移病灶，而多数乳腺癌死亡病例正是因为病灶转移导致。此外，由于乳腺癌实体瘤的致密肿瘤外基质，放疗和化疗药物难以渗透，治疗效果不佳并且副作用严重。光动力治疗作为一种相对安全的新兴治疗手段，已经在肿瘤临床治疗中得到了一定应用。然而，在应用光动力治疗治疗乳腺癌时存在以下局限性：首先，难以高效、深入地递送光敏剂到乳腺癌病灶部位；其次，光动力治疗需要激光的定点照射，具有较强的
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，以解决现有技术中难以将光敏剂高效、深层递送入乳腺癌病灶部位以及pdt需激光定点照射，具有强大的空间选择性，因此对转移病灶治疗效果差等问题。
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，将光敏剂二氢卟吩e6进行线粒体靶向修饰，然后将其与sting蛋白激动剂静电吸附制备内核纳米粒。
3、通过采用上述技术方案，本专利技术通过构建可注射的纳米体系hcs-nps，将sting蛋白激动剂和光敏剂结合在一起，实现光动力治疗与sting蛋白激动剂介导的免疫治疗的联合应用来治疗乳腺癌的方法；hcs-nps纳米体系被注射到小鼠乳腺癌原发肿瘤的位置，然后通过激光照射来实施光动力治疗，光动力治疗利用光敏剂的特殊特性，在特定的波长下产生活性氧化物ros，以破坏肿瘤细胞；sting蛋白激动剂的存在可以激活免疫系统，提高肿瘤细胞的免疫原性，通过激活sting蛋白，可以诱导机体产生炎症反应并释放免疫激活因子，从而增强机体对肿瘤的免疫反应；这种联合治疗的方法可以同时通过pdt的免疫细胞死亡效应icd以及sting蛋白激动剂的强大免疫激活作用，将乳腺癌从低免疫原性的“冷”肿瘤转变为高免疫原性的“热”肿瘤，这样可以实现对转移病灶的有效杀伤。
4、本专利技术的另一目的是提供一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，即tpp-pei-ce6的合成方法，包括以下步骤：
5、s1：称取光敏剂二氢卟吩e6，即ce6、聚乙烯亚胺，即pei、3-羧丙基三苯基溴化膦，即tpp、n-羟基琥珀酰亚胺，即nhs、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，即edc，加入无水dmso中，避光搅拌；
6、s2：将s1所得加入mw＝1000的透析袋中透析纯化，即得tpp-pei-ce6；
7、s3：以甲醇为稀释剂，测定ce6含量；
8、s4：根据ce6含量计算ce6接枝率，最后将s2所合成的tpp-pei-ce6冻干，避光保存备用。
9、本专利技术进一步设置为：所述步骤s1中称取各物质ce6：pei：tpp：nhs：edc的重量比为：15：36：20：35：57。
10、本专利技术进一步设置为：所述步骤s1中避光搅拌的时间为48小时。
11、本专利技术进一步设置为：所述步骤s2中透析袋中透析的时间为48小时。
12、本专利技术进一步设置为：所述步骤s4中避光保存备用的温度为4℃。
13、通过采用上述技术方案，通过将二氢卟吩e6与三苯基溴化膦(tpp)结合，得到tpp-pei-ce6纳米体系，能够实现对线粒体的靶向修饰。这种修饰能够提高二氢卟吩e6在肿瘤细胞内的富集，增强光敏剂的作用效果；本专利技术中使用的成分比例以及反应条件均可根据需要进行调整。这使得合成方法具有灵活性和可控性，可以根据具体的研究目的进行优化；本专利技术中的合成方法使用了常见的化学试剂和溶剂，并在透析袋中进行透析。这种合成方法简单方便，操作上相对容易，可以在实验室中较快地实施；冻干处理和避光保存可以提高tpp-pei-ce6的稳定性，防止其失活或降解，这使得合成的纳米体系可以长时间保存，并在需要时方便地使用，这样可以获得具有线粒体靶向修饰的tpp-pei-ce6纳米体系，该体系具有高效的肿瘤细胞内富集效果，并且合成方法简单灵活。
14、本专利技术的另一目的是提供一种sting蛋白激动剂及光敏剂的纳米体系的制备方法，即hcs-nps纳米系统的制备方法，包括以下步骤：
15、ss1：将权利要求2-6中任意一项制备的tpp-pei-ce6与sting蛋白激动剂静置混合；
16、ss2：将s1所得混合物质中加入透明质酸搅拌，即得hcs-nps纳米粒。
17、本专利技术进一步设置为：所述步骤ss1中tpp-pei-ce6和sting蛋白激动剂与所述步骤ss2中透明质酸的重量比5：1：15。
18、本专利技术进一步设置为：所述步骤ss1中sting蛋白激动剂具体为2`,3`-环尿苷酸腺苷单磷酸，为环二核苷酸类sting蛋白激动剂。
19、本专利技术进一步设置为：所述步骤ss1中混合物质静置的时间为20min。
20、通过采用上述技术方案，本专利技术通过在纳米体系中引入不同的光敏剂和sting蛋白激动剂，可以实现多种组合治疗策略，根据具体的疾病类型和治疗需求进行优化选择，纳米体系的合成方法中的成分比例和反应条件也可进行调整，具有灵活性和可控性；采用透明质酸作为纳米粒载体，具有良好的稳定性和生物相容性。透明质酸具有较低的毒性和免疫原性，能够保证纳米体系的生物安全性；制备hcs-nps纳米体系的方法简化了传统的纳米载体制备方法，操作相对简便，适用于实验室规模的制备，该方法还具有很好的可扩展性，可以进行大规模的制备，满足进一步的研究和临床应用需求。
21、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
22、1.本专利技术将具有线粒体靶向修饰的光敏剂(tpp-pei-ce6)与sting蛋白激动剂结合，形成了hcs-nps纳米体系，这种纳米体系能够在肿瘤细胞内实现双重治疗效果，既能通过光敏剂产生光治疗效应，又能通过sting蛋白激动剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，其特征是：将光敏剂二氢卟吩e6进行线粒体靶向修饰，然后将其与STING蛋白激动剂静电吸附制备内核纳米粒。
2.根据权利要求1所述的一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，即TPP-PEI-Ce6的合成方法，其特征是：包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，其特征是：所述步骤S1中称取各物质Ce6：PEI：TPP：NHS：EDC的重量比为：15：36：20：35：57。
4.根据权利要求2所述的一一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，其特征是：所述步骤S1中避光搅拌的时间为48小时。
5.根据权利要求2所述的一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，其特征是：所述步骤S2中透析袋中透析的时间为48小时。
6.根据权利要求2所述的一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，其特征是：所述步骤S4中避光保存备用的温度为4℃。
7.根据权利要求1所述的一种STING蛋白激动剂及光敏剂的纳米体系的制备方法
8.根据权利要求7所述的一种STING蛋白激动剂及光敏剂的纳米体系的制备方法，其特征是：所述步骤SS1中TPP-PEI-Ce6和STING蛋白激动剂与所述步骤SS2中透明质酸的重量比5：1：15。
9.根据权利要求1所述的一种STING蛋白激动剂及光敏剂的纳米体系的制备方法，其特征是：所述步骤SS1中STING蛋白激动剂具体为2`,3`-环尿苷酸腺苷单磷酸，为环二核苷酸类STING蛋白激动剂。
10.根据权利要求1所述的一种STING蛋白激动剂及光敏剂的纳米体系的制备方法，其特征是：所述步骤SS1中混合物质静置的时间为20min。
...【技术特征摘要】
1.一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，其特征是：将光敏剂二氢卟吩e6进行线粒体靶向修饰，然后将其与sting蛋白激动剂静电吸附制备内核纳米粒。
2.根据权利要求1所述的一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，即tpp-pei-ce6的合成方法，其特征是：包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，其特征是：所述步骤s1中称取各物质ce6：pei：tpp：nhs：edc的重量比为：15：36：20：35：57。
4.根据权利要求2所述的一一种光敏剂二氢卟吩e6线粒体靶向的修饰方法，其特征是：所述步骤s1中避光搅拌的时间为48小时。
5.根据权利要求2所述的一种光动力免疫联合治疗乳腺癌的纳米体系的制备方法，其特征是：所述步骤s2中透析袋中透析的时间为48小时。
6.根据权利要求2所述的一种光...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨成莉，周雅迪，夏彬一，廖旭坤，曹勇，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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