基于双重组酶系统的小鼠脑海绵状血管畸形模型的构建方法及其应用技术方案

本发明专利技术公开了基于双重组酶系统的小鼠脑海绵状血管畸形模型的构建方法及其应用

【技术实现步骤摘要】
2020
‑9‑
22)
的第
3853184
‑
3891359
位的核苷酸序列，
Ccm1
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC 000071.7(Update Date 2020
‑9‑
22)
的第
3857531
‑
3857580
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的
DNA
分子，且将第
3863106
‑
3863175
位序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm1
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm1
突变基因；
[0012]所述
Ccm2
fl/fl
小鼠是将
C57BL/6J
小鼠的
Ccm2
基因替换为
Ccm2
fl
等位基因的纯合子小鼠；所述
Ccm2
基因所在基因组序列是
GenBank Accession No.NC000077.7(Update Date 2020
‑9‑
22)
的第
6496887
‑
6546744
位的核苷酸序列，
Ccm2
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC000077.7(Update Date 2020
‑9‑
22)
的第
6520120
‑
6520208
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，且将第
6535213
‑
6535277
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm2
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm2
突变基因；
[0013]所述
Ccm3
fl/fl
小鼠是将
C57BL/6J
小鼠的
Ccm3
基因替换为
Ccm3
fl
等位基因的纯合子小鼠；所述
Ccm3
基因所在基因组序列是
GenBank Accession No.NC_000069.7(Update Date 2020
‑9‑
22)
的第
75464163
‑
75423797
位的核苷酸序列，
Ccm3
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC_000069.7(Update Date 2020
‑9‑
22)
的第
75440823
‑
75440899
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，且将第
75423713
‑
75423797
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm3
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm3
突变基因；
[0014]所述
Tie2
‑
Dre
小鼠为脑组织内皮细胞特异性表达
Dre
重组酶的转基因小鼠；
[0015]2)
选择所述
F1代小鼠中的双阳性杂合子小鼠，命名为
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/+
小鼠，所述
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/+
小鼠的一条染色体携带所述
Ccm
基因，另一条染色体携带所述
Ccm
fl
等位基因，且所述
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/+
小鼠在脑组织内皮细胞特异性表达
Dre
重组酶；所述
Ccm
基因为
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3
；所述
Ccm
fl
等位基因为
Ccm1
fl
、Ccm2
fl
或
Ccm3
fl
等位基因；
[0016]所述
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/+
小鼠和所述
Ccm
fl/fl
小鼠交配得到
F2
代小鼠；
[0017]选择所述
F2
代小鼠中的双阳性纯合子小鼠，命名为
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/fl
小鼠，所述
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/fl
小鼠的两条染色体均携带所述
Ccm
fl
等位基因，且所述
Tie2
‑
Dre/+Ccm
fl/fl
小鼠在脑组织内皮细胞特异性表达
Dre
重组酶；
[0018]3)
将所述
Ccm
fl/fl
小鼠和
Mfsd2a
‑
CrexER
小鼠交配得到
F1代小鼠；所述
Mfsd2a
‑
CrexER
小鼠为脑组织内皮细胞特异性表达
Cre
重组酶的转基因小鼠；选择所述
F1代小鼠中的双阳性杂合子小鼠，命名为
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/+
小鼠，所述
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/+
小鼠的一条染色体携带所述
Ccm
基因，另一条染色体携带所述
Ccm
fl
等位基因，且所述
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/+
小鼠在脑组织内皮细胞特异性表达
Cre
重组酶；
[0019]所述
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/+
小鼠和所述
Ccm
fl/fl
小鼠交配得到
F2代小鼠；
[0020]选择所述
F2代小鼠中的双阳性纯合子小鼠，命名为
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/fl
小鼠，所述
Mfsd2a
‑
CrexER/+Ccm
fl/fl
小鼠的两条染色体均携带所述
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
构建脑海绵状血管畸形小鼠模型的方法，包括降低或抑制小鼠脑组织内皮细胞中
Ccm
基因的表达量或
/
和
Ccm
蛋白质的活性，得到所述脑海绵状血管畸形小鼠模型；所述
Ccm
基因为
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述降低或抑制脑组织内皮细胞中
Ccm
基因的表达量或
/
和
Ccm
蛋白质的活性为特异性敲除小鼠脑组织内皮中的
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3
基因
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述特异性敲除小鼠脑组织内皮中的
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3
基因为特异性敲除小鼠脑组织内皮细胞基因组中
Ccm1
基因中的第4‑8外显子
、Ccm2
基因中的第3‑4外显子或
Ccm3
基因中的第4‑8外显子
。4.
根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述特异性敲除小鼠脑组织内皮中的
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3
基因包括采用
Dre
‑
Rox
和
Cre
‑
LoxP
双重组酶系统特异性敲除所述受体小鼠脑组织内皮中的
Ccm1、Ccm2
或
Ccm3
基因
。5.
根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述脑海绵状血管畸形小鼠模型的构建方法包括如下步骤：
1)
将
Ccm
fl/fl
小鼠和
Tie2
‑
Dre
小鼠交配得到
F1代小鼠；所述
Ccm
fl/fl
小鼠为
Ccm1
fl/fl
小鼠
、Ccm2
fl/fl
小鼠或
Ccm3
fl/fl
小鼠；所述
Ccm1
fl/fl
小鼠是将
C57BL/6J
小鼠的
Ccm1
基因替换为
Ccm1
fl
等位基因的纯合子小鼠；所述
Ccm1
基因所在基因组序列是
GenBank Accession No.NC 000071.7
的第
3853184
‑
3891359
位的核苷酸序列，
Ccm1
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC 000071.7
的第
3857531
‑
3857580
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的
DNA
分子，且将第
3863106
‑
3863175
位序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm1
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm1
突变基因；所述
Ccm2
fl/fl
小鼠是将
C57BL/6J
小鼠的
Ccm2
基因替换为
Ccm2
fl
等位基因的纯合子小鼠；所述
Ccm2
基因所在基因组序列是
GenBank Accession No.NC000077.7
的第
6496887
‑
6546744
位的核苷酸序列，
Ccm2
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC000077.7
的第
6520120
‑
6520208
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，且将第
6535213
‑
6535277
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm2
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm2
突变基因；所述
Ccm3
fl/fl
小鼠是将
C57BL/6J
小鼠的
Ccm3
基因替换为
Ccm3
fl
等位基因的纯合子小鼠；所述
Ccm3
基因所在基因组序列是
GenBank Accession No.NC_000069.7
的第
75464163
‑
75423797
位的核苷酸序列，
Ccm3
fl
等位基因是将基因组序列
GenBank Accession No.NC_000069.7
的第
75440823
‑
75440899
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，且将第
75423713
‑
75423797
位核苷酸序列替换为序列表中序列1所示的分子，并保持所述
Ccm3
基因的其它核苷酸序列不变得到的
Ccm3
突变基因；所述
Tie2
‑
Dre
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑祥建，杨希，
申请(专利权)人：天津医科大学，
类型：发明
国别省市：