一种制备高纯度的成熟人树突状细胞的方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种制备高纯度、成熟人树突状细胞的方法及应用，具体地，本发明专利技术通过单核细胞诱导分化为高纯度的非成熟树突状细胞、非成熟树突状细胞摄取加工抗原、非成熟树突状细胞诱导为成熟树突状细胞几个环节，使得制备的树突状细胞具有高纯度、高得率，可有效摄取加工抗原，诱导活化抗原特异性的CTL杀伤肿瘤细胞。诱导活化抗原特异性的CTL杀伤肿瘤细胞。诱导活化抗原特异性的CTL杀伤肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种制备高纯度的成熟人树突状细胞的方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物技术和细胞治疗领域，具体地，本专利技术涉及一种高纯度的成熟人树突状细胞的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]树突状细胞(Dendritic cells，DC)是1973年由美国Steinman首先发现的，因其成熟时伸出许多树突状或伪足样突起而得名。DC是目前所知抗原提呈功能最强的APC，最大的特点是能够刺激初始T细胞(na
ï
ve T cell)活化和增殖，而Mφ、B细胞等仅能刺激已活化的T细胞或记忆T细胞，因此，DC是特异性免疫应答的始动者，在免疫系统中占有独特地位。
[0003]DC可由骨髓中髓样干细胞和淋巴样干细胞分化而来，分别称为髓系DC(myeloid DC,MDC)、淋巴系DC(lymphoid DC，LDC)，大多数DC来源于骨髓，由骨髓进入外周血，再分布到全身组织。DC广泛分布于脑以外的全身各器官，数量少，仅占外周血单个核细胞的1%以下，占小鼠脾细胞的0.2%
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0.5%。根据DC的成熟状态，可将DC分为D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导单核细胞分化为树突状细胞的方法，其特征在于，包括步骤：(a) 提供一经终浓度为1
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10ug/mL的重组人纤维连接蛋白片段试剂包被的培养瓶；(b) 在所述经包被的培养瓶中，在含100ng/ml
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400ng/ml的rhGM
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CSF的第一基础培养基的培养体系中，培养单个核细胞1
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4小时，从而使得单个核细胞中的单核细胞贴壁于所述培养瓶；(c) 将所述培养体系中贴壁的单核细胞与悬浮的细胞进行分离，并对所述培养瓶贴壁的单核细胞进行洗涤，从而去除残留的悬浮细胞，获得经分离的贴壁单核细胞；(d) 在添加了血清替代品或AB型血清、rhGM
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CSF、和rhIL
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4的第二基础培养基中，并在合适的培养条件下，对上一步骤获得的经分离的贴壁单核细胞进行培养3
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5天后，从而获得纯度大于80%的非成熟树突状细胞；(e)用感兴趣的抗原对所述非成熟树突状细胞进行致敏处理，从而获得经所述抗原致敏的非成熟树突状细胞；和(f)将步骤(e)获得的经抗原致敏的非成熟树突状细胞，在添加了5
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15μg/ml PGE2，500
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1500IU/ml TNFα，和1
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10μg/ml CD40L的第三基础培养基中，并在合适的培养条件下，培养16
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60小时后，从而获得...

【专利技术属性】
技术研发人员：吁亭，蒋应明，陈国友，
申请(专利权)人：上海惠盾因泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：