【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体地，涉及一种survivin阳性肿瘤的个体化树突状细胞疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、脑胶质瘤是指起源于脑神经胶质细胞的肿瘤，是最常见的原发性颅内肿瘤，2021年版who中枢神经系统肿瘤分类将脑胶质瘤分为1～4 级，1、2级为低级别脑胶质瘤，低级别胶质瘤约占脑胶质瘤的30%，3、4 级为高级别脑胶质瘤。胶质母细胞瘤（glioblastoma，gbm）是颅内最常见的原发恶性肿瘤，约占所有脑胶质瘤的57%。根据《脑胶质瘤诊疗指南（2022年版）》，我国脑胶质瘤年发病率为5~8/10万，5年病死率在全身肿瘤中仅次于胰腺癌和肺癌，据此估算，我国每年新发胶质母细胞瘤患者为4~6万左右。在儿童肿瘤发病中，脑胶质瘤排名第二，仅次于白血病。
2、近年来，虽然神经外科手术技术、影像诊断技术、放疗、化疗等方面取得了较大进展，短期生存率有明显进步，如在美国，gbm患者1年生存期从2000-2004年的34.4%，提高至2005-2014年的44.6%，但是中位生存期仍只有15~17个月，5年存活率仍基本不变，目前仍为5.8%（tan, aaron c et al. “management of glioblastoma: state of the art andfuture directions.” ca: a cancer journal for clinicians vol. 70,4 (2020):299-312.）。此外，标准的同步放化疗加辅助治疗后，大部分gbm患者在6个月内复发，目前尚无针对标准治
3、因此，专利技术一种覆盖人群广，有效治疗胶质母细胞瘤的治疗方案，在临床上有重大意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种治疗survivin阳性肿瘤的树突状细胞疫苗，以及制备所述疫苗的方法。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种衍生于抗原蛋白survivin的多肽，所述多肽包含野生型survivin氨基酸93-107位多肽在97位的苏氨酸改变为甲硫氨酸后得到的多肽，所述野生型survivin氨基酸93-107位多肽的氨基酸序列如seq id no: 2所示。
3、在另一优选例中，所述多肽包含如seq id no: 1所示的氨基酸序列，以及与seqid no: 1具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。
4、在另一优选例中，所述多肽用作树突状细胞致敏抗原。
5、在另一优选例中，所述多肽用于致敏成熟树突状细胞。
6、本专利技术的第二方面,提供了一种制备用于治疗survivin阳性肿瘤的树突状细胞的方法，所述方法包括步骤：采用如本专利技术第一方面所述的衍生于抗原蛋白survivin的多肽和/或survivin阳性肿瘤裂解物致敏树突状细胞。
7、在另一优选例中，所述方法具体包括以下步骤：
8、(1) 将分离的单个核细胞培养2-20小时后，去除悬浮的未贴壁细胞，从而获得贴壁的单核细胞；继续培养所述贴壁的单核细胞至第5天，从而获得未成熟树突状细胞；
9、(2) 收获所述未成熟树突状细胞，计数并重悬后，继续培养；
10、(3) 向培养至第6天的未成熟树突状细胞的培养液中加入促成熟因子，刺激未成熟树突状细胞成熟；
11、(4) 继续培养至第7-8天得到成熟树突状细胞，采用如本专利技术第一方面所述的衍生于抗原蛋白survivin的多肽和/或survivin阳性肿瘤裂解物致敏所述成熟树突状细胞4-8小时，收获细胞，从而获得致敏的成熟树突状细胞，即为所述用于治疗survivin阳性肿瘤的树突状细胞。
12、在另一优选例中，所述单个核细胞来源于健康人的外周血。
13、在另一优选例中，在步骤(1)中，使用含5%~10%（v/v）自体血浆、100~1000ng/mlil-4、100~1000ng/ml gm-csf的完全培养基培养贴壁的单核细胞。
14、在另一优选例中，在步骤(2)中，使用含5%~10%（v/v）自体血浆、100~1000ng/mlil-4、100~1000ng/ml gm-csf的完全培养基重悬并培养未成熟树突状细胞。
15、在另一优选例中，所述完全培养基选自rmpi 1640、x-vivo、lymgro、cellgenixgmp dc或其他培养基。
16、在另一优选例中，所述完全培养基为rmpi 1640培养基。
17、在另一优选例中，在步骤(2)中，重悬后的未成熟树突状细胞的浓度为2-10×105/ml。
18、在另一优选例中，在步骤(2)中，还包括用survivin阳性肿瘤裂解物致敏未成熟树突状细胞的步骤。
19、在另一优选例中，在步骤(2)中，致敏未成熟树突状细胞时，所述survivin阳性肿瘤裂解物的工作浓度为30~100μg/ml，较佳地，为50μg/ml。
20、在另一优选例中，在步骤(3)中，所述促成熟因子选自下组：5-20μg/ml poly i:c、5-15μg/ml pge2、1000-2000iu/ml tnf-α、或其组合；
21、较佳地，选自5-20μg/ml poly i:c、5-15μg/ml pge2和1000-2000iu/ml tnf-α，5-15μg/ml的pge2和5-20μg/ml的poly i:c，或5-15μg/ml pge2和1000-2000iu/ml tnf-α和5-20μg/ml的poly i:c；
22、最佳地，为5-15μg/ml pge2和1000-2000iu/ml tnf-α和5-20μg/ml的poly i:c。
23、在另一优选例中，在步骤(4)中，致敏成熟树突状细胞时，所述成熟树突状细胞的浓度为1×1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种衍生于抗原蛋白Survivin的多肽，其特征在于，所述多肽为野生型Survivin氨基酸93-107位多肽在97位的苏氨酸改变为甲硫氨酸后得到的多肽，所述野生型Survivin氨基酸93-107位多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。
2.一种制备用于治疗Survivin阳性肿瘤的树突状细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：采用如权利要求1所述的衍生于抗原蛋白Survivin的多肽致敏树突状细胞。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，还包括用Survivin阳性肿瘤裂解物致敏未成熟树突状细胞的步骤。
5.一种树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞由权利要求2-4任一项所述的方法制备得到。
6. 一种Survivin阳性肿瘤的治疗性疫苗，其特征在于，所述疫苗含有：(a) 如权利要求5所述的树突状细胞；和(b) 药学上可接受的载体。
7.如权利要求6所述的治疗性疫苗，其特征在于，所述Survivin阳性肿
8.一种如权利要求1所述的衍生于抗原蛋白Survivin的多肽在制备用于治疗Survivin阳性肿瘤的树突状细胞疫苗中的用途。
9.一种体外诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的方法，包括步骤：将如权利要求5所述的树突状细胞与T淋巴细胞共培养。
10.一种如权利要求5所述的树突状细胞在制备用于治疗Survivin阳性肿瘤的药物中的用途；
...【技术特征摘要】
1.一种衍生于抗原蛋白survivin的多肽，其特征在于，所述多肽为野生型survivin氨基酸93-107位多肽在97位的苏氨酸改变为甲硫氨酸后得到的多肽，所述野生型survivin氨基酸93-107位多肽的氨基酸序列如seq id no: 2所示。
2.一种制备用于治疗survivin阳性肿瘤的树突状细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：采用如权利要求1所述的衍生于抗原蛋白survivin的多肽致敏树突状细胞。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，还包括用survivin阳性肿瘤裂解物致敏未成熟树突状细胞的步骤。
5.一种树突状细胞，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：吁亭，万涛，陈国友，
申请(专利权)人：上海惠盾因泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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