一种人甲状旁腺激素（１－３４）的纯化方法技术

一种人甲状旁腺激素（１－３４）的纯化方法。本发明专利技术提出了一条适于产业化纯化来匹卢定的方法，包括以下步骤：１）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以ｐＨ值为２．５－３．５的磷酸盐缓冲溶液为Ａ相，乙腈为Ｂ相，梯度：Ｂ％：１７％～３２％，将粗肽溶液进行梯度洗脱；２）采用反相高效液相色谱法将来匹卢定转成醋酸盐。本发明专利技术提供的来匹卢定的纯化方法，操作简单、产品纯度高、收率好，达到产业化要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多肽的纯化方法，尤其涉及来匹卢定的纯化方法。
技术介绍
来匹卢定(L印irudin)是一种用于治疗血栓栓塞性疾病、脑血肿、皮下血肿等病症的多肽药物，其效果好且副作用小，具有很好的市场前景。在已公开的文献和专利中，未有报道适用于大规模生产、且具有高收率的纯化方法。
技术实现思路
本专利技术提出了一种适于产业化的来匹卢定的纯化方法，纯度高且收率好。 为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案包括以下步骤 1)以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以pH值为2. 5-3. 5的磷酸盐缓冲溶液为A相，乙腈为B相，梯度B% :17% 32%，将粗肽溶液进行梯度洗脱；A相的磷酸盐缓冲溶液物质量浓度小于0. 2% mol/L。 所述"粗肽"是指采用液相合成法或固相合成法得到的，尚未经过精制处理的来匹卢定粗肽或者纯度不能满足药用的来匹卢定。"粗肽溶液"是指粗肽溶于水所得到的溶液，水优选符合注射用水标准，更优选超纯水。"乙腈"的纯度级别优选色谱纯。步骤l)下文也表述为纯化。 2)采用反相高效液相色谱法将来匹卢定转成醋酸盐。步骤2)下文也表述为"转^! . o 转盐的方法优选为所述"反相高效液相色谱"的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，以质量浓度0. 05% —0.2X醋酸水溶液为A相；乙腈为B相，梯度B% :6% 36%，进行梯度洗脱。A相醋酸水溶液的浓度优选O. 1%。"乙腈"的纯度级别优选色谱纯。 本专利技术提供的来匹卢定肽纯化方法，操作简单、纯度高、收率好，达到产业化要求。 纯化规模包括以下规格色谱柱(柱子直径X长度)50mmX300mm、150mmX300mm、300mmX300mm。具体实施方式 实施例一 1.样品处理粗肽用水溶解，使样品完全溶解后用滤膜过滤，收集滤液备用。 2.纯化 纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为50mmX300mm。流动相A相物质量浓度为0. 2% mol/L磷酸溶液用三乙胺调pH至2. 5 3. 5 ;B相乙腈，流速70-80ml/min，梯度B%:17% 32%，检测波长230nm。进样量为1.3-1.5g。 纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为1. 3-1. 5g。线性梯度洗脱45min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液于水温不超过3(TC条件下减压旋蒸浓縮至约100 120mg/ml后备用。 3、转盐以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为50mmX300mm。流动相A相0. 1%醋酸水溶液；B相色谱纯乙腈，流速70-80ml/min，检测波长230nm，梯度B% :6% 36%。进样量为1. 6-2. Og。 转盐过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为150-200ml样品溶液。线性梯度洗脱30min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液合并旋蒸浓縮至约50-80mg/ml后转至合适大小西林瓶，然后进行冷冻干燥，即可得到纯度大于98%的来匹卢定。 实施例二 1.样品处理粗肽用水溶解，使样品完全溶解后用滤膜过滤，收集滤液备用。 2.第一次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为150mmX300mm。流动相A相0. 2% mol/L磷酸溶液用三乙胺调pH至2. 5 3. 5 ;B相乙腈，流速450-550ml/min，梯度B%:17% 32%，检测波长230nm。进样量为13-15g。 纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为13-15g。线性梯度洗脱60min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液于水温不超过30°C条件下减压旋蒸浓縮至约70-80mg/ml后备用。 3、转盐以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为150mmX300mm。流动相A相0. 1%醋酸水溶液；B相色谱纯乙腈，流速450-550ml/min，检测波长230nm，梯度B% :6% 36%。进样量为15_20g。 转盐过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为1200-1600ml样品溶液。线性梯度洗脱60min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液合并旋蒸浓縮至约50-80mg/ml后转至合适大小西林瓶，然后进行冷冻干燥，即可得到纯度大于98%的来匹卢定。实施例三 1.样品处理粗肽用水溶解，使样品完全溶解后用滤膜过滤，收集滤液备用。 2.第一次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为300mmX300mm。流动相A相0. 2% mol/L磷酸溶液用三乙胺调pH至2. 5 3. 5 ;B相乙腈，流速1900-2200ml/min，梯度B% :17% 32%，检测波长230nm。进样量为55-75g。 纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为55-75g。线性梯度洗脱120min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液于水温不超过3(TC条件下减压旋蒸浓縮至约70-80mg/ml后备用。 3、转盐以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为300mmX300mm。流动相A相0. 1%醋酸水溶液；B相色谱纯乙腈，流速1900-2200m1/min，检测波长230nm。梯度B% :6% 36% 。进样量为55_75g。 转盐过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为1200-1600ml样品溶液。线性梯度洗脱90min，收集目的峰，将收集的来匹卢定溶液合并旋蒸浓縮至约450-80ml/g后转至合适大小西林瓶，然后进行冷冻干燥，即可得到纯度大于98X的的来匹卢定。权利要求一种来匹卢定的纯化方法，包括以下步骤1)以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以pH值为2.5-3.5的磷酸盐缓冲溶液为A相，乙腈为B相，梯度B％17％～32％，将粗肽溶液进行梯度洗脱；2)采用反相高效液相色谱法将来匹卢定转成醋酸盐。2. 根据权利要求l所述的方法，其特征在于步骤l)中A相的磷酸盐缓冲溶液由磷酸溶液采用三乙胺调pH获得。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中A相的磷酸盐缓冲溶液物质量浓度小于O. 2% mol/L。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤1)中A相的磷酸盐缓冲溶液物质量 浓度小于0. 2% mol/L。5. 根据权利要求1至4任意一项所述的方法，其特征在于实现步骤2)的方法为所述 "反相高效液相色谱"的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，以质量浓度0. 05% —O. 2%醋酸水溶液为A相；乙腈为B相，梯度B% :6% 36%，进行梯度洗脱。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于A相的醋酸水溶液浓度为0. 1%。全文摘要。本专利技术提出了一条适于产业化纯化来匹卢定的方法，包括以下步骤1)以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以pH值为2.5-3.5的磷酸盐缓冲溶液为A相，乙腈为B相，梯度B％17％～32％，将粗肽溶液进行梯度洗脱；2)采用反相高效液相色谱法将来匹卢定转成醋酸盐。本专利技术提供的来匹卢定的纯化方法，操作简单、产品纯度高、收率好，达到产业化要求。文档编号C07K14/815GK101781367SQ20101011639公开日2010年7月21日 申请本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来匹卢定的纯化方法，包括以下步骤：　　１）以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以ｐＨ值为２．５－３．５的磷酸盐缓冲溶液为Ａ相，乙腈为Ｂ相，梯度：Ｂ％：１７％～３２％，将粗肽溶液进行梯度洗脱；　　２）采用反相高效液相色谱法将来匹卢定转成醋酸盐。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：付信，覃亮政，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]