治疗心脏疾患和充血性心力衰竭以及施用AAV载体的方法技术

本发明专利技术涉及在单次施用方法中施用rAAV载体的方法，所述方法包括一系列子剂量的rAAV载体的子施用。本发明专利技术还涉及包含心脏特异性启动子、心脏细胞特异性启动子、多细胞心脏特异性启动子及其元件的rAAV载体。本发明专利技术还涉及rAAV载体、药物组合物及其在治疗有需要的受试者的心血管疾病、心脏疾病和心力衰竭的方法中的用途。途。途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗心脏疾患和充血性心力衰竭以及施用AAV载体的方法
相关申请的交叉引用
[0001]根据35U.S.C.
§
119(e)，本国际申请要求2020年8月5日提交的美国临时申请号63/061,342和2021年6月23日提交的美国临时申请号63/214,119的权益，将其内容通过引用整体并入本文。序列表
[0002]本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并由此通过引用将其整体并入。所述ASCII副本创建于2021年8月4日，命名为046192
‑
097980WOPT_SL.txt，并具有1,059,646字节的大小。


[0003]本文的技术涉及用于治疗心脏疾患(cardiac disorders)、心力衰竭(包括慢性心力衰竭(CHF))的AAV载体和调节性核酸序列，特别是心脏特异性启动子、肌肉细胞特异性启动子、及其元件。本文的技术还涉及施用AAV载体以用于治疗心脏疾患的表达方法。本文的技术还涉及包含这种启动子的构建体、载体、病毒粒子、药物组合物和细胞，其用于降低磷酸酶活性以改善β
‑
肾上腺素能响应性，以及它们的使用方法。

技术介绍

[0004]提供以下讨论是为了帮助读者理解本公开，并不构成对现有技术的内容或相关性的任何承认。
[0005]心力衰竭(由ACC/AHA定义为由心室充盈或射血的任何结构或功能障碍导致的复杂临床综合征)仍然是美国最常见、费钱和使人衰弱的疾病之一。基于2011年至2014年的美国国家健康与营养调查(National Health and Nutrition Examination Survey)数据，估计有600万美国成年人患有它，预计到2030年将多于800万。认为每年会发生超过960,000新病例，发病的终生风险为约20％至45％。因此，心力衰竭(HF)(也称为充血性心力衰竭(CHF))在美国是流行疾病。
[0006]心力衰竭是在其中心肌收缩性下降，并且心脏失去其有效泵血的能力的疾患。心力衰竭几乎总是慢性、长期的病症，并且消耗了过度量的医疗干预和人力资源费用。特别是，从患者生产生活的整体减少、以及从治疗费用的角度来看，心力衰竭对其他身体器官造成的后果都可以是毁灭性的。该病症可影响右侧、左侧或两侧的心脏。由于心脏的泵送作用受损，血液开始倒流到身体的其他区域。许多器官和器官系统开始因缺乏氧气和营养物质而遭受累积性损害。
[0007]在略多于一半的受影响个体中，心脏功能下降，如通过射血分数降低(伴有下降的射血分数的心力衰竭；HFrEF)所证明的，并且左心室扩张。在过去的3个十年中，已经引入了靶向对HF进展很关键的通路的新药，以及植入式心脏除颤器和再同步装置。然而，与HFrEF相关的发病率和死亡率仍处于不可接受的水平，多达50％的受影响个体在诊断后5年内死亡。这引发了研究者评估基因治疗通过增加心脏中的特定蛋白质的量而减轻或治愈HFrEF
中的作用。
[0008]蛋白激酶和它们的磷酸化蛋白底物在心脏的泵送作用中很重要，并已被很好地表征，然而，逆转增加的心脏收缩性的蛋白磷酸酶也很重要。主要的Ser/Thr磷酸酶(1型、2A型和2B型(钙调磷酸酶))源于共同的基因家族，是高度同源的蛋白质(40％
‑
50％)(Cohen,P.，1990Phosphoprotein Res；24：230
‑
5)，在控制心脏收缩性和肥大方面发挥关键作用。已经显示出，蛋白磷酸酶2A的催化亚单位的过度表达会降低心脏功能并导致病理性心脏肥大(Brewis,N.等，2000Am J Physiol Heart Circ Physiol；279：H1307
‑
18；Gergs,U.等，2004J Biol Chem.)。此外，钙调磷酸酶(一种钙依赖性磷酸酶)通过其对NFAT转录因子活性的调节来诱导肥大。5有趣的是，在体内和在体外对这种磷酸酶的抑制阻止了心脏肥大(Brewis,N.等，2000；Molkentin,J.D.，1998Cell；93：215
‑
28)。
[0009]在人和实验性心力衰竭中，与肌质网(SR)相关的1型磷酸酶(PP1)的活性显著增加，表明这可能是功能降低、扩张型心肌病和过早死亡的促成因素(Huang,B.等，1999Circ Res；85：848
‑
55；Sande,J.B.，等，2002Cardiovasc Res；53：382
‑
91；Boknik,P.等，2000Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol；362：222
‑
31；Gupta,R.C.等，1997Circulation；96(Suppl 1):I
‑
361；Neumann,J.1997J Mol Cell Cardiol；29：265
‑
72；Carr,A.N.等，2002，Mol Cell Biol；22：4124
‑
35)。
[0010]先前已确立，蛋白激酶Cα(“PKC
‑
α”)的活性在心力衰竭的病理状态下增加。抑制蛋白磷酸酶
‑
1(“PP
‑
1”)的活性导致心脏收缩性增强(Pathak,A.等2005Circ Res 15:756
′‑
66)。
[0011]需要对受试者的心力衰竭进行有效的治疗和预防。基因治疗对治疗各种疾病和疾患是有用的。然而，重要的是，基因治疗的递送、以及基因或核酸对特定组织和/或细胞类型的表达是最佳的。
[0012]基因治疗不仅有潜力治愈遗传疾患，还有利于利用病毒对获得性和退行性疾病进行长期非侵入性治疗。一种基因治疗载体是腺相关病毒(AAV)。AAV自身是需要辅助病毒来有效复制的非致病性依赖性细小病毒。AAV因其安全性和简单性而被用作基因治疗的病毒载体。AAV具有广泛的宿主和细胞类型趋向性，能够转导正在分裂和不在分裂的细胞。
[0013]在对体内基因调节的内部机制进行了广泛的研究之后，研究重点最近转移到通过将外源核酸序列引入细胞来调节基因表达。这在研究和生物加工中常规地完成，其中，可操作地连接至启动子的期望表达产物的核酸序列通常以载体的形式被引入生产细胞系。
[0014]在基因治疗领域，这对于遗传疾患(例如单基因疾患(或孟德尔病)有特别的意义，所述遗传疾患由存在于患者细胞中的有缺陷的基因引起。在基因治疗中，控制已被引入细胞的外源核酸的表达对患者的健康和安全至关重要。不仅表达产物的水平需要在治疗窗口内，而且需要在所需的组织内、甚至在所需组织的特定区域内表达，以使治疗有效。此外，表达可能需要限制到特定的细胞类型或多种细胞类型，以避免副作用。在治疗窗口之外的表达(即更低或更高)或在治疗区域之外的表达、或甚至在特定细胞或细胞的组合之外的表达，可能没有治疗作用，或甚至是有害的。
[0015]因此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗患有心力衰竭的患者的方法，包括：向具有充血性心力衰竭(CHF)分类的患者的心脏细胞中施用至少一个总剂量的rAAV载体，所述载体包含编码抑制磷酸酶活性的磷酸酶抑制剂(I
‑
1)蛋白的核酸序列，其中，所述rAAV的至少一个剂量选自约10
13
vg至约10
15
vg的总剂量范围，并且其中，施用后至少十二个月，所述充血性心力衰竭的分类有改善。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述分类基于以下所使用的分类系统：美国心脏协会(AHA)、美国心脏病学会(ACC)、明尼苏达心力衰竭生活质量问卷(MLHFQ)、堪萨斯城心肌病问卷(KCCQ)、或2016欧洲心脏病学会指南(ESCG)、日本心力衰竭学会(JHFS)指南、日本循环学会(JCS)指南、或纽约心脏协会(NYHA)。3.如权利要求1或2所述的方法，其中，在施用所述rAAV后12个月，所述分类具有至少一个等级的改善。4.如权利要求1或2所述的方法，其中，在施用所述rAAV后6个月内，所述分类具有至少一个等级的改善。5.如权利要求1所述的方法，其中，在施用后12个月，所述分类具有至少2个等级的改善。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中，所述分类系统是NYHA，并且分类的等级选自于由以下所组成的组：I级、II级、III级和IV级。7.如权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中，所述分类系统是美国心脏病学会/美国心脏协会(ACC/AHA)的补充分期系统，并且分类的等级选自于由以下所组成的组：A期、B期、C期、D期。8.如权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中，所述分类系统是KCCQ，并且分类的等级是KQQC总体汇总得分范围，所述得分范围选自于由以下所组成的组：KCCQ一般到优秀的分数为50到100，非常差到一般的分数为0到49，良好到优秀的分数为75到100，并且非常差到良好的分数为0到74。9.一种治疗患有心肌病的患者的方法，包括：向所述患者的心脏细胞中施用至少一个总剂量的rAAV载体，所述载体包含编码抑制磷酸酶活性的磷酸酶抑制剂(I
‑
1)蛋白的核酸序列，其中，所述rAAV的至少一个剂量选自约10
13
vg至约10
15
vg的总剂量范围，并且其中，在施用后至少12个月，在所述患者中至少一个参数比基线水平有改善，其中所述至少一个参数选自基本上由以下所组成的组：a.射血分数(EF)，b.收缩末期容积(ESV)，c.心脏收缩力，选自射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)；d.心脏容积，选自舒张末期容积(DV)和收缩末期容积(ESV)中的任一项，e.功能性标准，选自6分钟步行测试(6MWT)、锻炼和VO2max中的任一项；f.BNP水平，g.Pro
‑
BNP水平，h.生物标志物水平，其中所述生物标志物水平选自肌钙蛋白、血清肌酐、胱抑素C或肝脏转氨酶的组，
i.患者报告的结果(PRO)，例如减少的症状、健康相关的生活质量(HRQOL)或患者感知的健康状况，以及j.因心力衰竭导致的死亡风险、减少的因心力衰竭症状导致的住院治疗、或用于治疗心力衰竭的治疗性干预中的任一项的减少。10.如权利要求9所述的方法，其中，在施用后至少12个月，具有至少2个参数的改善。11.如权利要求10所述的方法，其中，在施用后至少12个月，具有至少3个参数的改善。12.如权利要求11所述的方法，其中，在施用后至少12个月，具有至少4个参数的改善。13.如权利要求12所述的方法，其中，在施用后至少12个月，具有至少5个参数的改善。14.如权利要求9所述的方法，其中，所述改善选自以下的任何一项：a.射血分数比基线增加至少5％以上，b.收缩末期容积比基线减少至少10％、或减少至少20mL，c.6分钟步行测试比基线增加至少50米，d.血液中的BNP水平(pg/mL)比基线减少至少40％，e.血液中的pro
‑
BNP水平(pg/mL)比基线减少至少35％，f.相比于同一生物标志物的基线水平，选自肌钙蛋白、血清肌酐、胱抑素C或肝脏转氨酶的生物标志物减少至少10％，g.心肌耗氧量(MVO2)比基线增加至少1.5mL/kg/min，或者h.由于HF症状改善而出院，或者由于受试者中的改善的HF症状而减少的干预，所述减少的干预选自正性肌力药、血管扩张剂、利尿剂中的任何一种的使用减少。15.如权利要求1或14所述的方法，其中，所述rAAV载体进一步包含CMV启动子或合成启动子，所述启动子可操作地连接至所述磷酸酶抑制剂蛋白。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中，按以下的施用方法中的任何一种施用所述总剂量：a.在约20分钟至约30分钟的时间段内，b.以一系列子剂量施用，其中每个子剂量在约1分钟至约5分钟的时间段内施用，c.以一系列五个子剂量施用，每个子剂量在约1分钟至约5分钟的时间段内施用，并且其中所述五个子剂量在约20分钟至约30分钟的时间段内施用。17.如权利要求1
‑
16中任一项所述的方法，其中，所述rAAV载体包含非靶向肝脏的衣壳。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的方法，其中，所述rAAV选自于由以下所组成的组：AAV1、AAV2、AAV6、AAV8、AAV9、AAV2i8、rh10、AAV2.5和AAV2G9。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的方法，其中，所述rAAV载体是AAV2i8。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中，所述rAAV的至少一个总剂量是10
13
vg、3
×
10
13
vg、10
14
vg、3
×
10
14
vg或10
15
vg。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的方法，其中，所述磷酸酶抑制剂(I
‑
1)蛋白是组成型活化的蛋白(I
‑
1c)。22.如权利要求21所述的方法，其中，所述I
‑
1c选自以下的任何一种：a.包含至少SEQ ID NO：1的氨基酸残基1
‑
54的多肽，其中SEQ ID NO：1在C端第70、67、66、65或61或54位氨基酸处截短，并且其中在第35位有天冬氨酸(T35D)，
b.包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
54或其功能片段的多肽，其中所述功能片段与SEQ ID NO：1的氨基酸残基1
‑
54具有至少85％的序列同一性，或在C端第70、67、66、65或61或54位氨基酸处截短，并且其中在第35位有天冬氨酸(T35D)。23.如权利要求1
‑
22中任一项所述的方法，其中，所述rAAV基因组包含选自于由SEQ ID NO：413
‑
441所组成的组中的核酸序列。24.如权利要求21所述的方法，其中，所述编码I
‑
1多肽的核酸序列选自：a.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中在SEQ ID NO：1第35位处的苏氨酸(T)被替换成非T的氨基酸，b.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中在SEQ ID NO：1第35位处的苏氨酸(T)被选自天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)中的任一氨基酸取代，c.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中在SEQ ID NO：1第35位处的苏氨酸(T)被天冬氨酸(D)或天冬氨酸的保守氨基酸取代。25.如权利要求1
‑
24中任一项所述的方法，其中，所述编码I
‑
1蛋白的核酸序列是经密码子优化的核酸序列。26.如权利要求1
‑
25中任一项所述的方法，其中，所述编码I
‑
1蛋白的核酸序列选自SEQ ID NO：385
‑
412中的任何一个、或与SEQ ID NO：385
‑
412具有至少80％序列同一性的核酸序列。27.如权利要求1
‑
26中任一项所述的方法，其中，所述患有心肌病的受试者患有非缺血性心力衰竭和/或非缺血性心肌病。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的方法，其中，所述患有心肌病的受试者患有先天性心肌病或具有心脏表现的遗传性疾患。29.如权利要求29所述的方法，其中，所述患有先天性心肌病或具有心脏表现的遗传性疾患的受试者具有选自于由以下所组成的组中的疾病或疾患：致心律失常性右心室心肌病、家族性心房粘液瘤、原发孔型房间隔缺损、静脉窦型房间隔缺损、巴氏综合征、肌营养不良症、Buerger病、心脑肌病、染色体1p36缺失综合征、先天性全身脂质营养不良4型、先天性心脏传导阻滞、扩张型心肌病、杜氏肌营养不良症(DMD)、Fabry病、家族性心房颤动、家族性扩张型心肌病、家族性肥厚型心肌病、家族性进行性心脏传导缺陷、家族性胸主动脉瘤和主动脉夹层、纤维肌发育不良、Friedreich共济失调、戈谢病，糖原贮积病2、3或4型，His束性心动过速、Hurler综合征、左心发育不良综合征、婴儿组织细胞样心肌病、颅内动静脉畸形、异丁酰
‑
辅酶A脱氢酶缺乏症、激肽释放酶高血压、川崎病、Kearns
‑
Sayre综合征、左心室致密化不全，肢带型肌营养不良症1B、2E、2F、2M、2C、2D型，局限性系统性硬化症、长QT综合征1、淋巴水肿和脑动静脉异常、淋巴细胞性血管炎、小头症
‑
心肌病、线粒体脑肌病乳酸酸中毒和卒中样发作、线粒体三功能蛋白缺乏症、强直性肌营养不良症1型、新生儿卒中，Noonan综合征1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
和6，围产期心肌病、Peters plus综合征、PGM1
‑
CDG、PHACE综合征、受磷蛋白Arg 14缺失、体位性心动过速综合征、原发性肉碱缺乏症，进行性家族性心脏传导阻滞1A、1B和2型，假性醛固酮减少症2型、肺动脉高压、肺动脉闭锁伴完整室间隔、肺动脉闭锁伴室间隔缺损、肺动脉瓣狭窄、肺静脉狭窄、肺动脉狭窄、肾功能缺乏性高血压、视网膜动脉大动脉瘤伴肺动脉瓣上狭窄、右心室发育不全、结节病、Sengers综合征、内脏反位、突发
性心律失常死亡综合征、主动脉瓣上狭窄、Swyer综合征、TANGO2相关代谢性脑病和心律不齐、TARP综合征、法洛四联症、Timothy综合征、三尖瓣闭锁、Vici综合征、VLCAD缺乏症和Williams综合征。30.如权利要求1
‑
29中任一项所述的方法，其中，所述患有心肌病的受试者患有缺血性心肌病。31.如权利要求1
‑
30中任一项所述的方法，其中，所述患有心肌病的受试者患有心力衰竭。32.如权利要求31所述的方法，其中，所述患有心力衰竭的受试者的分类相当于纽约心脏协会(NYHA)分类系统中的III级以上。33.如权利要求30
‑
32中任一项所述的方法，其中，所述患有心力衰竭的受试者患有心血管疾病或心脏疾病，所述疾病选自以下的任何一种：充血性心力衰竭(CHF)、左心室重构、外周动脉闭塞性疾病(PAOD)、扩张型心肌病(DCM)包括特发性扩张型心肌病(IDCM)、冠状动脉疾病、缺血、心律不齐、心肌梗塞(MI)、心脏收缩力异常、急性(失代偿性)心力衰竭(AHF)、Ca
2+
代谢异常、心肌缺血、动脉粥样硬化、心肌病、特发性心肌病、遗传性疾患诱发的心肌病、心律失常、肌营养不良症、肌肉质量异常、肌肉退化、感染性心肌炎、药物或毒素诱发的肌肉异常、过敏性心肌炎、自身免疫性心内膜炎和先天性心脏疾病和肺心病高血压。34.如权利要求1
‑
33中任一项所述的方法，其中，所述患有心肌病的受试者具有降低的射血分数(rEF或HFrEF)或者保留的射血分数(HFpEF)。35.如权利要求1
‑
34中任一项所述的方法，其中，在施用所述rAAV后至少12个月，心力衰竭的分类比基线水平改善至少一个等级，其中心力衰竭的分类通过以下的至少一个来评价：a.美国心脏协会(AHA)、美国心脏病学会(ACC)、2016欧洲心脏病学会指南(ESCG)、日本心力衰竭学会(JHFS)指南、日本循环学会(JCS)指南或纽约心脏协会(NYHA)所使用的分类系统；或其等同物，或b.选自于由以下的任一者所组成的组中的健康相关生活质量(HRQL)问卷：明尼苏达心力衰竭生活质量问卷(MLHFQ)、或堪萨斯城心肌病问卷(KCCQ)、慢性心力衰竭问卷(CHFQ)、重度心力衰竭生活质量问卷(QLQ
‑
SHF)、左心室功能障碍(LVD
‑
36)问卷、和左心室疾病问卷(LVDQ)。36.如权利要求35所述的方法，其中，在施用所述rAAV后6个月内，所述分类具有至少一个等级的改善。37.如权利要求35所述的方法，其中，在施用所述rAAV后12个月内，所述分类具有至少两个等级的改善。38.如权利要求35所述的方法，其中，比起所述基线水平，在生活质量MLWHFQ或KCCQ中具有减少至少10分的改善。39.如权利要求1
‑
38中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一个总剂量的rAAV载体的同时、和/或之前、和/或之后向所述受试者施用血管扩张剂。40.如权利要求1
‑
39中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一个总剂量的rAAV载体的同时、或之前、或之后向所述受试者施用免疫调节剂。41.一种药物组合物，所述药物组合物包含AAV载体，所述载体包含选自SEQ ID NO：
385
‑
412中任何一个的经密码子优化的I
‑
Ic核酸序列，或与SEQ ID NO：385
‑
412具有至少80％序列同一性的核酸序列。42.如权利要求41所述的药物组合物，其中，所述经密码子优化的核酸序列可操作地连接至CMV启动子或合成启动子。43.如权利要求41所述的药物组合物，所述药物组合物包含选自于由以下所组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：41
‑
42，或与SEQ ID NO：385
‑
412具有至少80％序列同一性的核酸序列。44.如权利要求41
‑
43中任一项所述的药物组合物，用于如权利要求1
‑
40中任一项所述的方法。45.一种腺相关病毒(AAV)载体，所述载体包含编码磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至选自以下任何一种的启动子：选自表2A的心脏特异性启动子或其变体，在心肌和骨骼肌中活化的肌肉特异性启动子或其变体，或当存在心脏组织特异性增强子时的任何启动子。46.如权利要求45所述的AAV载体，其中，在心肌和骨骼肌中活化的肌肉特异性启动子选自表5A或表13A或其变体。47.如权利要求45
‑
46中任一项所述的AAV载体，其中，所述AAV选自于由以下所组成的组：腺相关病毒
‑
1(AAV1)、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAV2i8。48.如权利要求45
‑
47中任一项所述的AAV载体，其中，所述AAV包含非靶向肝脏的衣壳。49.如权利要求45
‑
48中任一项所述的AAV载体，其中，所述AAV载体是AAV2i8。50.如权利要求45
‑
49中任一项所述的AAV载体，其中，所述磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽是组成型活化的蛋白(I
‑
1c)。51.如权利要求45
‑
50中任一项所述的AAV载体，其中，所述I
‑
1c选自以下的任何一种：a.包含至少SEQ ID NO：1的氨基酸残基1
‑
65的多肽或其功能等同物；b.包含至少SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
54的多肽，其中所述多肽在C端选自残基70、67、66、65或61或54的氨基酸处截短，并且在第35位有天冬氨酸(T35D)，c.包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽或其功能等同物，所述功能等同物与SEQ ID NO：1的氨基酸残基1
‑
65具有至少85％的序列同一性，或者d.选自以下任何一种的多肽：SEQ ID NO：507或527
‑
532或其功能等同物，所述功能等同物与SEQ ID NO：507或527
‑
532中任何一个的氨基酸残基具有至少85％的序列同一性。52.如权利要求45
‑
51中任一项所述的AAV载体，其中，所述编码I
‑
1多肽的核酸序列选自：a.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中，在SEQ ID NO：1第35位的苏氨酸(T)被替换成非T的氨基酸，b.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中，在SEQ ID NO：1第35位的苏氨酸(T)被选自天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)中的任一氨基酸替换，c.编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65的多肽的核酸序列，其中，在SEQ ID NO：1第35位的苏氨酸(T)被替换为天冬氨酸(D)、或天冬氨酸的保守氨基酸。
53.如权利要求45
‑
52中任一项所述的AAV载体，其中，所述多肽选自：SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
54、SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
61、SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
65、SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
66、SEQ ID NO：1的氨基酸1
‑
67或SEQ ID NO：2的氨基酸1
‑
77、或其功能变体，其中在SEQ ID NO：1第35位的苏氨酸被天冬氨酸(T35D)或天冬氨酸的保守氨基酸替换。54.如权利要求45
‑
50中任一项所述的AAV载体，其中，所述编码I
‑
1多肽的核酸序列是经密码子优化的核酸序列。55.如权利要求45
‑
54中任一项所述的AAV载体，其中，与SEQ ID NO：1的野生型参考序列或其片段相比，所述经密码子优化的核酸序列具有减少的CpG含量或减少的CpG岛。56.如权利要求45
‑
54中任一项所述的AAV载体，其中，所述编码I
‑
1多肽的核酸序列是选自以下的任何一种的经密码子优化的核酸序列：SEQ ID NO：385
‑
412，或与SEQ ID NO：385
‑
412具有至少80％序列同一性的核酸序列。57.如权利要求45
‑
56中任一项所述的AAV载体，所述载体进一步包含位于编码磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽的核酸序列的5
’
的至少一个ITR，所述ITR可操作地连接至所述心脏特异性启动子或肌肉特异性启动子。58.如权利要求45
‑
57中任一项所述的AAV载体，所述载体进一步包含侧接于编码磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽的核酸序列的至少两个ITR，所述ITR可操作地连接至所述心脏特异性启动子或肌肉特异性启动子。59.如权利要求45
‑
58中任一项所述的AAV载体，其中，所述ITR序列选自以下的任何一个或多个：SEQ ID NO：70
‑
78，或与SEQ ID NO：70
‑
78具有至少85％序列同一性的核酸。60.如权利要求45
‑
59中任一项所述的AAV载体，所述载体进一步包含反向poly A序列或双链RNA终止元件，其中所述反向polyA序列或双链终止元件位于编码磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽的核酸序列的3
’
。61.如权利要求60所述的AAV载体，其中，所述反向poly A序列或双链RNA终止元件位于编码磷酸酶抑制剂(I
‑
1)多肽的核酸序列的3
’
和右侧ITR的5
’
之间。62.如权利要求45
‑
61中任一项所述的AAV载体，其中，所述核酸序列可进一步包含编码至少一种免疫调节剂的核酸序列。63.如权利要求45
‑
61中任一项所述的AAV载体，所述载体存在于组合物或溶液中，进一步包括免疫调节剂。64.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔，
申请(专利权)人：阿斯克肋匹奥生物制药公司，
类型：发明
国别省市：