一种UPLC-MS/MS检测瑞戈非尼中间体中基因毒性杂质的方法技术

本发明专利技术提供了一种UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种UPLC
‑
MS/MS检测瑞戈非尼中间体中基因毒性杂质的方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种UPLC
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MS/MS检测瑞戈非尼中间体[4
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(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)
‑
N
‑
甲基吡啶酰胺]中的基因毒性杂质的方法。

技术介绍

[0002]瑞戈非尼适用于治疗既往接受过以氟尿嘧啶、奥沙利铂和伊立替康为基础的化疗,以及既往接受过或不适合接受抗VEGF治疗、抗EGFR治疗(RAS野生型)的转移性结直肠癌(mCRC)患者；或既往接受过甲磺酸伊马替尼及苹果酸舒尼替尼治疗的局部晚期的、无法手术切除的或转移性的胃肠道间质瘤(GIST)患者；或既往接受过索拉非尼治疗的肝细胞癌(HCC)患者。该药物是一种口服多靶点激酶抑制剂，由德国拜耳研发，2012年9月首次经美国FDA批准上市，目前该药已在美国、欧盟、日本等多个国家和地区批准使用。该药物最大日剂量为160mg，基因毒性杂质4,4'
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(4
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氨基
‑
1,3
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苯基)双(氧基)双(N
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甲基吡啶酰胺)需要控制在9ppm以下。
[0003]CN114839291A公开了一种多种络氨酸激酶抑制剂类药物的检测方法，但是在该检测方法下，瑞戈非尼中间体[4
‑
(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)r/>‑
N
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甲基吡啶酰胺]及其基因毒性杂质4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
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甲基吡啶酰胺)几乎无保留，无法分离。
[0004]在瑞戈非尼中间体[4
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(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)
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N
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甲基吡啶酰胺]的合成过程中会产生工艺杂质4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
‑
甲基吡啶酰胺)。该杂质具有基因毒性，因此检测时具有限度低、仪器灵敏度要求高的特点；同时，因其性质与瑞戈非尼中间体接近、分离度差，从而在进行分析方法开发时，流动相的洗脱梯度比例和色谱柱的适用性要求非常高。
[0005]因此，为更好地控制产品质量，需要开发一种新的灵敏度、准确度较高、分离度好的检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种UPLC
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MS/MS检测瑞戈非尼中间体中基因毒性杂质的方法。使用该检测方法，待测物质相互之间无干扰，可以实现对待测物质瑞戈非尼中间体[4
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(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)
‑
N
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甲基吡啶酰胺]中基因毒性杂质4,4'
‑
(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
‑
甲基吡啶酰胺)的准确检测。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0008]本专利技术涉及一种UPLC
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MS/MS检测瑞戈非尼中间体中基因毒性杂质的方法，所述瑞戈非尼中间体为[4
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(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)
‑
N
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甲基吡啶酰胺]，基因毒性杂质为4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
‑
甲基吡啶酰胺)；所述方法包括如下步骤：
[0009]S1、确定超高效液相色谱
‑
三重四级杆质谱联用法(UPLC
‑
MS/MS)条件：
[0010]1)UPLC条件
[0011]色谱柱：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；
[0012]流动相A：含0.1％甲酸的超纯水，即甲酸和水体积比为0.1:100的超纯水溶液
[0013]流动相B：乙腈
[0014]洗脱条件：等梯度
[0015]柱温：33℃～37℃；
[0016]流速：0.27～0.33ml/min
[0017]2)MS/MS条件
[0018]离子源：大气压电喷雾离子源(ESI)
[0019]干燥气温度：300℃
[0020]干燥气流速：7L/min
[0021]鞘气温度：300℃
[0022]鞘气流速：11L/min
[0023]雾化气压力：40psi
[0024]毛细管电压：3500V
[0025]喷嘴电压：500V
[0026]MRM模式：正离子模式Delta EMV(+)：200V
[0027]0～13.3min，to waste；13.3～20min，to MS
[0028]定量离子对：m/z 394.1
→
344.1
[0029]定性离子对：m/z 394.1
→
319.1
[0030][0031]S2、标准溶液配制：取4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
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甲基吡啶酰胺)对照品溶于稀释剂中，制成标准液，以上述UPLC
‑
MS/MS条件分别检测所述标准液；
[0032]S3、取待检样品，溶于稀释剂中，制成样品溶液，以上述UPLC
‑
MS/MS条件检测所述样品溶液；
[0033]S4、按外标法以峰面积计算，得到待检样品中4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
‑
甲基吡啶酰胺)的含量；
[0034]进一步的，步骤S1中，所述色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 RRHD；
[0035]进一步的，步骤S1中，所述色谱柱长度为150mm，内径为3.0mm，填料的粒径为1.8μm；
[0036]进一步的，步骤S1中，所述色谱柱的柱温为35℃；
[0037]进一步的，步骤S1中，进样器温度：5
±
2℃；
[0038]进一步的，步骤S1中，所述柱流速为0.3
±
0.03ml/min；
[0039]进一步的，步骤S1中，所述洗脱条件为，等梯度洗脱，流动相A占比71
‑
75％，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种UPLC
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MS/MS检测瑞戈非尼中间体中基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述瑞戈非尼中间体为[4
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(4
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氨基
‑3‑
氟苯氧基)
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N
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甲基吡啶酰胺]，基因毒性杂质为4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
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甲基吡啶酰胺)；所述方法包括如下步骤：S1、确定超高效液相色谱
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三重四级杆质谱联用法(UPLC
‑
MS/MS)条件：1)UPLC条件色谱柱：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A：含0.1％甲酸的超纯水，即甲酸和水体积比为0.1:100的超纯水溶液流动相B：乙腈洗脱条件：等梯度流速：0.27
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0.33ml/min2)MS/MS条件离子源：大气压电喷雾离子源(ESI)干燥气温度:300℃；干燥气流速:7L/min；鞘气温度：300℃；鞘气流速:11L/min；雾化气压力：40psi；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：500V；MRM模式：正离子模式Delta EMV(+)：200V；S2、标准溶液配制：取4,4'
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(4
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氨基
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1,3
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苯基)双(氧基)双(N
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甲基吡啶酰胺)对照品溶于稀释剂中，制成标准液，以上述UPLC
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MS/MS条件分别检测所述标准液；S3、取待检样品，溶于稀释剂中，制成样品溶液，以上述UPLC
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MS/MS条件检测所述样品溶液；S4、按外标法以峰面积计算，得到待检样品中4,4'
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(4
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氨基
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【专利技术属性】
技术研发人员：李惠，谢军，姜春阳，刘盼，胡阳，
申请(专利权)人：上海博悦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：