【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析化学领域，涉及一种立他司特关键起始物料的检测方法，尤其是一种分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的hplc方法。
技术介绍
1、立他司特(lifitegrast)是一种新型小分子整合素抑制剂，通过抑制淋巴细胞功能相关抗原1(lfa-1)与细胞间粘附分子1的结合，从而减少由t淋巴细胞介导的炎症水平。立他司特由爱尔兰夏尔开发公司(shire dev llc)研发，2016年7月，原研立他司特滴眼液被fda批准用于治疗干眼症症状和体征。立他司特不但能够治疗干眼症导致的眼睛损伤，而且可以缓解带来的不适症状，是第一个获批通过抑制干眼症引起的炎症来治疗干眼症体征和症状的处方药。
2、通常来说，一种药物杂质总含量应小于1.0％，单个杂质含量应小于0.1％，对于制备立他司特过程中产生的杂质或引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。2-(叔丁氧羰基)-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸为立他司特的关键起始物料，该化合物的质量控制对高质量的立他司特原料药制备起到重要的作用，目前现有技术多是针对立他司特原料药以及制剂中有关物质的检测，对于立他司特起始物料中有关物质的检测报道较少。所以亟需开发一种高效且精确的分析方法，对立他司特药物关键起始物料进行质量分析，对后续制备高纯度的立他司特产品有着重要的意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种hplc法分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法；本专利技术的方法可以
2、为实现上述目的，本申请人经过大量的试验，确定了本专利技术的技术方案为：
3、hplc法分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用流动相a与流动相b进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f中的一种或者多种，具体结构式如下所示：
4、
5、所述流动相a为磷酸盐缓冲液与有机溶剂的混合溶剂，所述流动相b为有机溶剂。
6、所述立他司特关键起始物料为2-(叔丁氧羰基)-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸，是合成立他司特的关键起始物料，其化学式为c15h17cl2no4，结构式如式(ⅰ)如下，本专利技术中又简称“式ⅰ化合物”或“立他司特关键起始物料”：
7、
8、进一步，所述流动相a为高氯酸水溶液；
9、进一步，所述高氯酸水溶液中高氯酸比例为0.1％～0.2％；
10、作为一种优选，所述高氯酸水溶液中高氯酸比例为0.15％；
11、进一步，所述流动相b为乙腈、乙醇和甲醇的一种或多种；
12、作为一种优选，所述流动相b为乙腈。
13、所述流动相进行洗脱的流速为0.8-1.2ml/min，优选1.0 ml/min。
14、所述梯度洗脱设置如下：
15、
16、作为一种优选，所述梯度洗脱设置如下：
17、
18、
19、进一步，所述十八烷基硅烷键合硅胶的填料颗粒粒径为2-5μm；所述色谱柱的柱温为25-35℃。
20、作为一种优选，所述十八烷基硅烷键合硅胶的填料颗粒粒径为5μm；所述色谱柱的柱温为30℃。
21、进一步，所述检测器的检测波长为220±5nm。
22、作为一种优选，所述检测器的检测波长为220nm。
23、进一步，hplc法分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法，所述相关杂质为杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f对照品，具体包括以下步骤：
24、1)配制供试品溶液：取立他司特关键起始物料适量，精密称定，加2/5体积甲醇超声溶解后，用水稀释制成每1ml约含0.3mg的溶液；
25、2)配制对照溶液：取供试品溶液适量，用稀释剂稀释制成每1ml中约含0.3μg的溶液，作为对照溶液；
26、3)配制系统适用性溶液：取立他司特关键起始物料及其杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f，用稀释剂溶解稀释制成系统适用性溶液；
27、4)取步骤3)所述系统适用性溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定立他司特关键起始物料及其杂质的保留时间，再分别取步骤1)所述供试品溶液和步骤2)所述对照溶液进样，按主成分自身对照法计算供试品溶液中立他司特关键起始物料中杂质的含量。
28、5)立他司特关键起始物料及其杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f的线性相关系数如下表所示：
29、
30、
31、所述稀释剂为甲醇-水(体积比为40：60)的溶液。
32、本专利技术的目的之二在于提供一种用于固液分离测定立他司特关键起始物料及其杂质的试剂组合物，由以下试剂组成：
33、试剂a：高氯酸水溶液；
34、试剂b：有机溶剂；
35、所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f的一种或多种；
36、所述高氯酸水溶液中高氯酸比例为0.1％～0.2％；所述有机溶剂为乙腈、乙醇和甲醇的一种或多种。
37、作为一种优选，所述高氯酸水溶液中高氯酸比例为0.15％；所述有机溶剂为乙腈。
38、本专利技术提供的用于固液分离测定立他司特关键起始物料及其杂质的试剂组合物能有效分离立他司特关键起始物料及其杂质，对于实现立他司特关键起始物料及立他司特质量控制具有极其重要的意义。
39、本专利技术的有益效果在于：
40、1)本专利技术提供了一种hplc法分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法，本专利技术的方法可以有效的将立他司特关键起始物料及其相关杂质分开，且该方法具有很高的灵敏度及分离度，重复性及耐用性良好，操作简单，结果稳定可靠。
41、2)经研究发现，该式i关键起始物料的杂质b、杂质c与该关键起始物料结构非常接近，若是在这一步不控制，继续反应带入到原料药中就很难除去，所以在这一步反应中需要严格监控各个杂质，即本专利技术中立他司特关键起始物料的分析研究对合成反应的控制及质量的提高起着至关重要的作用，也直接影响立他司特成品的质量，所以该方法对于实现立他司特关键起始物料及立他司特质量控制具有极其重要的意义。
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1.一种立他司特关键起始物料的检测方法，所述方法为采用HPLC分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用流动相A与流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F中的一种或者多种，具体结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A为高氯酸水溶液，所述高氯酸水溶液中高氯酸的比例为0.1％～0.2％，所述流动相B为乙腈。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述高氯酸水溶液中高氯酸的比例为0.15％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱设置如下：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶的填料颗粒粒径为2-5μm；所述色谱柱的柱温为25-35℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为220±5nm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相关杂质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质
...【技术特征摘要】
1.一种立他司特关键起始物料的检测方法，所述方法为采用hplc分离测定立他司特关键起始物料及其相关杂质的方法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用流动相a与流动相b进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f中的一种或者多种，具体结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a为高氯酸水溶液，所述高氯酸水溶液中高氯酸的比例为0.1％～0.2％，所述流动相b为乙腈。
3.根据权利要求2所述的检测方...
【专利技术属性】
技术研发人员：李惠，姜春阳，谢军，刘亚敬，周小群，刘星，
申请(专利权)人：上海博悦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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