一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，所述试纸以融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原，所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，或者，与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽；所述试纸使用的融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合，在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景；所述试纸使用的融合蛋白表达量较高，均一纯度较高，稳定不容易变性。稳定不容易变性。稳定不容易变性。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸及其应用


[0001]本专利技术涉及一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸及其应用，属于生物


技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种呈S型或者弧形弯曲的革兰氏阴性细菌。1982年，Barry J.Marshall和J.Robin Warren从人的胃粘膜标本中分离并培养出幽门螺杆菌，从而成功并揭示了其潜在致病机制，二者由此获得了2005年的生理医学奖。1994年，幽门螺杆菌被世界卫生组织定为I类致癌原。现阶段，幽门螺杆菌在全球的感染率已高达50％左右，发展中国家的幽门螺杆菌感染率高于发达国家。
[0003]幽门螺杆菌感染是一个长期且慢性的过程，感染后人体一般难以自发清除而导致终身感染，除非进行根除治疗，或人体胃黏膜发生严重肠化生使得细菌难以定植，幽门螺杆菌才会在人体自动消失。研究表明，幽门螺杆菌长期感染会引起慢性胃炎的发生，并且，随着感染程度的加深和病情的恶化，部分患者会发展成十二指肠溃疡，甚至胃癌。因此，通过体外检测病人血液中是否含有幽门螺旋杆菌抗体，以推测病人是否曾经感染或正在感染幽门螺旋杆菌，进而对幽门螺杆菌感染人群进行及时干预对保障病人身体健康十分关键。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，所述试纸以融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原；所述融合蛋白：
[0005](a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；
[0006]和/或，(b)与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述试纸包括层析膜；所述层析膜的一端连接吸附垫；所述吸附垫上担载免疫标记的上述融合蛋白和免疫标记的第一抗体；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线和质控线；所述检测线上包被上述融合蛋白；所述质控线上包被第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～1μg/cm2。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.5μg/cm2。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～5μg/cm2。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.3μg/cm2。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述检测线由浓度为0.5～1.5mg/mL的融合蛋白溶液以0.5～1.5μL/cm的液体量包被在检测线位置处形成。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述检测线由浓度为1mg/mL的融合蛋白溶液以1μL/cm的液体量包被在检测线位置处形成。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1～2mg/mL的第二抗体溶液以1～2μL/cm的液体量包被在质控线位置处形成。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1.5mg/mL的第二抗体溶液以1.5μL/cm的液体量包被在质控线位置处形成。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述免疫标记为胶体金标记、胶体砷标记、胶体碳标记、有色乳胶标记或荧光乳胶标记。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，所述第一抗体为兔IgG抗体；所述第二抗体为羊抗兔IgG抗体。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述试纸还包括底板、样品垫和吸水垫；所述底板上沿液体层析方向依次设有样品垫、吸附垫、层析膜和吸水垫。
[0019]本专利技术还提供了一种检测幽门螺杆菌CagA抗体的方法，所述方法使用上述幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸对待测样本进行检测。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述待测样品为全血或血清。
[0021]本专利技术还提供了上述试纸或上述方法在检测幽门螺杆菌CagA抗体方面的应用。
[0022]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0023]本专利技术提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，所述试纸以融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原，所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，或者，与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽；所述试纸使用的融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合，在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景；所述试纸使用的融合蛋白表达量较高，均一纯度较高，稳定不容易变性。
附图说明
[0024]图1：扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果。
[0025]图2：纯化蛋白的SDS
‑
PAGE凝胶电泳分析结果。
[0026]图3：幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸的整体结构示意图。
[0027]图4：阳性标本检测结果。
[0028]图5：阴性标本检测结果。
[0029]图3中，底板1、样品垫2、吸附垫3、层析膜4、吸水垫5、检测线T和质控线C。
具体实施方式
[0030]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的产品，均落在本专利技术的保护范围之内。
[0031]下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购
获得的常规试剂产品。
[0032]实施例1：融合蛋白及其制备
[0033]本实施例提供了一种能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的融合蛋白；所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0034]所述融合蛋白的制备过程如下：
[0035]1、重组菌的制备
[0036]合成核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的编码融合蛋白HP2的基因；使用上游引物和下游引物对合成的基因进行PCR扩增，加入酶切位点Bam HⅠ/XhoⅠ，得到扩增产物(琼脂糖凝胶电泳回收扩增产物，扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果见图1)；将扩增产物与pMAl
‑
C2质粒(购自优宝公司)用限制性内切酶Bam HⅠ/XhoⅠ(购自NEB公司)酶切后连接，得到连接产物；将连接产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α(购自北京擎科生物有限公司)，得到转化产物；将转化产物涂布在含有100μg/mL氨苄霉素的LB固体培养基(购自索莱宝公司)上，于37℃恒温培养箱中倒置培养12h，得到转化子；挑取转化子接种至含有5mL含有100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基(购自索莱宝公司)中，于37℃、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，其特征在于，所述试纸以融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原；所述融合蛋白包括：(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；或者，(b)与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽。2.如权利要求1所述的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，其特征在于，所述试纸包括层析膜；所述层析膜的一端连接吸附垫；所述吸附垫上担载免疫标记的上述融合蛋白和免疫标记的第一抗体；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线和质控线；所述检测线上包被上述融合蛋白；所述质控线上包被第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合。3.如权利要求2所述的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，其特征在于，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～1μg/cm2。4.如权利要求2或3所述的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，其特征在于，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～5μg/c...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蕾，欧卫军，陈兰兰，朱益丹，
申请(专利权)人：南通伊仕生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：