一种基于内标法的SARS-CoV-2表面抗原SERS检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于内标法的SARS

【技术实现步骤摘要】
一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法


[0001]本专利技术属于本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法。

技术介绍

[0002]在印度物理学家Raman发现拉曼散射后，经过将近一个世纪的发展，其中表面增强拉曼光谱(SERS)技术随着激光技术、计算机科学以及纳米科学等的发展，其高表面灵敏性，无需样品预处理、操作简便、检测速度快、准确率高、仪器便携等特点，SERS检测在食品安全、公共安全、国防安全、生物检测等领域起到了积极的作用。
[0003]新型冠状病毒感染病毒SARS
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CoV
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2的检测方法中的病原学及血清学检查主要有核酸检测、抗体检测、抗原检测。其中，核酸检测是SARS
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CoV
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2检测的“金标准”，但存在耗时较长、无法现场检测的缺点。而抗体检测则需要一定的窗口期，难以实现感染者的早期诊断。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：制备免疫磁珠捕获纳米粒子：将新型冠状病毒抗原的核酸适配体修饰在已经修饰了链霉亲和素的磁性微球上，以形成免疫磁珠捕获纳米粒子；S2：制备金属纳米粒子；S3：制备免疫金属信号纳米粒子：将步骤S2制备的金属纳米粒子与拉曼信号分子和巯基修饰的新型冠状病毒抗原的核酸适配体进行混合，并封闭活性位点，获得免疫金属信号纳米粒子；S4：制备内标金属信号纳米粒子：将步骤S2制备的金属纳米粒子与内标信号分子和巯基修饰的乱序核酸适配体进行混合，并封闭活性位点，获得内标金属信号纳米粒子；S5:三明治结构的制备：将步骤S1制得的免疫磁珠捕获纳米粒子、待测样、步骤S3制得的免疫金属信号纳米粒子和步骤S4制得的内标金属信号纳米粒子一起混合、孵育后进行磁吸分离，获得含内标的三明治结构；S6：SARS
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CoV
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2病毒的检测：将步骤S5获得的含内标的三明治结构进行拉曼检测，得到新型冠状病毒抗原的拉曼光谱结果。2.如权利要求1所述的一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，还包括步骤S7，结果的判断，通过免疫信号与内标信号的比值来定性识别出新型冠状病毒。3.如权利要求1所述的一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，所述步骤S1、S3、S4中核酸适配体为新型冠状病毒表面刺突蛋白的核酸适配体，核酸适配体生物素标记为末端修饰生物素标记。4.如权利要求1所述的一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，所述步骤S1包括取100
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1000ul浓度为1
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10ug/ul的修饰了链霉亲和素的磁珠，加入B&W洗涤缓冲液，涡旋混匀使磁珠充分悬浮，磁吸弃去上清液；将上述磁珠在B&W洗涤缓冲液重悬至最终浓度的一半，加入10
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200ul 100uM生物素化适配体，在室温下孵育5
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30min，磁吸弃去上清液，并用洗涤缓冲液洗涤，重悬于PBS溶液中，然后加入100
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3000ul封闭剂，室温下反应1
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5h封闭磁珠表面的剩余结合位点，磁分离，并用PBS溶液洗涤，最后重新分散在PBS溶液中，制得所述的免疫磁珠捕获纳米粒子。5.如权利要求4所述的一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，所述磁珠的粒径为1
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5μm；所述缓冲液为B&W洗涤缓冲液，其组成包括pH 4
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8的1
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50mM Tris
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HCl、1
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10mM EDTA和2
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10mM NaCl；所述封闭剂为质量分数为1％
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25％的BSA溶液。6.如权利要求1所述的一种基于内标法的SARS
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CoV
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2表面抗原SERS检测方法，其特征在于，所述步骤S1中的核酸适配体为5
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biotin
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ATCCAGAGTGACGCAGCATTTCATCGGGTCCAAAAGGGGCTGCTCGGGATTGCGGATATGGACACGT
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3、5
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biotin
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CAGCACCGACCTTGTGCTTTGGGAGTGCTGGTCCAAGGGCGTTAATGGACA
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3、5
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【专利技术属性】
技术研发人员：李剑锋，许珊珊，张月皎，陈泽辉，
申请(专利权)人：嘉庚创新实验室厦门市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：