一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒及其应用，涉及生物技术检测领域。该塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒，包括包被有重组蛋白SVA

【技术实现步骤摘要】
一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物技术检测领域，具体涉及一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]塞内卡病毒A(SenecavirusA，SVA)是引起猪原发性水疱病(PIDV)的致病病原，其感染猪的临床表现与口蹄疫(FMD)、猪水疱病(SVD)、猪水疱性口炎(VS)等猪重要水疱性疫病非常相似，以患猪鼻吻部、蹄冠部出现水疱，同时伴有厌食、跛行、发烧、嗜睡等症状为主。各年龄段的猪均易感，1～3日龄的仔猪感染死亡率最高，为30％～70％。SVA自从2018年传入我国广东以来，迅速席卷了多个省份，呈现全国蔓延趋势。该病给临床工作者对于猪水疱性疫病的准确上报带来了困难，造成了巨大的人力物力浪费。为减少我国养猪业的经济损失，借助实验室手段防控SVA疫情是必经之径。
[0003]目前，检测SVA抗体的试剂盒特异性及灵敏不理想。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测塞内卡病毒A抗体的竞争ELISA检测方法，以解决塞内卡病毒A抗体检测方法特异性及灵敏性不理想的问题。
[0005]本专利技术的目的采用如下技术方案实现：
[0006]一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒，包括包被有重组蛋白SVA
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VP1
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opti的酶标板和检测抗体；重组蛋白SVA
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VP1
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opti的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述检测抗体是由保藏编号为CGMCC No.45146的杂交瘤细胞株SVA
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VP1
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3分泌的单克隆抗体。
[0007]在本专利技术中，所述重组蛋白SVA
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VP1
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opti是将重组蛋白SVA
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VP1
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opti的编码基因重组至表达载体，转化入宿主细胞，最后诱导表达所得。
[0008]在本专利技术中，所述重组蛋白SVA
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VP1
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opti的编码基因如SEQ ID NO.1所示，所述表达载体为pGEX
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6P
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1，所述宿主细胞为大肠杆菌。
[0009]在本专利技术中，所述酶标板中重组蛋白SVA
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VP1
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opti包被的浓度为3
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5μg/mL。
[0010]在本专利技术中，所述检测抗体的浓度为0.4
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0.6μg/mL。
[0011]在本专利技术中，所述试剂盒还包括辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG抗体、洗涤液、阳性对照血清、阴性对照血清、显色液和终止液。
[0012]在本专利技术中，所述阳性对照血清是将重组蛋白SVA
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VP1
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opti免疫兔后所得；所述洗涤液为PBST缓冲液；所述终止液是2M的硫酸水溶液。
[0013]本专利技术还提供所述试剂盒在以非诊断为目的检测塞内卡病毒A抗体中的应用。
[0014]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的抗SVA单克隆抗体具有高效价和高特异性。本专利技术试剂盒用于检测塞内卡病毒A的抗体，具有高特异性和高灵敏度，可最大限度降低假阳性率，从而准确诊断动物是否感染SVA，进而减少对于其他猪水疱性疾病的错误判断，做到针对SVA疫情的精准防控，减少养猪业的经济损失。与现有的SVA抗体检测方法相比，本专利技术
具有更高的准确性，以及更低的检测成本。
附图说明
[0015]图1是重组表达载体pET
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32a
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SVA
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VP1
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opti和pGEX
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6P
‑1‑
SVA
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VP1
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opti的结构示意图，其中SVA
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VP1是指SVA
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VP1
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opti片段。
[0016]图2是重组表达载体pET
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32a
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SVA
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VP1
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opti和pGEX
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6P
‑1‑
SVA
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VP1
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opti经EcoR I和Not I双酶切鉴定电泳图，泳道1：载体pET
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32a双酶切产物，泳道2：pET
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32a
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SVA
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VP1
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opti双酶切产物，泳道3：载体pGEX
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6P
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1双酶切产物，泳道4：pGEX
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6P
‑1‑
SVA
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VP1
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opti双酶切产物。
[0017]图3为经IPTG诱导后各重组菌裂解产物的上清和沉淀的SDS
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PAGE电泳图，M：蛋白分子质量标准；泳道1:重组菌BL21(DE3)/pGEX
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6P
‑1‑
SVA
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VP1
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opti裂解产物上清；2:重组菌BL21(DE3)/pGEX
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6P
‑1‑
SVA
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VP1
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opti裂解产物沉淀；3:重组菌BL21(DE3)/pGEX
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6P
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1裂解产物上清；4:重组菌BL21(DE3)/pGEX
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6P
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1裂解产物沉淀；5:重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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SVA
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VP1
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opti裂解产物上清；6:重组菌BL21(DE3)/pET
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32a
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SVA
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VP1
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opti裂解产物沉淀；7:重组菌BL21(DE3)/pET
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32a裂解产物上清；8:重组菌BL21(DE3)/pET
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32a裂解产物沉淀；箭头表示目的蛋白。
[0018]图4分别是诱导表达时间、IPTG浓度和诱导表达温度对GST
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SVA
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VP1
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opti蛋白表达影响的SDS
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PAGE鉴定图，A：诱导时间对GST
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SVA
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VP1
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opti蛋白表达影响的SDS
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PAGE鉴定图，其中M：蛋白分子质量标准；泳道0～8，分别是诱导表达0、1、2、3、4、5、6、7、8h后重组菌裂解产物上清，箭头表示目的蛋白；B：诱导剂浓度对GST
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SVA...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种塞内卡病毒A的抗体检测试剂盒，其特征在于包括包被有重组蛋白SVA
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VP1
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opti的酶标板和检测抗体；重组蛋白SVA
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VP1
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opti的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述检测抗体是由保藏编号为CGMCC No.45146的杂交瘤细胞株SVA
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VP1
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3分泌的单克隆抗体。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于所述重组蛋白SVA
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VP1
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opti是将重组蛋白SVA
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VP1
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opti的编码基因重组至表达载体，转化入宿主细胞，最后诱导表达所得。3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于所述重组蛋白SVA
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VP1
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opti的编码基因如SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛峰，尼博，彭宛淸，钱炳旭，廖凯，汤芳，戴建君，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：