用于鉴别六个冬青品种的引物组合及方法技术

本发明专利技术提供一种用于鉴别不同冬青品种的引物组合及鉴别方法。所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
用于鉴别六个冬青品种的引物组合及方法


[0001]本申请涉及生物检测领域，具体地说涉及对冬青品种资源进行检测的引物组合及PCR检测方法。

技术介绍

[0002]冬青属（Ilex）植物为冬青科（Aquifoliaceae）常绿或落叶乔木或灌木，优良的冬青品种具有生长速度快、适应能力强、树姿优美，枝叶繁茂，果色鲜亮等观赏价值，还有些冬青品种的树根、枝、叶及树皮可入药，具有很高经济价值和生态价值。现在，随着人民生活水平的提高，对环境的要求也越来越高。因此，一些优良的冬青品种更广泛地被应用在道路、公园、庭院、校园环境的美化中。
[0003]许多优良的冬青品种是通过扦插的方式进行繁殖，在苗木的工厂化生产过程中，如果保障品种树苗的一致性，以及如何保障出圃苗木的质量，成为目前冬青苗木生产、销售中面临的亟待解决的问题。
[0004]目前，已有越来越多的植物物种界定、纯度鉴定和品种鉴别是通过叶绿体基因组中的遗传多样性来分析解决的。
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Wirt L. Winn
’
、代茶冬青、大别山冬青、中型冬青、钝齿冬青和狭冠冬青是较为常见的冬青品种，本专利技术旨在利用叶绿体基因组中的多态性位点为标记，设计引物，为这6个冬青品种提供高效、精准的鉴别方法，从而解决生产和销售过程中的面临的纯度检测及品种鉴别问题。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用，以解决目前没有快速、准确鉴别冬青的品种的技术问题。
[0006]本申请提供了用于鉴别冬青品种的引物组合，所述引物组合包括引物组A，所述引物组A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0007]所述引物组合还包括引物组B，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示。
[0008]所述引物组合还包括引物组C，所述引物组C的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示。
[0009]所述引物组合还包括引物组D，所述引物组D的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示。
[0010]所述引物组合还包括引物组E，所述引物组E的核苷酸序列如SEQ ID NO.9
‑
10所示。
[0011]所述引物组合还包括引物组F，所述引物组F的核苷酸序列如SEQ ID NO.11
‑
12所示。
[0012]所述引物组合还包括引物组G，所述引物组G的核苷酸序列如SEQ ID NO.13
‑
14所示。
[0013]本申请提供了所述的引物组合在检测冬青品种方法中的应用。
[0014]本申请提供了检测冬青品种的方法，所述方法包括使用所述的引物组合，并通过对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后的条带进行判断。
[0015]可选的，所述扩增反应包括变性、退火和引物延伸；所述变性的温度为98℃；所述退火的温度为55
‑
61℃；所述引物延伸的温度为72℃。
[0016]可选的，所述扩增产物使用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电压120v，时间25
‑
30min。
[0017]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：本申请建立了适用于检测6个冬青品种的引物组合及检测方法，利用这组特异性引物鉴定区分冬青品种时，可以快速、准确的鉴定出结果；所用方法为常规的PCR反应，成功率高；结果以琼脂糖凝胶电泳图的形式呈现，操作方法简单，且成本低廉。
附图说明
[0018]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，展示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本申请实施例2提供的电泳图；图2为本申请实施例3
‑
8提供的电泳图；其中，1代表
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Wirt L. Winn
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、2代表代茶冬青、3代表大别山冬青、4代表中型冬青、5代表钝齿冬青和6代表狭冠冬青。
具体实施方式
[0021]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0022]根据本专利技术一种典型的实施方式，提供了一种用于检测冬青品种的引物组合，所述引物组合包括引物组A，所述引物组A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0023]引物组A根据冬青叶绿体基因组的保守位点设计，旨在作为正对照，所有这6个冬青品种均可扩增出大小相同的条带，如果未扩增出条带，则说明所取样品品种、DNA模板、PCR反应液或PCR程序等可能存在问题。
[0024]‘
Wirt L. Winn
’
可以通过引物组B进行鉴别，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示；也可以通过引物组D+E+F进行鉴别，所述引物组D、E和F的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8、SEQ ID NO.9
‑
10和SEQ ID NO.11
‑
12所示。
[0025]代茶冬青可以通过引物组C进行鉴别，所述引物组C的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示；也可以通过引物组B+E+G进行鉴别，所述引物组B、E和G的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4、SEQ ID NO.9
‑
10和SEQ ID NO.13
‑
14所示。
[0026]大别山冬青可以通过引物组D进行鉴别，所述引物组D的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示。
[0027]中型冬青可以通过引物组F进行鉴别，所述引物组F的核苷酸序列如SEQ ID NO.11
‑
12所示。
[0028]狭冠冬青可以通过引物组G进行鉴别，所述引物组G的核苷酸序列如SEQ ID NO.13
‑
14所示。
[0029]钝齿冬青可以通过引物组B进行鉴别，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示；也可以通过引物组E+G进行鉴别，所述引物组E和G的核苷酸序列如SEQ ID NO.9
‑
10和SEQ ID NO.13
‑
14所示。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测冬青品种的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物组A，所述引物组A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组B，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示。3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组C，所述引物组C的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示。4.根据权利要求3所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组D，所述引物组D的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示。5.根据权利要求4所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组E，所述引物组E的核苷酸序列如SEQ ID NO.9
‑
10所示。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：种昕冉，张凡，陈红，周艳威，周婷，李云龙，王传永，陆小清，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：