【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及表达香蕉植保素苯基非那烯酮生物合成关键酶工程菌株的构建，并应用工程菌株制备甲氧基苯基非那烯酮类化合物的应用。
技术介绍
1、苯基非那烯酮是野生香蕉中的植保素，可抵御多种病原菌的侵害，尤其是甲氧基苯基非那烯酮其抗病活性大大增强。然而，在许多具有经济价值的芭蕉科植物中，甲氧基苯基非那烯酮的含量较低。解析苯基非那烯酮的生物合成和应用生物合成方法提高其产量对防治香蕉疾病至关重要。然而，苯基非那烯酮的生物合成过程，特别是涉及甲基化修饰的过程仍不清楚。因此鉴定甲氧基苯基非那烯酮合成关键酶可为香蕉抗病育种提供宝贵的遗传资源，也为通过工程菌株生物转化绿色高效获得甲氧基苯基非那烯酮奠定基础。
技术实现思路
1、本专利技术提供了3个苯基非那烯酮甲基转移酶基因及其编码基因，通过构建大肠杆菌工程菌株生物转化合成甲氧基苯基非那烯酮的应用，为大量制备多种甲氧基苯基非那烯酮提供一种绿色的途径。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
3、上述工程菌中，所述过表达苯基非那烯酮甲基转移酶基因ml01g0494，ml04g2958和ml08g0855的方法是将所述甲基转移酶基因序列分别重组至外源表达质粒的启动子之后进行表达。
4、所述片段是通过重组表达载体导入；
5、所述表达载体具体是将ml01g0494，ml04g2958和ml08g0855片段分别插入pmal-c4x的ecor i/sal i酶切位点之间，构建pmal-m
6、所述ml01g0494，ml04g2958和ml08g0855的核苷酸序列如seq no.1、seq no.2和seqno.3所示。
7、上述所述的工程菌的底盘菌株为大肠杆菌e.coli bl21(de3)。
8、本专利技术所述工程菌催化制备甲氧基苯基非那烯酮的方法，其合成路线如图1所示，采用上述生物催化制备甲氧基苯基非那烯酮的方法的技术方案分述如下：利用pmal-ml01g0494、pmal-ml04g2958和pmal-ml04g2958工程菌株对苯基非那烯酮催化，生成甲氧基苯基非那烯酮。
9、本实施例基于地涌金莲转录组功能注释信息，在测序注释结果中对甲基转移酶基因进行筛选，采用序列比对分析，在地涌金莲种子转录组中发现了3个高表达的甲基转移酶基因ml01g0494，ml04g2958和ml08g0855。进行地涌金莲cdna的制备、基因的扩增、克隆、蛋白表达、体外酶活测定和lc/ms检测等研究，鉴定催化生成甲氧基苯基非那烯酮的氧甲基转移酶基因。
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1.香蕉植保素甲氧基苯基非那烯酮生物合成的关键酶基因Ml01G0494，Ml04G2958和Ml08G0855，其特征是具有如核苷酸序列如Seq No.1、Seq No. 2和Seq No.3所示。
2.根据权利要求1所述的基因编码的蛋白，其特征在于Seq No.1、Seq No. 2和SeqNo.3编码的氨基酸序列。
3.含有如权利要求2或3所述的Ml01G0494，Ml04G2958和Ml08G0855编码基因的重组载体。
4.表达如权利要求1所述的Ml01G0494，Ml04G2958和Ml08G0855转基因工程菌株，其特征在于：所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。
5.如权利要求3或4所述的表达Ml01G0494，Ml04G2958和Ml08G0855的工程菌株在制备甲氧基苯基非那烯酮的应用。
【技术特征摘要】
1.香蕉植保素甲氧基苯基非那烯酮生物合成的关键酶基因ml01g0494，ml04g2958和ml08g0855，其特征是具有如核苷酸序列如seq no.1、seq no. 2和seq no.3所示。
2.根据权利要求1所述的基因编码的蛋白，其特征在于seq no.1、seq no. 2和seqno.3编码的氨基酸序列。
3.含有如权利要求2或3所述的ml01g...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵万里，陈雨，李丕睿，吴君芝，冯煦，冯博雅，王瑞阳，徐曙，王碧，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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