本发明专利技术涉及一种芥子醇酰基转移酶基因及其编码蛋白的用途，本发明专利技术在续随子中鉴定获得续随子甲氧基丁香酚生物合成的关键酶基因ElBAHD10。本发明专利技术应用ElBAHD10基因构建了生物转化合成甲氧基丁香酚的大肠杆菌工程菌，利用工程菌生物转化获得甲氧基丁香酚，无需通过植物提取或化学合成获得甲氧基丁香酚。本发明专利技术提供的ElBAHD10基因可以通过生物工程菌株发酵绿色生产甲氧基丁香酚，具有巨大的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术生物转化领域，具体涉及表达甲氧基丁香酚生物合成关键酶工程菌株的构建，并应用构建的工程菌株制备甲氧基丁香酚化合物的应用。
技术介绍
1、甲氧基丁香酚是一种从植物中提取的苯基丙烯化合物，具有多种生物活性。应用于食品、香料和医药等领域，甲氧基丁香酚具有抗肺炎、抗肝炎、抗癌细胞增殖的作用。此外，甲氧基丁香酚作为一种植物源性防御化合物已被证明具有抗真菌作用。然而，从肉豆蔻等植物中分离甲氧基丁香酚的产率仅为0.00061%，虽然紫丁香酸可以一步化学合成甲氧基丁香酚，但存在，得率低、使用的原料和试剂污染风险大的问题。随着对甲氧基酚需求量的增加，有必要寻找一种新的可持续实用的方法来生产该类化合物。通过生物转化法可以有效地解决甲氧基丁香酚的生产问题。但是目前甲氧基丁香酚生物合成途径有待解析，特别是由中间体芥子醇成脂的关键步骤不清楚。影响了甲氧基丁香酚生物合成方面的研究及应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种芥子醇酰基转移酶基因及其编码基因和在制备甲氧基丁香酚的应用，该酶能够在微生物中将芥子醇高效生物转化合成甲氧基丁香酚，为大量制备甲氧基丁香酚提供一种新的途径。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
3、上述工程菌中，所述过表达芥子醇酰基转移酶基因elbahd10酶基因的方法是将所述乙酰基转移酶elbahd10酶基因的全部序列置于外源表达质粒的启动子之后进行表达。
4、所述片段是通过重组表达载体导入；
>5、所述表达载体具体是将所述elbahd10片段插入pmal-c4x的ecor i/sal i酶切位点之间，构建pmal-elbahd10重组表达质粒。6、所述续随子酰基转移酶elbahd10的核苷酸和氨基酸序列如seq id no.1和seq idno. 2所示。
7、上述所述的工程菌的底盘菌株为大肠杆菌
e.coli bl21(de3)。
8、本专利技术所述工程菌催化制备甲氧基丁香酚的方法，其合成路线如下所示，利用elbahd10工程菌株对芥子醇催化，生成关键酯化中间体，关键中间体利用大肠杆菌自身的egs基因催化生成化合物甲氧基丁香酚。
9、本实施例基于续随子转录组unigene功能注释信息，在测序注释结果中对酰基转移酶候选基因进行筛选，采用序列blast分析，在续随子转录组中发现了1个酰基转移酶基因。随后进行续随子cdna的制备、候选基因的扩增、克隆、蛋白表达、体外酶活反应和hplc-lc/ms检测等工作后，最终鉴定催化芥子醇上酰基化反应的elbahd10基因。
10、
本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种甲氧基丁香酚生物合成的关键酶基因ElBAHD10，其特征是具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的基因编码的蛋白，其特征在于如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
3.含有如权利要求2或3所述的ElBAHD10编码基因的重组载体。
4.表达如权利要求1所述的ElBAHD10转基因工程菌株，其特征在于：所述大肠杆菌为E.Coli BL21(DE3)。
5.如权利要求3或4所述的表达ElBAHD10的工程菌株在制备甲氧基丁香酚的应用。
【技术特征摘要】
1. 一种甲氧基丁香酚生物合成的关键酶基因elbahd10，其特征是具有如seq id no.1所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的基因编码的蛋白，其特征在于如seq id no.2所示的氨基酸序列。
3.含有如权利要求2或3所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵万里，陈雨，徐曙，王帆，冯煦，李林蔚，吕威，田梅，李丕睿，刘飞，管福琴，王奇志，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。