川党参的SSR分子标记及其应用、川党参药材的鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种川党参的SSR分子标记，所述川党参的SSR分子标记是由序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物扩增得到。其中，所述上游引物的5

【技术实现步骤摘要】
川党参的SSR分子标记及其应用、川党参药材的鉴别方法


[0001]本专利技术涉及中药鉴别
，尤其涉及一种川党参的SSR分子标记及其应用、川党参药材的鉴别方法。

技术介绍

[0002]党参是多基原药材，基原分别为桔梗科党参属植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川党参Codonopsis tangshen Oliv.，主要分布于山西晋城陵川、甘肃定西渭源、甘肃陇南、甘肃天水甘谷、贵州毕节威宁等地。党参在具有健脾益肺，养血生津的功效，在临床上应用广且用量较大。
[0003]近年来随着中药“一药一名一基原”原则的逐步推进，国家药监局出台了《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》，规定“来源如为多基原中药材，应固定一个基原，不同基原的中药材不可相互混用”。因从外观来看，三种党参的药材形态极其相似，目前暂无其他有效区分手段。此外，除不同党参基原外，其他同科种类植物的根在局部地区上亦作党参药用流入市场，但功效相差甚大，尤其是同科植物金钱豹，其为桔梗科金钱豹属植物金钱豹Campanumoea javanica Bl.的干燥根，俗名称土党参、野党参果、土人参等，在贵州等地区作为“土党参”使用，其与党参药材种间变异较大，药效相差较大，因此建立合适的方法去区分不同基原的党参药材及其配方颗粒具有重要意义。
[0004]目前针对党参的分子鉴定技术包括DNA条形码、SSR标记、ISSR标记等，多针对党参属种间的物种遗传多样性研究。而对于党参的品质鉴定因其种植存在一定程度的混杂、不纯，以外观形态和理化指标难以保证其品种纯度。目前关于党参的SSR标记相关文献较少，相关专利包括在党参属物种cpSSR标记中，通过5对cpSSR标记，以琼脂糖电泳，从轮叶党参、野生和栽培党参中能区分轮叶党参；在羊乳(Codonopsis lanceolata)和轮叶沙参(Adenophora triphylla)系列专利中，多通过SSR标记区分羊乳(Codonopsis lanceolata)、党参(Codonopsis pilosula)、轮叶沙参(Adenophora triphylla)和雀斑党参(Codonopsis ussuriensis)及党参的不同年限等。
[0005]但上述公开资料均未涉及对药用党参不同基原及其他伪品药材的鉴别，无法有效区分党参不同基原。因此，通过SSR分子标记鉴定党参中的川党参基原，针对川党参药材进行特异性鉴别，对固定多来源党参药材的基原，使其符合药用标准有重要的意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种川党参的SSR分子标记，其可有效鉴别川党参药材的真伪。
[0007]本专利技术还要解决的技术问题在于，提供所述川党参的SSR分子标记的应用。
[0008]本专利技术还要解决的技术问题在于，提供一种川党参药材的鉴别方法，其准确度好、专属性高。
[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种川党参的SSR分子标记，所述川党参的SSR分子标记是由序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物扩增得到。其中，所述上游引物的5
’
端挂载荧光标记基团，所述荧光标记基团选自荧光素FAM、荧光素ROX、荧光素HEX和荧光素TAMARA中的一种。
[0010]表1为所述上游引物和下游引物的具体序列
[0011][0012]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了所述的川党参的SSR分子标记在(1)或(2)中的应用：
[0013](1)鉴定川党参的真伪；
[0014](2)从党参属党参、素花党参、川党参及金钱豹药材中，特异性鉴别川党参药材和金钱豹药材。
[0015]在一种实施方式中，包括以下步骤：
[0016]提取待测样品的基因组DNA；
[0017]以待测样品基因组DNA为模板，利用如表1所述的川党参的SSR分子标记的上游引物和下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
[0018]对所述PCR扩增产物进行毛细管电泳检测；
[0019]若检测出现105bp
‑
106bp和106bp
‑
107bp片段的特征双峰，则待测样品为川党参药材；
[0020]若检测出现96bp
‑
97bp和97bp
‑
98bp片段的特征双峰，则待测样品为金钱豹药材。
[0021]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种川党参药材的鉴别方法，包括以下步骤：
[0022]提取待测样品的基因组DNA；
[0023]以待测样品基因组DNA为模板，利用如表1所述的川党参的SSR分子标记的上游引物和下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
[0024]将所述PCR扩增产物进行毛细管电泳检测，根据检测结果判断所述待测样品是否为川党参药材。
[0025]在一种实施方式中，所述PCR扩增的程序为：将扩增体系在94℃
‑
96℃的温度下预变性2min
‑
4min；
[0026]在94℃
‑
96℃的温度下变性5s
‑
15s，然后在50℃
‑
60℃的温度下退火5s
‑
15s，再在70℃
‑
75℃的温度下延伸5s
‑
15s，重复上述操作33
‑
36次；
[0027]在70℃
‑
75℃的温度下延伸4min
‑
6min后于3℃
‑
5℃下完成保存。
[0028]在一种实施方式中，所述PCR扩增的反应体系包括：2
×
M5 Supper FastTaq PCR 9μL
‑
11μL，所述上游引物0.2μL
‑
0.8μL，所述下游引物0.2μL
‑
0.8μL，DNA模板0.5μL
‑
1.5μL，灭菌双蒸水补足至20μL。
[0029]在一种实施方式中，所述DNA模板的浓度为25ng/μl
‑
35ng/μl；
[0030]所述上游引物的浓度为8μmol/L
‑
12μmol/L；
[0031]所述下游引物的浓度为8μmol/L
‑
12μmol/L。
[0032]在一种实施方式中，所述电泳检测包括：以毛细管电泳检测扩增序列。
[0033]在一种实施方式中，若所述检测结果中出现105bp
‑
106bp和106bp
‑
107bp片段的特征双峰，则待测样品为川党参药材；否则待测样品为伪劣品。
[0034]在一种实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种川党参的SSR分子标记，其特征在于，所述川党参的SSR分子标记是由序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物扩增得到；其中，所述上游引物的5
’
端挂载荧光标记基团，所述荧光标记基团选自荧光素FAM、荧光素ROX、荧光素HEX和荧光素TAMARA中的一种。2.如权利要求1所述的川党参的SSR分子标记在(1)或(2)中的应用：(1)鉴定川党参的真伪；(2)从党参属党参、素花党参、川党参及金钱豹药材中，特异性鉴别川党参药材和金钱豹药材。3.如权利要求2所述的川党参的SSR分子标记的应用，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA；以待测样品基因组DNA为模板，利用如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对所述PCR扩增产物进行毛细管电泳检测；若检测出现105bp
‑
106bp和106bp
‑
107bp片段的特征双峰，则待测样品为川党参药材；若检测出现96bp
‑
97bp和97bp
‑
98bp片段的特征双峰，则待测样品为金钱豹药材。4.一种川党参药材的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA；以待测样品基因组DNA为模板，利用如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ ID NO：2所示的下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；将所述PCR扩增产物进行毛细管电泳检测，根据检测结果判断所述待测样品是否为川党参药材。5.如权利要求4所述的川党参药材的鉴别方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：将扩增体系在94℃
‑
96℃的温度下预变性2min
‑
4min；在94℃
‑
96℃的温度下变性5s
‑
15s...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁媛，蒋超，孙冬梅，陈向东，罗宇琴，黄上书，李国卫，沈斌斌，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：