一种用于提高CRISPR/Cas9系统基因编辑效率的启动子、基因编辑载体与应用技术方案

本发明专利技术提供了一种用于提高CRISPR/Cas9系统基因编辑效率的启动子、基因编辑载体与应用，属于基因工程技术领域，所述启动子为丹参SmRPS5A、SmEF1α或SmUBi启动子，所述丹参SmRPS5A启动子的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述丹参SmEF1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述丹参SmUBi启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。研究表明，丹参SmRPS5A启动子对3个sgRNA靶点的基因编辑效率均达到了91％以上，SmEF1α和SmUBi对sgRNA3靶点的基因编辑效率也达到了87.50％以上，能够为后期筛选基因编辑阳性植株提供重要依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，尤其涉及一种用于提高crispr/cas9系统基因编辑效率的启动子、基因编辑载体与应用。

技术介绍

1、丹参(salvia miltiorrhiza)是一种高价值的中药，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功能。由于其基因组小、活性成分生物合成途径清晰、遗传转化技术成熟的特点，具有成为药用模式植物的潜力。在丹参育种的过程中，传统育种技术仍占据重要地位，但是育种周期长、效率低；人工诱变虽然提高了变异频率，但育种精度低，筛选难度大；杂交育种虽然能够弥补两者的不足，却也面临着远缘杂交不亲和的问题。

2、crispr-cas9基因编辑系统的建立有助于创造具有特定性状但不含有外源基因的种质资源，消除了转基因植物的生物安全忧虑。以基因编辑手段创制作物种质已被广泛认可，因此，将基因编辑技术应用到药用植物，特别是药用模式植物中，对揭示道地药材形成的分子机制及定向培育高产新品种具有重要意义。crispr-cas9基因编辑技术是通过人工设计的sgrna(guide rna)来识别目的基因、并引导cas9蛋白酶进行目的基因的切割，形成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.丹参SmRPS5A、SmEF1α或SmUBi启动子在提高CRISPR/Cas9基因编辑效率中的应用，其特征在于，所述丹参SmRPS5A启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述丹参SmEF1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述丹参SmUBi启动子的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示。

2.用于扩增丹参SmRPS5A、SmEF1α或SmUBi启动子的引物组，其特征在于，扩增丹参SmRPS5A启动子的引物组如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示，扩增SmEF1α启动子的引物组如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示，扩增...

【技术特征摘要】

1.丹参smrps5a、smef1α或smubi启动子在提高crispr/cas9基因编辑效率中的应用，其特征在于，所述丹参smrps5a启动子的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述丹参smef1α启动子的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述丹参smubi启动子的核苷酸序列如seq idno.3所示。

2.用于扩增丹参smrps5a、smef1α或smubi启动子的引物组，其特征在于，扩增丹参smrps5a启动子的引物组如seq id no.4和seq id no.5所示，扩增smef1α启动子的引物组如seq id no.6和seq id no.7所示，扩增smubi启动子的引物组如seq id no.8和seq idno.9所示。

3.一种用于提高crispr/cas9基因编辑效率的基因编辑载体，其特征在于，包括权利要求1所述的丹参smrps5a、smef1α和smubi启动子中的一种。

4.根据权利要求3所述的基因编辑载体，其特征在于，还包括初始载体，初始载体上克隆有用于靶向目的基因的sgrna序列和编码cas9蛋白的核苷酸序列。

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【专利技术属性】
技术研发人员：黄璐琦，郑汉，李辰意，高晓凯，虞慕瑶，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：