一种具有CD47结合活性的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种具有CD47结合活性的单克隆抗体，还提供了本发明专利技术抗体在制备抗肿瘤药物或纤维化疾病的药物中的用途。本发明专利技术所述的具有CD47结合活性的单克隆抗体与人CD47亲和力较高，相较于现有抗人CD47单克隆抗体，具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。作用。作用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有CD47结合活性的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种具有CD47结合活性的单克隆抗体，以及其在制备抗肿瘤药物或纤维化疾病的药物中的用途。

技术介绍

[0002]分化抗原簇47(cluster of differentiation 47，CD47)是肿瘤细胞上过度表达的免疫调节分子，其分子结构包括N末端的细胞外可变结构域，五个疏水的跨膜螺旋结构，以及一个非常短的C末端的细胞内信号序列。与PD
‑
1等直接作用于T细胞的免疫检查点不同，CD47主要通过与信号调节蛋白α(Signal
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regulatory protein，SIRPα)结合，抑制巨噬细胞的吞噬作用。
[0003]CD47与SIRPα结合后，引起ITIMs(免疫受体酪氨酸抑制基序)酪氨酸磷酸化，磷酸化的ITIMs募集后激活蛋白酪氨酸磷酸酶SHP
‑
1/2，抑制下游肌球蛋白IIA，阻止巨噬细胞吞噬。CD47
‑
SIRPα还会抑制树突状细胞的成熟，进而抑制其产生细胞因子，阻止将肿瘤抗原递呈给CD8
+
T细胞。CD47在乳腺癌、非小细胞型肺癌和胃癌等实体瘤和血液系统恶性肿瘤中过表达，通常与不良预后相关。
[0004]IgG4在血浆中的含量为1％
‑
4％，以该亚型制备的CD47抗体红细胞的毒副作用有限。莫洛利单抗(Hu5F9
‑
G4，Magrolimab)最初由Forty Seven公司(现被吉利德公司收购)研发，就是将人源化5F9可变片段连接到IgG4骨架上，以减少对红细胞的杀伤作用。莫洛利单抗是目前进展最快的人源化抗CD47单克隆抗体，联合阿扎胞苷(Azacytidine)治疗骨髓增生异常综合征的Ⅲ期临床试验正在进行中(NCT04313881)。
[0005]近年来，针对CD47
‑
SIRPα信号通路介导的免疫逃逸进行的药物研发成为了肿瘤免疫治疗的热点。然而，目前已开发的抗人CD47单克隆抗体还存在亲和力较低或作用靶点如抗原表位不明确的问题。因此，亟需一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞，且亲和力较高的新型治疗性候选CD47抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种具有CD47结合活性的新型单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的CD47
‑
SIRPα阻断活性，同时具有较强促肿瘤细胞吞噬作用。
[0007]本专利技术提供了一种具有CD47结合活性的单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0008]所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；
[0009]所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；
[0010]所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0011]所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0012]所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；
[0013]所述的CDR
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L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；
[0014]所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。
[0015]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。
[0016]优选地，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
[0017]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG4的恒定区。
[0018]本专利技术进一步提供了一种编码上述单克隆抗体的核苷酸分子。
[0019]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：17；
[0020]序列SEQ ID NO：7编码所述的抗体的重链可变区；
[0021]序列SEQ ID NO：17编码所述的抗体的轻链可变区。
[0022]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0023]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0024]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0025]本专利技术进一步提供了上述单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0026](1)制备含有表达所述的单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0027](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0028](3)分离纯化，获得具有CD47结合活性的单克隆抗体。
[0029]本专利技术进一步提供了包括上述单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0030]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的具有CD47结合活性的单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0031]本专利技术进一步提供了上述单克隆抗体在制备抗肿瘤药物或纤维化疾病的药物中的应用。
[0032]优选地，所述肿瘤为血液瘤或实体瘤，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓母细胞白血病(AML)、卵巢癌、输卵管癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈部癌、胰腺癌、肺癌、胶质瘤和胶质母细胞瘤。
[0033]优选地，所述纤维化疾病包括心绞痛、骨关节炎、肺纤维化、哮喘和支气管炎。
[0034]有益效果：
[0035]本专利技术的具有CD47结合活性的单克隆抗体与人CD47亲和力较高，同时相较于现有抗人CD47单克隆抗体，具有较好的CD47
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SIRPα阻断活性，以及较强的促肿瘤细胞吞噬作用。
附图说明
[0036]图1为捕获ELISA测定抗体对人CD47蛋白的结合能力；
[0037]图2为捕获ELISA测定抗体对食蟹猴CD47蛋白的结合能力；
[0038]图3为流式细胞术测评抗体与表面过表达人CD47的293F细胞的结合；
[0039]图4为配体结合阻断ELISA；
[0040]图5为参照抗体阻断ELISA；
[0041]图6A
‑
6B为流式细胞术测评抗体诱导巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力。
具体实施方式
[0042]术语
[0043]“结合CD47”或“与CD47结合”，指能与人CD47相互作用。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有CD47结合活性的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；所述的CDR
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H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述的CDR
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L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；所述的CDR
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L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。2.根据权利要求1所述的具有CD47结合活性的单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，李红艳，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：