抗人CD47单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗人CD47单克隆抗体，同时提供了该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及用于表达该抗体的方法，还提供了包含本发明专利技术抗体的药物组合物及用途。本发明专利技术的抗人CD47单克隆抗体与人CD47亲和力较高，同时相较于现有抗人CD47单克隆抗体，还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。

【技术实现步骤摘要】
抗人CD47单克隆抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及抗人CD47单克隆抗体以及包含所述抗体的组合物，以及相关用途。

技术介绍

[0002]CD47属于免疫球蛋白超家族成员，广泛的表达于细胞的表面，可以结合多种蛋白，包括整合素、凝血栓蛋白
‑
1(thrombospondin
‑
1，TSP
‑
1)，并参与多种生理和病理过程，介导凋亡、增殖、免疫等一系列的反应。CD47在多种实体瘤细胞及恶性血液瘤细胞上呈现高表达，而且其表达水平与疾病进展呈正相关。这一广泛表达性意味着CD47或将是肿瘤治疗领域的一个重要靶点，可用于多类型癌症治疗。
[0003]SIRPα是属于SIRP受体家族的蛋白。SIRP的中文全称是信号调节蛋白(Signalregulatory proteins,SIRP)，是由位于染色体20p13位置的基因簇编码而来的受体家族，其家族包括SIRPα、SIRPβ1、SIRPγ、SIRPβ2和SIRPδ五个成员。SIRPα在人体内并非广泛表达，主要表达于髓系细胞表面(单核细胞、巨噬细胞、粒细胞以及髓系DC 细胞等)，也在神经系统的神经元细胞中表达。CD47可以与SIRPα结合后可以抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。
[0004]近年来，很多制药公司着眼于CD47靶点药物的开发。然而，目前已开发的抗人CD47 单克隆抗体还存在亲和力较低或作用靶点如抗原表位不明确的问题。因此，亟需一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞，且亲和力较高的治疗性候选CD47抗体。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种抗人CD47单克隆抗体及其用途，所述单克隆抗体与人CD47具有较高亲和力，同时具有较强促肿瘤细胞吞噬作用。
[0006]本专利技术提供了抗人CD47单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0007]所述重链可变区包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
‑ꢀ
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；
[0008]所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；
[0009]所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0010]所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0011]所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；
[0012]所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；
[0013]所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。
[0014]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如 SEQ ID NO：18所示。
[0015]优选地，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO： 20所示。
[0016]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG4的恒定区。
[0017]本专利技术进一步提供了一种编码所述的抗人CD47单克隆抗体的核苷酸分子。
[0018]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：17；
[0019]序列SEQ ID NO：7编码所述的抗体的重链可变区；
[0020]序列SEQ ID NO：17编码所述的抗体的轻链可变区。
[0021]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0022]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0023]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0024]本专利技术进一步提供了抗人CD47单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0025](1)制备含有表达所述的抗人CD47单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0026](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0027](3)分离纯化，获得抗人CD47单克隆抗体。
[0028]本专利技术进一步提供了包括所述的抗人CD47单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0029]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的抗人CD47单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0030]本专利技术进一步提供了所述的抗人CD47单克隆抗体在制备抗肿瘤药物或纤维化疾病的药物中的用途。
[0031]优选地，所述肿瘤为血液瘤或实体瘤，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓母细胞白血病(AML)、卵巢癌、输卵管癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈部癌、胰腺癌、肺癌、胶质瘤和胶质母细胞瘤。
[0032]优选地，所述纤维化疾病包括心绞痛、骨关节炎、肺纤维化、哮喘和支气管炎。
[0033]有益效果：
[0034]本专利技术的抗人CD47单克隆抗体与人CD47亲和力较高，同时相较于现有抗人CD47 单克隆抗体，还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用，能够诱导巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，其 EC
50
值低于两个参照抗体，显示出比参照抗体更强的促肿瘤细胞吞噬作用。
附图说明
[0035]图1为捕获ELISA测定抗体对人CD47蛋白的结合能力；
[0036]图2为捕获ELISA测定抗体对食蟹猴CD47蛋白的结合能力；
[0037]图3为流式细胞术测评抗体与表面过表达人CD47的293F细胞的结合；
[0038]图4为配体结合阻断ELISA；
[0039]图5为参照抗体阻断ELISA。
具体实施方式
[0040]术语
[0041]“结合CD47”或“与CD47结合”，指能与人CD47相互作用。
[0042]“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本文的抗体或抗原结合片段识别的三维空
间位点。
[0043]“单克隆抗体”指具有单一氨基酸组成的抗体分子的制备物，而不指其产生的方法。单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如通过杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、合成技术例如CDR嫁接、或此类或其它本领域已知的技术的组合来产生。
[0044]“亲和力”是指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，本文中，“结合亲和力”指反映抗体与抗原之间1∶1相互作用的内在结合亲和力。亲和力可通过本领域知道的常用方法来测量，包括现有技术已知以及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗人CD47单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。2.根据权利要求1所述的抗人CD47单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。3.根据权利要求1所述的抗人CD47...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：