一种抗人CRR9单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗人CRR9单克隆抗体及其制备方法和应用，同时提供了该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及用于表达该抗体的方法，还提供了包含本发明专利技术抗体的药物组合物及用途。本发明专利技术的抗人CRR9单克隆抗体具有高亲和力，具有较好的CRR9

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CRR9单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗人CRR9的单克隆抗体或抗体片段及其制备方法和应用，还涉及该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及用于表达该抗体的方法。

技术介绍

[0002]CRR9蛋白(英文全称：Cisplatin Resistance
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Related Protein 9，中文全称：顺铂耐药相关蛋白9)，别名CLPTM1L(Cleft Lip And Palate Transmembrane Protein 1
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Like Protein)。人CRR9蛋白(Uniprot蛋白质数据库编号是Q96KA5，https://www.uniprot.org/uniprot/Q96KA5)是一种具六次跨膜、全长为538个氨基酸组成的多跨膜型蛋白质，其蛋白的N端和C端都位于细胞质内，蛋白中有3段(分别为32
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284位氨基酸，343
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346位氨基酸，424
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428位氨基酸)位于细胞膜外，其中位于细胞膜外的肽段从32位到284位是由253氨基酸组成的该蛋白最大的胞外结构。
[0003]顺铂(Cisplatin)，也称顺
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二氯二氨基铂(II)(cis
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Diammineplatinum(II)dichloride)，CAS NO.15663
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27
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1，是一种基于铂结构的强效抗肿瘤药物，一种烷化剂，与DNA形成细胞毒性加合物，诱导链内和链间交联，阻断DNA复制和转录，最终引起凋亡。顺铂是最常用的化疗药物之一，目前临床上用来治疗多种癌症类型如睾丸癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部癌、膀胱癌、胃癌和其他恶性肿瘤。但顺铂常常出现固有耐药或者在治疗过程中获得耐药的现象，成为许多肿瘤患者治疗失败的原因。为此，解决铂类耐药是医学界迫切需要解决的重大课题之一。研究发现，对顺铂耐药主要归因于三个分子机制：癌细胞增加了DNA修复能力，改变了细胞积累(如降低对铂类的细胞吸收和促进外排机制)，增加铂类药物失活(Amable L.Pharmacol Res.2016Apr；106:27
‑
36)。
[0004]CRR9最早是2001年由日本教授K Yamamoto在研究卵巢癌细胞对顺铂药物的抗性时发现的新基因，由于其与顺铂耐药密切相关，故命名为顺铂耐药相关蛋白9。人CRR9蛋白是一种具六次跨膜、全长为538个氨基酸组成的多跨膜型蛋白质，其蛋白的N端和C端都位于细胞质内，蛋白中有3段(分别为32
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284位氨基酸，343
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346位氨基酸，424
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428位氨基酸)位于细胞膜外，其中位于细胞膜外的肽段从32位到284位是由253氨基酸组成的该蛋白最大的胞外结构。CRR9也被发现在人的肺癌组织中广泛高表达，且CRR9高表达和肺癌病人的存活预后呈负相关，另外，采用体外干预方式降低肺癌细胞系CRR9蛋白表达水平，可以阻碍肿瘤细胞的迁移和侵袭(Ni Z,et al.Cancer Biomark.2016；16(3):445
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52)。
[0005]CRR9膜蛋白有望作为一个新的肺癌和卵巢癌治疗和诊断的靶标，通过靶向CRR9可以潜在提高肺癌和卵巢癌的治疗效果，同时可以减少癌症治疗上顺铂类化疗药物的耐药，大大改善治疗效果和延长癌症病人的生存期，但目前市场上还没有被开发的成熟的靶向CRR9的单克隆抗体。
[0006]因此，现阶段迫切需要开发一种靶向CRR9的高亲和力且具有较好阻断活性的单克隆抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种抗人CRR9单克隆抗体及其制备方法和应用，所述单克隆抗体与人CRR9亲和力较高，具有较好的CRR9
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GRP78阻断活性，同时对肺癌细胞具有杀伤作用。
[0008]本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]本专利技术提供了一种抗人CRR9单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0010]所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3；
[0011]所述的CDR
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H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
[0012]所述的CDR
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H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0013]所述的CDR
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H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；
[0014]所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0015]所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；
[0016]所述的CDR
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L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
[0017]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0018]优选地，重链和轻链都包括恒定区，重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。
[0019]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG1的恒定区。
[0020]本专利技术进一步提供了一种编码所述的抗人CRR9单克隆抗体的核苷酸分子。
[0021]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12；
[0022]序列SEQ ID NO：11编码所述抗体的重链可变区；
[0023]序列SEQ ID NO：12编码所述抗体的轻链可变区。
[0024]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0025]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0026]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0027]本专利技术进一步提供了一种抗人CRR9单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0028](1)制备含有表达所述的抗人CRR9单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0029](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0030](3)分离纯化，获得抗人CRR9单克隆抗体。
[0031]本专利技术进一步提供了包括所述的抗人CRR9单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0032]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的抗人CRR9单克隆抗体，以及一种或多种药学上可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CRR9单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
‑
L3；所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述的CDR
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H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的CDR
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H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述的CDR
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L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的CDR
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L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述的CDR
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L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。2.根据权利要求1所述的一种抗人CRR9单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.根据权利要求1所述的一种抗人CRR9单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：