一种抗人LAG-3单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗人LAG

【技术实现步骤摘要】
一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]淋巴细胞活化基因
‑
3或LAG
‑
3(也称作CD223)是免疫球蛋白超基因家族的成员并且在活化的T细胞(Huard等人(1994)Immunogenetics 39:213)、NK细胞(Triebel等人(1990)J.Exp.Med.171:1393
‑
1405)、调节型T细胞(Huang等人(2004)Immunity 21:503
‑
513；Camisaschi等人(2010)J Immunol.184:6545
‑
6551；Gagliani等人(2013)Nat Med 19:739
‑
746)和浆细胞样树突细胞(DCs)(Workman等人(2009)J Immunol 182:1885
‑
1891)上表达。LAG
‑
3是位于第12号染色体上的基因编码的膜蛋白并且在结构和遗传上与CD4相关。
[0003]LAG
‑
3作为T
‑
细胞应答的负调节剂的作用基于用LAG
‑
3敲除小鼠的研究和在体外和体内系统模型中使用阻断性抗LAG
‑
3抗体。
[0004]LAG
‑/>3最具特征的配体是MHCII(Major Histocompatibility Complex class II)，在细胞表面，LAG
‑
3被表达为二聚体，这对于形成稳定的MHCII类结合位点是需要的(Huard B等人(1997)Proc Natl Acad Sci USA 94:5744
‑
9)。MHCII transactivator(CIITA)已被证实是LAG
‑
3配体的关键调控因子。CIITA诱导MHCII和MHCII辅助分子的表达，包括CD74(invariant chain,Ii)和H2
‑
DM。
[0005]LAG
‑
3另一个配体是纤维蛋白原样蛋白
‑
1(FGL1)(Jun Wang等人(2019)Cell176:1
‑
14)。FGL1是一种主要在肝脏表达的蛋白，被认为是肝保护剂和肝细胞有丝分裂原。有研究发现缺乏FGL1的小鼠(FGL1基因敲除小鼠)，使用化学致癌剂(二乙基亚硝胺)诱导发生肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的几率是野生型小鼠的两倍多，表明FGL1通过Akt依赖机制在肝癌中起抑癌基因的作用，支持其作为肝癌潜在治疗的靶点(Hamed Nayeb等人(2015)Biochemical and Biophysical Research Communications 465:167
‑
173)。
[0006]目前，临床产品较少，还需开发能够结合LAG
‑
3且能够阻断LAG
‑
3与MHCII相互作用的抗原结合蛋白，且同时不阻断或弱阻断LAG
‑
3与FGL1的结合。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体及其制备方法和应用，该单克隆抗体与人LAG
‑
3具有较高的结合亲和力，同时能够阻断LAG
‑
3与MHCII的相互作用，同时不阻断LAG
‑
3与FGL1的相互作用。
[0008]本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]本专利技术提供了一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0010]所述重链可变区包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；
[0011]所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
[0012]所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0013]所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；
[0014]所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0015]所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；
[0016]所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
[0017]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0018]优选地，重链和轻链都包括恒定区，重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。
[0019]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG1的恒定区。
[0020]本专利技术进一步提供了一种编码所述的抗人LAG
‑
3单克隆抗体的核苷酸分子。
[0021]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12；
[0022]序列SEQ ID NO：11编码所述抗体的重链可变区；
[0023]序列SEQ ID NO：12编码所述抗体的轻链可变区。
[0024]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0025]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0026]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0027]本专利技术进一步提供了一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0028](1)制备含有表达所述的抗人LAG
‑
3单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0029](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0030](3)分离纯化，获得抗人LAG
‑
3单克隆抗体。
[0031]本专利技术进一步提供了包括所述的抗人LAG
‑
3单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0032]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的抗人LAG
‑
3单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，所述轻链可变区包含CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。2.根据权利要求1所述的一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.根据权利要求1所述的一种抗人LAG
‑
3单克隆抗体，其特征在于，重链和轻链都包括恒定区，重链恒定区氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：