一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，提供了一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体，同时提供了该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及制备该抗体的方法，还提供了包含本发明专利技术抗体的药物组合物及用途。本发明专利技术的抗人CD47单克隆抗体与人CD47亲和力较高，同时相较于现有抗人CD47单克隆抗体，还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。瘤细胞吞噬作用。瘤细胞吞噬作用。

【技术实现步骤摘要】
一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的CD47 单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CD47是一种跨膜蛋白，几乎在所有人类细胞上都有表达。CD47也被称为整联蛋白相关蛋白(IAP)，是免疫球蛋白超家族成员。CD47广泛的表达于细胞的表面，可与SIRPα、血小板反应蛋白(thrombospondin
‑
1，TSP
‑
1)以及整合素相互作用，介导凋亡、增殖、免疫等一系列的反应。
[0003]CD47通过与SIRPα的相互作用，会释放一个“不要吃我”的信号给巨噬细胞和树突状细胞(DCs)，保护细胞免受免疫系统的攻击，而且还会通过促进肿瘤内血管增殖，抑制效应T细胞发挥作用，促进肿瘤细胞扩增和生长。癌细胞通过这种途径逃避宿主的免疫监视，CD47过表达被发现与较差的临床结果相关。CD47在白血病和实体瘤中也被确定为一种癌症干细胞标记物(Jaiswal,et al.,(2009)Cell,138(2):271
‑
85；Chan,et al.,(2009) Proc Natl Acad Sci USA,106(33):14016
‑
21；Chan,et al.,(2010)Curr Opin Urol,20(5):393
‑ꢀ
7；Majeti R,et al.,(2011)Oncogene,30(9):1009/>‑
19)。因此，CD47阻断抗体已被用于肿瘤治疗，并在多个体内肿瘤模型中显示了抗肿瘤活性。此外，这些抗体已被证明与其他治疗性抗体，包括利妥昔单抗和赫赛汀在肿瘤模型中的协同作用。
[0004]斯坦福大学医学院的研究人员通过给突变小鼠施予抗CD47抗体来逆转肺纤维化， CD47被进一步确定为治疗肺纤维化的潜在治疗靶点，肺纤维化是一种无法治愈且威胁生命的疾病。
[0005]近年来，针对CD47与其配体SIRPα信号轴介导的肿瘤逃离机制进行的药物研发成为了肿瘤免疫治疗的热门。然而，目前已开发的抗人CD47单克隆抗体还存在亲和力较低或作用靶点如抗原表位不明确的问题。
[0006]因此，亟需一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞，且亲和力较高的治疗性候选CD47抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体及其制备方法和应用，该单克隆抗体与人CD47具有较高亲和力，同时具有较强促肿瘤细胞吞噬作用。
[0008]本专利技术提供了一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0009]所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，所述轻链可变区包含CDR
‑ꢀ
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3；
[0010]所述的CDR
‑
H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；
[0011]所述的CDR
‑
H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0012]所述的CDR
‑
H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0013]所述的CDR
‑
L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；
[0014]所述的CDR
‑
L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；
[0015]所述的CDR
‑
L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。
[0016]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如 SEQ ID NO：18所示。
[0017]优选地，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO： 20所示。
[0018]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG4的恒定区。
[0019]本专利技术进一步提供了一种编码所述的单克隆抗体的核苷酸分子。
[0020]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：17；
[0021]序列SEQ ID NO：7编码所述的抗体的重链可变区；
[0022]序列SEQ ID NO：17编码所述的抗体的轻链可变区。
[0023]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0024]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0025]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0026]本专利技术进一步提供了一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0027](1)制备含有表达所述的单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0028](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0029](3)分离纯化，获得能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体。
[0030]本专利技术进一步提供了包括所述的能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0031]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0032]本专利技术进一步提供了所述的单克隆抗体在制备抗肿瘤药物或纤维化疾病的药物中的应用。
[0033]优选地，所述肿瘤为血液瘤或实体瘤，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓母细胞白血病(AML)、卵巢癌、输卵管癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈部癌、胰腺癌、肺癌、胶质瘤和胶质母细胞瘤。
[0034]优选地，所述纤维化疾病包括心绞痛、骨关节炎、肺纤维化、哮喘和支气管炎。
[0035]有益效果：
[0036]本专利技术提供的能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体与人CD47亲和力较高，同时相较于现有抗人CD47单克隆抗体，具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用，此外，本专利技术提供的单克隆抗体还具有较好的CD47
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SIRPα阻断活性。
附图说明
[0037]图1为捕获ELISA测定抗体对人CD47蛋白的结合能力；
[0038]图2为捕获ELISA测定抗体对食蟹猴CD47蛋白的结合能力；
[0039]图3为流式细胞术测评抗体与表面过表达人CD47的293F细胞的结合；
[0040]图4为配体结合阻断ELISA；
[0041]图5为参照抗体阻断ELISA。
具体实施方式
[0042]术语
[0043]“本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3；所述的CDR
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H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述的CDR
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H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的CDR
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H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的CDR
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L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述的CDR
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L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；所述的CDR
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L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。2.根据权利要求1所述的一种能诱导巨噬细胞吞噬癌细胞的单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：