一种靶向CD47的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种靶向CD47的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用，同时提供了该抗体的编码核酸分子、表达载体、宿主细胞、以及用于表达该抗体的方法，还提供了包含本发明专利技术抗体的药物组合物及用途。本发明专利技术所述的靶向CD47的单克隆抗体与人CD47亲和力较高，相较于现有靶向CD47的单克隆抗体，具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CD47的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种靶向CD47的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]CD47又称整合素相关蛋白(integrin
‑
associated protein，IAP)，是具有多种信号通路功能的抗吞噬细胞受体，属于免疫球蛋白超家族，广泛表达于几乎所有的正常细胞表面。CD47具有免疫球蛋白可变的N端结构域、五个跨膜结构域和一个短的C端胞内尾。目前已知的CD47的天然配体为整合素、血小板反应蛋白
‑
1(thrombospondin
‑
1，TSP
‑
1)和信号调节蛋白α(Signal
‑
regulatory protein，SIRPα)。据报道，CD47参与的生物学作用包括细胞迁移、黏附、增殖、凋亡及维持机体免疫稳态等。
[0003]在正常生理状态下，CD47
‑
SIRPα作为免疫检查点对维持机体耐受、协助免疫反应起到重要作用。在肿瘤组织中，巨噬细胞通过吞噬作用以达到清除肿瘤细胞的目的，但高表达于肿瘤细胞表面的CD47与巨噬细胞、树突状细胞等吞噬细胞表面的SIRPα结合后，抑制巨噬细胞的吞噬作用，实现免疫逃逸。阻断CD47
‑
SIRPα信号通路，可以促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬、促进树突状细胞对肿瘤细胞的摄取、利于抗原递呈和促进细胞因子分泌等作用。
[0004]在癌症免疫治疗领域，CD47是一个非常具有发展前景的靶点。然而，目前已开发的靶向CD47的单克隆抗体还存在亲和力较低、作用靶点如抗原表位不明确等问题。因此，亟需一种亲和力较高、具有较好阻断活性的治疗性候选CD47抗体。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种靶向CD47的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用，该单克隆抗体与人CD47的亲和力较强，同时具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用。
[0006]本专利技术提供了一种靶向CD47的单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0007]所述重链可变区包含V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包含V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；
[0008]所述的V
H CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；
[0009]所述的V
H CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0010]所述的V
H CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0011]所述的V
L CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；
[0012]所述的V
L CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；
[0013]所述的V
L CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。
[0014]优选地，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。
[0015]优选地，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
[0016]优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠或人IgG的恒定区，优选为IgG4的恒定区。
[0017]本专利技术进一步提供了一种编码上述靶向CD47的单克隆抗体的核苷酸分子。
[0018]优选地，所述核苷酸分子的序列选自SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：17；
[0019]序列SEQ ID NO：7编码所述的抗体的重链可变区；
[0020]序列SEQ ID NO：17编码所述的抗体的轻链可变区。
[0021]本专利技术进一步提供了一种含有所述的核苷酸分子的表达载体。
[0022]本专利技术进一步提供了一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0023]优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
[0024]本专利技术进一步提供了上述靶向CD47的单克隆抗体的制备方法，包含如下步骤：
[0025](1)制备含有编码所述的靶向CD47的单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
[0026](2)用步骤(1)得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
[0027](3)分离纯化，获得靶向CD47的单克隆抗体。
[0028]本专利技术进一步提供了包括上述靶向CD47的单克隆抗体的双特异性分子、抗体免疫偶联缀合物、嵌和抗原受体或药物组合物。
[0029]进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述的靶向CD47的单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0030]本专利技术进一步提供了所述的靶向CD47的单克隆抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0031]优选地，所述肿瘤为血液系统肿瘤或实体瘤，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)等血液系统恶性肿瘤，以及结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、输卵管癌、膀胱癌、头颈癌、胰腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤等实体瘤。
[0032]有益效果：
[0033]本专利技术的靶向CD47的单克隆抗体与人CD47具有较好的亲和力，同时相较于现有靶向CD47的单克隆抗体，还具有较强的促肿瘤细胞吞噬作用和较好的CD47
‑
SIRPα阻断活性。
附图说明
[0034]图1为捕获ELISA测定抗体对人CD47蛋白的结合能力；
[0035]图2为捕获ELISA测定抗体对食蟹猴CD47蛋白的结合能力；
[0036]图3为流式细胞术测评抗体与表面过表达人CD47的293F细胞的结合；
[0037]图4为配体结合阻断ELISA；
[0038]图5为参照抗体阻断ELISA；
[0039]图6A
‑
6B为流式细胞术测评抗体诱导巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力。
具体实施方式
[0040]术语
[0041]“结合CD47”或“与CD47结合”，指能与人CD47相互作用。“特异性结合”指能与人CD47蛋白(以及可能来自一种或多种非人物种的CD47蛋白)结合但基本不与非CD47蛋白结
合。
[0042]“抗原结合位点”指抗体上具有与抗原(例如CD47蛋白)特异性结合能力的一个或多个片段。
[0043]“单克隆抗体”指具有单一氨基酸组成的抗体分子的制备物，呈现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体或其抗原结合片段可以通过例如杂交瘤技术、重组DNA技术、噬菌体展示技术、合成技术例如CDR嫁接技术、或此类或其它本领域已知的技术的组合来制备。
[0044]“亲和力”是指本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CD47的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包含V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；所述的V
H CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述的V
H CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的V
H CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；所述的V
L CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；所述的V
L CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；所述的V
L CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。2.根据权利要求1所述的一种靶向CD47的单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。3.根据权利要求1所述的一种靶向CD47的单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，刘劲禹，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：