抗CCR8抗体用于治疗癌症制造技术

本发明专利技术提供了分离的抗体，例如单克隆抗体，其特异性结合表达于细胞表面上的C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CCR8抗体用于治疗癌症
[0001]在整个本申请中，各种公开以括号提及作者名称及日期，或提及专利号或专利公开号。可在说明书的结尾处，在权利要求之前找到这些公开的完全引用。这些公开的公开内容在此以全文引用的方式并入本申请中，以更全面地描述截至本文中所描述及主张的本专利技术为止，如本领域技术人员已知的目前先进技术。然而，仅在由参考文献并入的信息与由本申请中的明确公开内容提供的信息之间不存在冲突的情况下将这些公开并入本申请中。此外，本文中的参考文献的引用不应视为承认此类参考文献为本专利技术的先前技术。
[0002]相关申请的交叉参考本申请主张以下美国临时申请的权利：2021年3月5日提交的第63/157,618号；2020年6月2日提交的第63/041,992号；及2020年3月23日提交的第62/993,570号，其各自的内容在此以全文引用的方式并入本文中。序列表本专利技术含有序列表，其以ASCII格式电子提交，并在此通过引用方式以其整体并入本文。ASCII拷贝创建于2021年3月19日，命名为20210319_SEQL_13358WOPCT.txt，其大小81,920字节。


[0003]本专利技术涉及特异性结合C
‑
C基序趋化因子受体8(CCR8)的经分离的抗体(Ab)，例如单克隆抗体(mAb)，及用于治疗个体中的癌症的方法，其包含以单药疗法或与诸如免疫检查点抑制剂的抗癌剂的组合形式向个体施用抗CCR8 Ab。

技术介绍

[0004]人类癌症具有许多遗传及表观遗传改变，产生潜在地可由免疫系统识别的新抗原(Chakravarthi等人,2016)。利用适应性免疫系统的属性来治疗癌症使得免疫疗法因其对许多癌症的适用性及诱导持久的抗肿瘤作用而在所有癌症治疗模式中具有独特性。
[0005]在通过使用检查点抑制剂(诸如抗PD
‑
1 Ab、纳武单抗(nivolumab)及抗CTLA
‑
4 Ab、伊匹单抗(ipilimumab))刺激细胞毒性T细胞的活性来治疗不同实体肿瘤及血液系统肿瘤方面已取得显著成功。然而，在受此治疗影响的癌症中，通常小于约15％的患者从使用检查点抑制剂进行的治疗中长期受益(Haslam及Prasad,2019)，且已证实检查点抑制剂在某些癌症中不太有效，包括乳腺及前列腺癌。免疫抑制机制，尤其由调节性T细胞(Treg)介导的免疫抑制机制的持久性可促进所观测到的某些癌症或某些患者对用检查点抑制剂进行的治疗的抗性(Fares等人,2019；Han等人,2019)。作为一种用于克服此抗性的手段，本申请公开了用于通过降低Treg的免疫抑制作用来刺激免疫系统的方法。
[0006]肿瘤浸润性CD4
+ CD25
+ FOXP3
+ Treg，CD4
+ T细胞的子集，是免疫自体耐受性的介质。与Treg发育及功能相关的基因的缺陷可在小鼠(Fontenot等人,2003；Khattri等人,2003；Tivol等人,1995)及人类(Yagi等人,2004；Kuehn等人,2014)中引起系统性自身免疫，揭示了Treg在保持免疫稳态中的重要的非冗余性作用。Treg经由多种机制来抑制免疫系
统，包括下调效应T细胞的诱导及增殖、趋化因子及抑制性细胞因子的分泌，以及树突状细胞成熟及功能的抑制(Shitara及Nishikawa,2018；Han等人,2019)。可在肿瘤微环境中引入被Treg用于促进自体耐受性的机制，以抑制抗肿瘤免疫反应。实际上，小鼠中的Treg的全身性消耗足以实现免疫介导的肿瘤消退(Teng等人,2010)。因此，认为Treg在介导对自体抗原的外周耐受性、预防自身免疫疾病及抑制抗肿瘤免疫反应中起作用。
[0007]因此，已确定降低肿瘤浸润性Treg的活性或数目是有吸引力的逆转肿瘤微环境中的免疫抑制活性及增强抗肿瘤免疫性的方法(Finotello及Trajanoski,2017；Han等人,2019)。在癌症免疫疗法中已经且正在实行各种方法以靶向Treg，包括使用针对表达于Treg上的抗原(诸如CD25(Arce Vargas等人,2017)、CCR4(Ishida等人,2012；Hagemann等人,2014)及CTLA
‑
4(Korman等人,2017))的抗体(Ab)进行的ADCC介导的Treg消耗，及抑制E3泛蛋白连接酶Siah2(Scortegagna等人,2020)及Yes相关蛋白质(YAP；Ni等人,2018)。然而，特异性靶向或消耗来自肿瘤微环境的Treg的临床尝试并不成功。与IL
‑
2融合的白喉毒素(Diphtheria toxin)(地尼白介素denileukin diftitox)未能有效地降低黑素瘤患者中的Treg数目(Luke等人,(2016))，且尽管在小鼠肿瘤模型中显示抗CTLA
‑
4介导的Treg消耗(Selby等人,2013；Simpson等人,2013)，但尚不清楚在人类癌症中由伊匹单抗或曲美木单抗(tremelimumab)(抗人CTLA
‑
4 Ab)引起的Treg消耗的明确证据(Sharma等人,2019a；Sharma等人,2019b)。通过未经岩藻糖基化(nf)的抗CCR4 Ab莫格利珠单抗(mogamulizumab)实现Treg消耗，但亦观测到常规(conventional)CD4
+ T细胞的显著消耗及CD8
+ T细胞数目的中度降低(Kurose等人,2015)，从而限制其在治疗实体肿瘤方面的效用。因此，仍需要安全且有效的Treg消耗剂，其也避开T效应细胞(Teff)以实现最佳抗肿瘤反应。
[0008]CCR8为一种趋化因子受体，其最近被鉴定为肿瘤浸润性Treg的潜在特异性标志物，因为在多种癌症(包括乳腺、结肠直肠及肺)中，这些Treg中的CCR8表达选择性地上调(Plitas等人,2016；De Simone等人,2016；Wang等人,2019)，且作为IRF4依赖性『效应子』Treg基因计划的核心成员(Alvisi等人,2020)。这些CCR8
+ Treg表示Treg的高度活化及抑制性亚群，且这些肿瘤类型中的CCR8
+ Treg的高丰度与不良预后相关联(Wang等人,2019；De Simone等人,2016)。因此，CCR8可为有前景的用于实现肿瘤驻留Treg的消耗以提高抗肿瘤免疫性的治疗目标。靶向CCR8，同时消耗抑制性Treg，亦可具有不消耗驱动抗肿瘤免疫反应的细胞溶解效应细胞(cytolytic effector cells)的优点。此外，因为CCR8极少在外周血液或其他组织中的Treg及Teff上表达，因此靶向CCR8
+
肿瘤Treg可产生最小的毒性风险。
[0009]CCR8为主要表达于瘤内FOXP3
hi Treg上的七次跨膜G蛋白质偶联趋化因子受体(GPCR)(Wang等人,2019；Plitas等人,20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性结合表达于细胞表面上的C
‑
C基序趋化因子受体8(CCR8)且通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)来介导表达CCR8的细胞的消耗。2.如权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性结合人CCR8(hCCR8)，所述人CCR8的序列系如SEQ ID NO:1所示。3.如权利要求1或2的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含属于人IgG1或IgG3同型的重链恒定区。4.一种包含经修饰的重链恒定区的经修饰的抗hCCR8单克隆抗体或其抗原结合部分，其与如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分相比以更高的亲和力结合Fcγ受体(FcγR)且介导增强的ADCC，任选地，其介导至少：(a)增强2倍的ADCC活性；(b)增强5倍的ADCC活性；或(c)增强10倍的ADCC活性；如通过实施例17中所描述的NK细胞溶解测定法中的细胞溶解的EC
50
的降低所测量。5.如权利要求4的经修饰的抗hCCR8单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含呈现减少的岩藻糖基化的经修饰的IgG1重链恒定区，任选包含低岩藻糖基化或未经岩藻糖基化的经修饰的IgG1重链恒定区。6.如权利要求4或5的经修饰的抗hCCR8单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含经修饰的IgG1重链恒定区，所述重链恒定区含有介导增强的ADCC的一个突变或多个突变，任选其中所述突变或所述多个突变系选自G236A；S239D；F243L；E333A；G236A/I332E；S239D/I332E；S267E/H268F；S267E/S324T；H268F/S324T；G236A/S239D/I332E；S239D/A330L/I332E；S267E/H268F/S324T；及G236A/S239D/A330L/I332E。7.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其(i)以如通过实施例11中所描述的结合测定法所测量的以下EC
50
特异性结合表达人CCR8的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞：(a)约10nM或更低；(b)约5nM或更低；(c)约1.7nM或更低；(d)约1nM或更低；(e)约0.5nM或更低；(f)约0.1nM或更低；(g)约0.1nM；(h)约1.7nM；(i)约0.1nM与约10nM之间；(j)约0.1nM与约2nM之间；(k)约0.5nM与约5nM之间；(l)约1nM与约2nM之间；或(m)约0.5nM与约1nM之间；和/或(ii)以如通过实施例11中所描述的结合测定法所测量的以下EC
50
特异性结合经活化的
调节性T细胞(Treg)：(a)约50nM或更低；(b)约14nM或更低；(c)约5nM或更低；(d)约2nM或更低；(e)约0.5nM或更低；(f)约0.3nM或更低；(g)约0.1nM或更低；(h)约0.03nM或更低；(i)约1.7nM；(j)约0.03nM与约10nM之间；(k)约0.1nM与约5nM之间；或(l)约0.2nM与约2nM之间；和/或(iii)以如通过实施例11中所描述的表面等离子共振(SPR)所测量的以下K
D
结合包含硫酸化酪氨酸
‑
15及酪氨酸
‑
17残基的人CCR8的N端肽：(a)约100nM或更低；(b)约50nM或更低；(c)约10nM或更低；(d)约5nM或更低；(e)约1.6nM；(f)约1.0nM或更低；(g)约0.5nM或更低；(h)约0.1nM或更低；(i)约100nM与约0.1nM之间；(j)约50nM与约0.5nM之间；(k)约10nM与约1nM之间；或(l)约2nM与约1nM之间；和/或(iv)以如通过实施例11中所描述的SPR所测量的以下K
D
结合包含单硫酸化残基(酪氨酸
‑
15)的人CCR8的N端肽：(a)约100nM或更低；(b)约50nM或更低；(c)约25nM或更低；(d)约10nM或更低；(e)约1.0nM或更低；(f)约20nM；(i)约100nM与约1nM之间；(j)约50nM与约10nM之间；或
(k)约30nM与约20nM之间。8.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特异性结合胸腺的髓质及皮肤的真皮中的稀少及分散的免疫细胞，但不结合人类大脑、小脑、心脏、肝脏、肺、肾脏、扁桃体、脾、胸腺、结肠、胃、胰腺、肾上腺、垂体、皮肤、外周神经、睾丸或子宫组织或外周血单个核细胞(PBMC)。9.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其进一步抑制C
‑
C基序趋化因子配体1(CCL1)与CCR8的结合且抑制CCR8/CCL1信号传导，如通过实施例15中所描述的钙通量的抑制所测量。10.如前述权利要求的单克隆抗体或其抗原结合部分，其(i)以下列IC
50
抑制CCR8/CCL1信号传导：(a)约10nM或更低；(b)约5nM或更低；(c)约1nM或更低；(d)约0.5nM或更低；(e)约0.1nM或更低；(f)约0.01nM或更低；(g)约0.01nM与约10nM之间；(h)约0.05nM与约5nM之间；(i)约0.1nM与约1nM之间；或(j)约0.46nM；和/或(ii)以如通过实施例17中所描述的CD16交联测定法所测量的以下EC
50
介导表达CCR8的细胞的消耗：(a)约100pM或更低；(b)约30pM或更低；(c)约10pM或更低；(d)约3pM或更低；(e)约1pM或更低；(f)约0.5pM或更低；(g)约0.1pM或更低；(h)约0.05pM或更低；(i)约0.7pM；(j)在约0.05pM与约50pM之间；(k)在约0.1pM与约10nM之间；(l)在约0.3nM与约7nM之间；或(m)在约0.6nM与约3nM之间；和/或(iii)以如通过实施例19中所描述的细胞凋亡测定法所测量的以下EC
50
介导经活化的Treg的消耗：
(a)约500pM或更低；(b)约100pM或更低；(c)约30pM或更低；(d)约15pM或更低；(e)约5pM或更低；(f)约1pM或更低；(g)约13pM；(h)在约1pM与约500pM之间；(i)在约5pM与约100pM之间；或(j)在约10pM与约50pM之间。11.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合位于人CCR8的N端结构域中的表位，如通过X射线结晶学所测定，其中所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽内的至少一个氨基酸，任选其中(i)所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽内的2、3、4、5、6、7、8、9、10个或所有氨基酸；任选其中(ii)所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽中的所有11个氨基酸；任选其中(iii)氨基酸Y
15
及Y
17
两者皆经硫酸化。12.一种单克隆抗体或其抗原结合部分，其能够介导ADCC且特异性结合人类C
‑
C基序趋化因子受体8(hCCR8)上的表位，所述人类C
‑
C基序趋化因子受体8的序列系如SEQ ID NO:1所示，其中所述表位位于hCCR8的跨越约氨基酸残基12至22的肽(V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
；SEQ ID NO:109)内的N端结构域中，如通过X射线结晶学所测定，任选其中：(i)所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽内的至少一个氨基酸；(ii)所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽内的2、3、4、5、6、7、8、9、10个或所有氨基酸；(iii)所述表位包含具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽中的11个氨基酸；或(iv)所述表位由具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)的肽中的所有11个氨基酸组成。13.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中(i)当在存在或不存在交联抗体的情况下结合细胞表面上的CCR8时，所述抗体或其部分不引起CCR8的内化；和/或(ii)所述抗体或其部分在体外促进人类肿瘤相关Treg的消耗；和/或(iii)所述抗体或其部分特异性诱导肿瘤Treg的消耗而不消耗非肿瘤组织中的CCR8
+
T细胞，任选其中所述非肿瘤组织为皮肤、胸腺、脾或血液；和/或(iv)当以单药疗法形式施用于个体时，所述抗体或其部分抑制所述个体中的肿瘤细胞的生长；和/或(v)当与其他用于治疗癌症的治疗剂组合施用于个体时，所述抗体或其部分抑制所述
个体中的肿瘤细胞的生长。14.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其呈现以下特性中的至少一种、两种、三种、四种、五种或六种：(a)以约2nM或更低的EC
50
特异性结合表达于细胞表面上的CCR8；(b)特异性结合胸腺的髓质及皮肤的真皮中的稀少及分散的免疫细胞，但不结合人大脑、小脑、心脏、肝脏、肺、肾脏、扁桃体、脾、胸腺、结肠、胃、胰腺、肾上腺、垂体、皮肤、外周神经、睾丸或子宫组织或外周血单个核细胞(PBMC)；(c)以约5nM或更低的IC
50
抑制CCL1与CCR8的结合及抑制CCR8/CCL1信号传导；(d)当结合细胞表面上的CCR8时，以约10pM或更低的EC
50
介导所述细胞的消耗；(e)当在存在或不存在交联抗体的情况下结合细胞表面上的CCR8时，不引起CCR8的内化；(f)使用实施例22中描述的测定法，在体外促进人类肿瘤相关Treg的消耗；(g)使用实施例20中描述的测定法，促进离体人类肿瘤切片样品中的人类肿瘤相关Treg的消耗；(h)特异性介导肿瘤Treg的消耗，同时避开非肿瘤组织中的CCR8
+
T细胞；(i)当以单药疗法形式施用于个体时，抑制所述个体中的肿瘤细胞的生长；及(j)当与其他用于治疗癌症的治疗剂组合施用于个体时，抑制所述个体中的肿瘤细胞的生长；任选地其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分呈现所有所述那些特性。15.如权利要求34或35的单克隆抗体或其抗原结合部分，其进一步以约10nM或更低的K
D
结合位于人CCR8的N端结构域中的表位，其中所述表位包含肽，所述肽具有序列V
12
T
13
D
14
Y
15
Y
16
Y
17
P
18
D
19
I
20
F
21
S
22
(SEQ ID NO:109)以及硫酸化酪氨酸
‑
15及酪氨酸
‑
17残基。16.一种包含经修饰的重链恒定区的经修饰的抗hCCR8单克隆抗体或其抗原结合部分，其与如权利要求14或15的单克隆抗体或其抗原结合部分相比以更高的亲和力结合Fcγ受体(FcγR)且介导增强至少2、5或10倍的ADCC。17.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与参考抗体结合相同表位，其中所述参考抗体包含：(a)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:3所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:15所示序列的连续连接的氨基酸；(b)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:4所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:16所示序列的连续连接的氨基酸；(c)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:5所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:17所示序列的连续连接的氨基酸；(d)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:6所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:18所示序列的连续连接的氨基酸；(e)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:7所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:19所示序列的连续连接的氨基酸；(f)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:8所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:20所示序列的连续连接的氨基酸；(g)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:9所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如
SEQ ID NO:21所示序列的连续连接的氨基酸；(h)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:10所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:22所示序列的连续连接的氨基酸；(i)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:11所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:23所示序列的连续连接的氨基酸；(j)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:12所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:24所示序列的连续连接的氨基酸；(k)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:13所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:25所示序列的连续连接的氨基酸；(l)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:14所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:26所示序列的连续连接的氨基酸；或(m)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:115所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:116所示序列的连续连接的氨基酸。18.如前述权利要求中任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与参考抗体交叉竞争结合hCCR8，其中所述参考抗体包含：(a)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:3所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:15所示序列的连续连接的氨基酸；(b)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:4所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:16所示序列的连续连接的氨基酸；(c)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:5所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:17所示序列的连续连接的氨基酸；(d)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:6所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:18所示序列的连续连接的氨基酸；(e)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:7所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:19所示序列的连续连接的氨基酸；(f)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:8所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:20所示序列的连续连接的氨基酸；(g)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:9所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:21所示序列的连续连接的氨基酸；(h)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:10所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:22所示序列的连续连接的氨基酸；(i)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:11所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:23所示序列的连续连接的氨基酸；(j)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:12所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:24所示序列的连续连接的氨基酸；(k)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:13所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:25所示序列的连续连接的氨基酸；(l)V
H
，其包含具有如SEQ ID NO:14所示序列的连续连接的氨基酸，及V
L
，其包含具有如SEQ ID NO:26所示序列的连...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝尹蓉，O，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：