一种人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体及其在活化扩增人Vδ1T细胞中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体及其在活化扩增人Vδ1T细胞中的应用，属于生物技术领域中的人源化单克隆抗体制备及细胞扩增的技术领域。本发明专利技术提供的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，该人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体能够在体外高效活化扩增Vδ1T细胞，且获得的Vδ1T细胞能够有效杀伤肿瘤细胞。且获得的Vδ1T细胞能够有效杀伤肿瘤细胞。且获得的Vδ1T细胞能够有效杀伤肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种人源化抗人V
δ
1TCR单克隆抗体及其在活化扩增人V
δ
1 T细胞中的应用


[0001]本专利技术属于生物
中的人源化单克隆抗体制备及体外细胞扩增的
，具体涉及一种人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体及其制备方法和在高效活化扩增人Vδ1 T细胞中的应用。

技术介绍

[0002]γδT细胞是一群在进化上比B细胞和αβT细胞还要古老的淋巴细胞。虽然γδT细胞只占成人外周血CD3
+
T细胞的0.5％
‑
10％，却兼有固有免疫和适应性免疫应答的双重特性，在机体抗感染、抗肿瘤和组织损伤修复等过程中发挥着重要的免疫作用。与αβT细胞相比，γδT细胞具有以下特点有利于发挥免疫作用：第一，在粘膜和皮下组织的大量分布以及TCRγδ的有限多样性，有利于γδT细胞在早期接触识别入侵的病原微生物，无需大量扩增即可发挥抗感染的作用；第二，γδT细胞识别抗原无MHC限制性，同时与TCRαβ相比，TCRγ和TCRδ的CDR3长度及结构更加类似于抗体的轻链和重链，因而TCRγδ可以像抗体一样无需抗原提呈分子辅助直接识别多种抗原分子；第三，γδT细胞表达NKG2D及NCR(NKp30、NKp44和NKp46)等NK细胞样受体，使其可以类似NK细胞在早期识别病原微生物及病原微生物引起的应激分子信号；第四，γδT细胞处于一种预活化状态，迅速发挥多种功能，包括分泌细胞因子，杀伤靶细胞等；第五，γδT细胞具有抗原提呈功能，启动后继的适应性免疫应答；第六，γδT细胞在维持上皮组织的完整及组织损伤修复方面具有重要作用。
[0003]γδT细胞根据TCR的γ和δ链的表达，主要分为3个亚群，分别为Vδ1 T细胞、Vδ2 T细胞和Vδ3 T细胞，其中Vδ3 T细胞主要分布于肝和肠，Vδ2 T细胞主要分布在外周血中，Vδ1T细胞主要存在于粘膜和上皮组织中，尤其是胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道的黏膜下区域，外周血中也有极少量的Vδ1 T细胞亚群。γδT细胞不同亚群可发挥自己独特的作用，近年来发现粘膜中的Vδ1 T细胞能够有效渗入实体肿瘤中，识别肿瘤表面异常表达的MHC I类相关分子A和B(MICA和MICB)以及UL
‑
16结合蛋白(ULBP)发挥抗肿瘤作用，然而目前Vδ1T细胞过继免疫疗法面临的最大阻碍是其在外周血中的数量非常少，且难以进行高效体外扩增，从而限制了Vδ1 T细胞在临床治疗上的应用。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术一个方面提供一种人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体，其重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成。
[0005]在一些实施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链恒定区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成，轻链恒定区包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。
[0006]在一些实施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链包含SEQ ID NO:11
所示的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或由其组成。
[0007]本专利技术另一方面提供一种编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的基因；优选地，其中编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链的基因包含如SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列或由其组成，编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的轻链的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其组成。
[0008]本专利技术另一方面还提供一种含有编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。
[0009]本专利技术再一方面提供一种制备所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：
[0010]1)将鼠源抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重轻链可变区的氨基酸序列分别与人源化抗体重轻链恒定区的氨基酸序列连接，分别得到人源化抗体的重链和轻链的氨基酸序列；其中所述鼠源抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成；
[0011]2)将步骤1)所得人源化抗体的重链和轻链的氨基酸序列进行逆翻译后，分别得到人源化抗体的重链和轻链的编码基因；和
[0012]3)对步骤2)所得人源化抗体的重链和轻链的编码基因进行真核表达，得到所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体。
[0013]在一些实施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体在活化扩增Vδ1 T细胞中的应用也属于本专利技术的内容。
[0014]在一些实施方式中，所述活化扩增Vδ1 T细胞的方式包括固相化体外扩增。
[0015]在一些实施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体还联合细胞因子对所述Vδ1 T细胞进行活化扩增；可选地，所述细胞因子包括IL
‑
4、IL
‑
12、IL
‑
15、IFN
‑
γ、IL
‑
21、或其组合。
[0016]在一些实施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体或由所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体扩增获得的Vδ1 T细胞在制备杀伤肿瘤细胞的药物中的应用也属于本专利技术的内容。
[0017]在一些实施方式中，所述肿瘤细胞包括但不限于Daudi细胞、K562细胞、OVCAR
‑
8细胞、HepG2细胞和SW480细胞。
[0018]基于以上技术方案提供的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体由鼠源单克隆抗体经重轻链可变区与人源化抗体重轻链恒定区连接获得，得到的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。实施例结果表明，本专利技术提供的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体能够在体外特异性活化人γδT细胞中的Vδ1 T细胞亚群增殖，尤其是当该人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体联合其他细胞因子(例如IL
‑
4、IL
‑
12、IL
‑
15、IFN
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γ和IL
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21)时更能够有效活化增殖Vδ1 T细胞，且增殖获得的Vδ1 T细胞能有效杀伤肿瘤细胞，例如Daudi细胞、K562细胞、OVCAR
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8细胞、HepG2细胞和SW480细胞，因此由本专利技术提供的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体体外固相化刺激增殖获得的Vδ1 T细胞对肿瘤细胞具有较好的细胞毒作用，可应用于临床上肿瘤的Vδ1 T淋巴细胞的过继免疫治疗。
附图说明
[0019]图1为12种候选人源化单克隆抗体分别体外活化扩增γδT细胞及Vδ1 T亚群的流式检测结果。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体，其重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成。2.根据权利要求1所述的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体，其重链恒定区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成，轻链恒定区包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。3.根据权利要求1或2所述的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体，其重链包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或由其组成。4.一种编码权利要求1
‑
3中任一项所述的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的基因；优选地，其中编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链的基因包含如SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列或由其组成，编码所述人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的轻链的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其组成。5.含有权利要求4所述的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。6.一种制备权利要求1
‑
3中任一项所述的人源化抗人Vδ1TCR单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：1)将鼠源抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重轻链可变区的氨基酸序列分别与人源化抗体重轻链恒定区的氨基酸序列连接，分别得到人源化抗体的重链和轻链的氨基酸序列；其中所述鼠源抗人Vδ1TCR单克隆抗体的重链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：何维，蔡孟华，张建民，陈慧，胡愉，许依，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：