嵌合的抗CD27抗体制造技术

本申请提供了嵌合的抗CD27抗体分子及其编码核酸和表达载体。本申请的抗CD27抗体分子能够与CD27特异性结合，具有刺激淋巴细胞增殖、活化淋巴细胞等效果。活化淋巴细胞等效果。活化淋巴细胞等效果。

【技术实现步骤摘要】
嵌合的抗CD27抗体


[0001]本申请涉及抗体领域，更具体地，本申请涉及抗CD27的抗体及其应用。

技术介绍

[0002]CD27共刺激分子是一个分子量为120kDa的I型跨膜分子，属于 TNFR超家族成员，主要在大部分T细胞(幼稚T细胞、活化T细胞)、记忆性B细胞和一些NK细胞上表达。当免疫细胞活化时，CD27的表达水平会上调，在T细胞活化时，CD27及其配体会与TCR协调作用。目前已知CD27只有一个配体分子
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CD70，CD70在活化的淋巴细胞(B细胞、T细胞)和DC(树突状细胞)上瞬时表达。CD27
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CD70相互作用招募胞浆内的TRAFs蛋白，进而活化NF
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κB和JNK信号通路，引发包括T细胞活化、增殖、存活和细胞毒等一系列细胞反应。因此，在杀伤肿瘤和抗病毒感染过程中，CD27
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CD70作用促进T细胞的激活、分化和产生记忆性等免疫过程，T细胞的活化不仅促使T细胞表面 CD27表达增强，同时活化的T细胞会分泌sCD27(可溶性CD27，分子量为28～32KD)；sCD27会与CD70结合，抑制CD70与细胞表面表达的CD27结合，从而抑制T细胞的持续增殖，起到反馈调节的作用。除了调控T细胞反应，CD27对于生发中心的B细胞扩增以及部分NK 细胞分泌IFN
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γ等均有促进作用。通过调控CD27靶点可以增强宿主抗肿瘤作用。
[0003]因此，开发CD27靶向抗体有望用于治疗包括肿瘤在内的CD27 相关疾病。目前，仅有Celldex Therapeutics(塞德斯医疗公司)的 Varlilumab(CDX
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1127，I/II期临床)和CDX
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527(CD27&PD
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L1双特异性抗体，I期临床)处于I/II期临床。由于Varlilumab为高亲和力的IgG1亚型抗体，ADCC及CDC是其主要作用机制；考虑到CD27 在免疫细胞上的组成型表达，则靶向CD27的高亲和力IgG1亚型抗体会由于ADCC及CDC而导致对正常免疫细胞的杀伤，从而有可能影响机体的正常免疫功能。
[0004]本申请的专利技术人研发了新的抗CD27抗体，并对其特性和相关应用进行了研究。

技术实现思路

[0005]第一方面，本申请提供了一种特异性结合CD27分子的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、 HCDR2和/或HCDR3序列。在一些实施方案中，所述HCDR1包含SEQID NO：1所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述HCDR2序列包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述 HCDR3序列包含SEQ ID NO：3或4的氨基酸序列。在可选的实施方案中，上述抗原结合部分选自Fab片段、Fab
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片段、F(ab
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)2片段、Fv 片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。
[0006]在一些实施方案中，特异性结合CD27的抗体或其抗原结合部分还包含轻链可变区，其中所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和/或 LCDR3序列。在某些实施方案中，所述LCDR1序列包含SEQ ID NO： 12的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述LCDR2序列包含SEQ IDNO：13的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述LCDR3序列包含SEQID NO：14的氨基酸序列。
[0007]在一些实施方案中，特异性结合CD27的抗体或其抗原结合部分的重链包含与SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述重链包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方案中，第一方面所述的抗体或其抗原结合部分的轻链包含SEQ ID NOs：15
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22任一项的氨基酸序列或者与上述序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述轻链包含SEQ ID NO：15 所示的氨基酸序列。
[0009]在一些实施方案中，第一方面所述的特异性结合CD27的抗体为单克隆抗体，例如鼠源单克隆抗体。
[0010]在一些实施方案中，第一方面所述的特异性结合CD27的抗体为人源化抗体。
[0011]在一些实施方案中，第一方面所述的特异性结合CD27的抗体为人
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鼠嵌合抗体。
[0012]在一些实施方案中，本文公开的抗CD27抗体或其抗原结合部分与抗体6D8
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G98A结合CD27上的相同表位，或者与6D8
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G98A竞争结合于CD27。在一些实施方案中，所述抗体的重链序列如SEQ ID NO： 6所示，以及所述轻链序列如SEQ ID NO：15所示。
[0013]在一些实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合部分能够诱导 T细胞活化。在一些实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合部分能够抑制肿瘤细胞的生长。
[0014]第二方面，本申请提供了核苷酸分子，所述核苷酸分子编码第一方面所述的特异性结合CD27的抗体或其抗原结合部分。
[0015]第三方面，本申请提供了表达载体，所述表达载体含有如第二方面所述的核苷酸分子。
[0016]第四方面，本申请提供了宿主细胞，所述宿主细胞含有如第三方面所述的表达载体。
[0017]第五方面，本申请提供了药物组合物，所述组合物包含第一方面所述的抗CD27抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体。
[0018]在一些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种其他活性成分。在一些实施方案中，所述活性成分为抗肿瘤药物或抗病毒感染药物。
[0019]在一些实施方案中，所述组合物用于治疗CD27相关的疾病。
[0020]第六方面，本申请提供了第一方面所述的抗CD27抗体或其抗原结合部分、或第五方面所述的组合物在制备用于预防或治疗CD27相关疾病，例如肿瘤或病毒感染的药物中的应用。
[0021]在一些实施方案中，所述肿瘤包括结肠癌、肝癌、淋巴瘤、胃癌、肺癌、头颈鳞癌、或其转移癌等。
[0022]在其他方面，本申请提供了预防或治疗CD27相关疾病的方法，其包括给予有需要的个体第一方面所述的抗体或其抗原结合部分、或第五方面所述的药物组合物。
[0023]本申请的抗CD27抗体或其抗原结合部分能够特异性与CD27结合，具有以下的一种或多种效应：产生T细胞增殖和活化所需的第二信号，促进抗原特异性T细胞的增殖和活化；刺激机体产生免疫应答；促进T细胞对癌细胞的杀伤作用；具有不依赖于ADCC和CDC的免疫细胞刺激活性；和/或抑制肿瘤生长等。
[0024]附图的简要说明
[0025]图1为通过信号报告检测法测定鼠抗人CD27杂交瘤细胞培养上清的结果图，显示
ImmunologicalInterest”，National Institutes ofHealth本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合CD27的嵌合抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1序列包含氨基酸序列NYGMN(SEQ ID NO:1)；所述HCDR2序列包含氨基酸序列WINTNTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:2)；和所述HCDR3序列包含氨基酸序列EGDGFDS(SEQ ID NO:4)；优选地，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab
’
片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。2.如权利要求1所述的嵌合抗体或其抗原结合部分，其中所述重链包含与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述重链包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的嵌合抗体或其抗原结合部分，其还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列，其中所述LCDR1序列包含氨基酸序列SATSSVNYMH(SEQ ID NO:12)；所述LCDR2序列包含氨基酸序列DTSRLAS(SEQ ID NO:13)；和/或所述LCDR3序列包含氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐桂利，程慧暘，刘蕴慧，王心刚，李宏杰，王名雪，杨翠马，高新，陈思，
申请(专利权)人：北京免疫方舟医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：