抗CD3制造技术

本申请提供了一种双特异性抗体，其能够同时特异性结合抗原CD3和CD19。本申请还提供了编码所述抗体的核酸，包含所述核酸的表达载体，包含所述表达载体的宿主细胞，包含所述抗体的药物组合物，以及所述抗体的用途及其使用方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
抗CD3
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抗CD19双特异性抗体


[0001]本申请通常涉及抗体领域。更具体地，本申请涉及一种多特异性抗体及其制备方法和用途。
[0002]专利技术背景
[0003]人CD19属于免疫球蛋白超家族，是一种约95kDa大小的跨膜蛋白。除了表达于正常B淋巴细胞表面，CD19还在多种B细胞恶性肿瘤中高表达。针对B细胞相关的恶性肿瘤，CD19相关抗体治疗具有非常好的应用前景。CD3仅存在于T细胞表面，由6条肽链组成，常与T细胞表面受体(TCR)紧密结合形成含有8条肽链的TCR
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CD3复合体，共同参与T细胞对抗原的识别以及信号转导。
[0004]由于双特异性抗体能够结合两个不同表位或抗原靶点，并且具备某些联合分子所缺少的新功能(参见，例如Sergey等，Drug Des Devel Ther.12:195
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208(2018)中的综述)，因此用于治疗各种肿瘤的双特异性抗体受到越来越多的关注，特别是用于“T细胞重定向”的双特异性抗体。这类双特异性抗体可以同时靶向肿瘤细胞上的表面抗原和TCR复合物的激活组分，如CD3，从而导致靶向攻击肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活。特别是近年来，Blincyto(一种单链CD3
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CD19双特异性抗体)的成功上市，对于治疗CD19阳性B细胞恶性肿瘤起到了很好的推动作用，也为靶向CD19的治疗性抗体的研究起到了积极的促进作用。
[0005]鉴于双特异性抗体不断增加的可能应用以及与目前可用形式相关的多变结果，仍然需要改进的形式，其可以工程化，以解决与研发治疗特定疾病的抗体相关的特定挑战。
[0006]专利技术概述
[0007]为解决上述技术问题，本申请的专利技术人运用基因工程重组技术，获得稳定表达一种新型CD3
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CD19双特异性抗体(IMB057203)的细胞株。所述细胞株能够稳定高效的表达该目标双抗，产量达1～7g/L。通过体外细胞实验及体内动物实验，对其进行了相应的药效学研究。
[0008]在第一方面，本申请提供了一种双特异性抗体，其包含第一多肽链和第二多肽链，其中所述第一多肽链包含SEQ ID NO：2所示的序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO：4所示的序列。
[0009]在第二方面，本申请提供了一种核酸，其编码第一方面所述的抗体。
[0010]在第三方面，本申请提供了一种核酸，其包含第一多核苷酸链和第二多核苷酸链，其中所述第一多核苷酸链包含SEQ ID NO：1所示的序列，并且所述第二多核苷酸链包含SEQ ID NO：2所示的序列。
[0011]在第四方面，本申请提供了一种表达载体，其包含第二方面或第三方面所述的核酸。
[0012]在第五方面，本申请提供了一种宿主细胞，其包含第二方面或第三方面所述的核酸或第四方面所述的表达载体。
[0013]在第六方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面所述的抗体，第二方面或
第三方面所述的核酸，第四方面所述的表达载体或第五方面所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。
[0014]在第七方面，本申请提供了第一方面所述的抗体，第二方面或第三方面所述的核酸，第四方面所述的表达载体或第五方面所述的宿主细胞在制备用于治疗、改善或预防肿瘤、自身免疫性疾病或传染性疾病的药物中的用途。
[0015]在第八方面，本申请提供了用于治疗、改善或预防受试者中的肿瘤、自身免疫性疾病或传染性疾病的方法，其包括经静脉内或腹腔内施用有效量的第一方面所述的抗体，第二方面或第三方面所述的核酸，第四方面所述的表达载体或第五方面所述的宿主细胞。
附图说明
[0016]图1显示了本申请的抗CD3
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抗CD19双特异性抗体IMB057203的结构示意图。
[0017]图2显示了pQK IMB057203H链表达载体的图谱。
[0018]图3显示了pQK IMB057203L链表达载体的图谱。
[0019]图4显示了所筛选的细胞株表达的IMB057203的SDS
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PAGE电泳图，左边的图显示的还原条件下的电泳图，右边的图显示的是非还原条件下的电泳图。
[0020]图5显示了所筛选的细胞株表达的IMB057203的定量分析结果。
[0021]图6显示了所筛选的细胞株表达的IMB057203的HPLC分析结果。
[0022]图7显示了所筛选的细胞株表达的IMB057203的热稳定性分析结果。
[0023]图8显示了通过Fortebio检测的IMB057203与CD3E及CD19的亲和力结果。
[0024]图9显示了通过FACS检测的IMB057203与Nalm
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GFP及Jurkat
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Dual细胞的结合结果。
[0025]图10显示了通过Jurkat
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Dual细胞验证的IMB057203的抗CD3功能。
[0026]图11显示了本申请的IMB057203对Nalm
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GFP细胞的杀伤曲线。
[0027]图12显示了本申请的一个实施方案的体内药效实验流程。
[0028]图13显示了在对照和IMB057203给药后，小鼠体重的变化，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0029]图14显示了在对照和IMB057203给药后，小鼠随时间的活体成像结果。
[0030]图15显示了在对照和IMB057203给药后，小鼠随时间的活体成像数据分析，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0031]图16显示了在对照和IMB057203给药后，通过FACS检测外周血中hCD45
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细胞(百分比/计数)的变化情况，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0032]图17显示了在对照和IMB057203给药后，通过FACS检测外周血中hCD3
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细胞的变化情况，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0033]图18显示了在对照和IMB057203给药后，通过FACS检测外周血中hCD8
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细胞的变化情况，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0034]图19显示了在对照和IMB057203给药后，通过FACS检测外周血中hCD4
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细胞的变化情况，其中图A显示了总体趋势，图B显示了个体趋势。
[0035]图20显示了本申请的一个实施方案的体内药效实验流程。
[0036]图21显示了在对照和IMB057203给药后，小鼠体重的变化，其中图A显示了总体趋
势，图B显示了个体趋势。
[0037]图22显示了在对照和IMB057203给药后，小鼠随时间的活体成像结果。
[0038]图23显示了在对照和IMB057203给药本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其包含第一多肽链和第二多肽链，其中所述第一多肽链包含SEQ ID NO：2所示的序列，并且所述第二多肽链包含SEQ ID NO：4所示的序列。2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其能够同时特异性结合抗原CD3和CD19。3.一种核酸，其编码权利要求1或2所述的抗体。4.一种核酸，其包含第一多核苷酸链和第二多核苷酸链，其中所述第一多核苷酸链包含SEQ ID NO：1所示的序列，并且所述第二多核苷酸链包含SEQ ID NO：2所示的序列。5.一种表达载体，其包含权利要求3或4所述的核酸。6.一种宿主细胞，其包含权利要求3或4所述的核酸或权利要求5所述的表达载体，任选地，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞选自CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞和PER.C6细胞。7.药物组合物，其包含权利要求1或2所述的抗体，权利要求3或4所述的核酸，权利要求5所述的表达载体或权利要求6所述的宿主细胞，以及药学上可接...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁振军，程慧暘，王名雪，钱尼良，李宏杰，王心刚，陈思，杨翠马，徐桂利，
申请(专利权)人：北京免疫方舟医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：