一种基于小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体及方法技术

本发明专利技术公开了一种基于小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体及应用方法，涉及一种基因工程。本研究主要通过分子细胞生物学手段优选并截取高效的小鼠芳香烃受体AHR表达序列扩增并亚克隆至哺乳动物单杂交专用的pBIND表达载体中；经测序验证成功后，通共转染pBIND表达载体和哺乳动物单杂交报告基因载体pG5luc，随后加入二噁英类物质开展化合物活性测定，及小鼠AHR受体相关的灵敏度指标。本发明专利技术基于哺乳动物单杂交的报告基因技术进行系统的优化，建立一种毒理学测试方法，解决跨物种的高效毒性评估问题，通过增强检测灵敏度为研究新型类二噁英污染物生态毒性风险提供有效工具。效工具。效工具。

【技术实现步骤摘要】
一种基于小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体及方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种基于小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体及方法。

技术介绍

[0002]二噁英是环境中广泛存在且毒性极强的持久性有机污染物(POPs)，在废弃物焚烧和工业生产过程中非故意产生, 具有半挥发性、长距离迁移、冷捕集效应和生物富集/放大等特性，其在细胞内主要作用位点为芳香烃受体（又称二噁英受体）aryl hydrocarbon receptor（AHR），通过激活AHR产生一系列毒性效应，可对生态环境和人体健康构成严重威胁，是《斯德哥尔摩公约》中首批限制使用的 12 种持久性有机污染物之一。当前不断发现的新型类似污染物（例如：卤代咔唑PHCZs、多氯代二苯硫醚 PCDPSs、多氯萘 PCNs 等）在分子结构、生物效应等方面具有类似二噁英的性质，其中，2,3,7,8
‑
四氯代二苯并
‑
对
‑
二噁英（2,3,7,8
‑
tetrachlorodibenzo...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体，其核苷酸序列任选自SEQ ID NO. 1
‑
SEQ ID NO. 4。2.一种小鼠芳香烃受体的二噁英类物质活性测定的重组载体，其特征在于，所述的核苷酸序列的引物对选自SEQ ID NO. 5
‑
SEQ ID NO. 8中的一条与SEQ ID NO. 9。3.一种检测试剂或试剂盒，其含有重组载体。4.一种重组载体/检测试剂或试剂盒在小鼠AHR受体的敏感性测定及二噁英类物质的激活能力/毒性效力评估中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，检测方法为：（1）转染前，将生长状况良好的HEK
‑
293T细胞消化并进行细胞计数，稀释并按40000细胞/孔浓度接种进96孔板，使其在转染日密度为90％以上；细胞铺板在含血清，含抗生素的正常生...

【专利技术属性】
技术研发人员：张望龙，王仁君，丁宁，薛振宏，张琛，张丽雯，吴家梦，武佳润，戴晨宇，孙铭阳，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：