基于液相色谱质谱联用的3,5-二羟基-4-甲氧基苄醇的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于液相色谱质谱联用的3,5

【技术实现步骤摘要】
基于液相色谱质谱联用的3,5
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二羟基
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甲氧基苄醇的检测方法


[0001]本专利技术属于产品检测
，具体涉及一种基于液相色谱质谱联用的3,5
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二羟基
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甲氧基苄醇(DHMBA)的检测方法。

技术介绍

[0002]3,5
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二羟基
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甲氧基苄醇(DHMBA)是目前在贝类和藻类提取物中发现的一种新型酚类抗氧化剂，其显著的生物活性，被越来越多的人所关注，多种实验结果证明，DHMBA能有效保护肝细胞免受氧化应激引起的凋亡和坏死，并能在多种条件下预防或减轻非酒精性脂肪性肝炎，与此同时，还具有清除自由基、抑制铜介导低密度脂蛋白氧化并可靶向代谢通路抑制前列腺癌转移等功能。
[0003]3,5
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甲氧基苄醇(DHMBA)因其本身的特性，使用传统的反相色谱很难进行测定，目前文献中所涉及的方法，均采用液相色谱
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质谱连用的方法进行测定。
[0004]渡边贡等人使用液相色谱质谱联用仪对DHMBA的含量进行测定，因其流动相中加入甲酸，会导致峰面积响应值偏低，检出限较高。Hiroaki等人采用LC
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MS/MS进行DHMBA含量的测定，其使用的色谱柱，通用性不强，且其在测定过程中添加内标物质，内标物的添加虽在一定程度上提高结果的准确度，但在实际生产过程中，会提高检测成本。
[0005]目前，关于3,5/>‑
二羟基
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甲氧基苄醇(DHMBA)的检测方法仍然较少，因此如何研究得出一种更加方便且准确的检测方法是非常重要的。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种基于液相色谱质谱联用的3,5
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甲氧基苄醇(DHMBA)的检测方法，以解决现有技术无法快速、准确检测样品中3,5
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甲氧基苄醇(DHMBA)的问题，以弥补现有技术的不足。
[0007]为实现上述专利技术目的，本专利技术采取的具体技术方案如下：
[0008]一种基于液相色谱质谱联用的3,5
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甲氧基苄醇(DHMBA)的检测方法，包括如下步骤：
[0009](1)样品溶液制备；
[0010](2)DHMBA标准品溶液制备；
[0011](3)将上述制得的标准品溶液和空白溶液进行液相色谱质谱检测，该液相色谱质谱的色谱条件为：
[0012]色谱柱：C18柱；
[0013]流动相：A水，B乙腈；
[0014]柱温：30℃；
[0015]流速：0.2mL/min；
[0016]洗脱方式：梯度洗脱，0min，90％A；5min，5％A；7min，5％A，柱后2.5min；
[0017](4)制备标准曲线；
[0018](5)对样品溶液进行上述条件下的液相质谱检测，并根据标准曲线进行定量分析。
[0019]进一步的，所述步骤(1)具体为：
[0020]1)取样品，如贝类及藻类湿料：进行匀浆，匀浆后样液，经胶体磨进一步处理后获得样品储备液；
[0021]或取样品，如贝类及藻类干料：样品剪碎、研磨为粉末状，精确称取一定量的样品，使用超纯水配置得到样品储备液；
[0022]2)取样品储备液加入乙腈溶液，混合后再进行超声，冷却至室温后，离心，取上清液，过滤膜后，得到样品溶液。
[0023]更进一步的，所述1)中按照质量比(1:1)进行匀浆10min；使用超纯水配置为20mg/mL的样品储备液；所述2)中，样品储备液250μL，加入750μL乙腈溶液，涡旋混合后进行超声，冷却至室温后，12000rpm/min离心5min，取上清液，过0.22μm滤膜后，得到样品溶液。
[0024]更进一步的，所述乙腈溶液为体积比75％的乙腈水溶液(乙腈：水＝75：25)75％；所述超声条件为60℃，超声频率(40KHz)，超声时间为5min。
[0025]进一步的，所述步骤(2)中，准确称取DHMBA标准物质，使用75％乙腈配置为1mg/ml的标准溶液，用75％乙腈逐级稀释标准溶液，得到浓度为5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、750ng/mL的标准梯度稀释液。
[0026]进一步的，所述步骤(3)中可以选用的质谱条件：离子源：AJS
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ESI；负离子模式；扫描模式：多反应监测MRM；检测离子对：169
→
153.9，169
→
137，169
→
124.9；碎裂电压：85；碰撞电压分别为：10V、28V、20V；干燥气温度：300℃；干燥气流速：8L/min；雾化气压力：35psi。
[0027]上述检测方法能够用于贝类及藻类生物原料及其制品中DHMBA含量的测定中。
[0028]本专利技术的优点和有益效果为：
[0029]本专利技术采用更加通用的色谱柱，更简洁的流动相，更快速便捷的前处理方式，其干扰性更低，重复性更高；仅以外标法进行定量，降低检测成本。采用更通用的色谱柱，更简洁的流动相，更快速便捷的前处理方式，具有干扰性更低，重复性更高、测定时间短、定量限低、线性范围更宽、重复性好和回收率更高等优势。适用于贝类及藻类的原料及其制品中DHMBA含量的测定。
[0030]经过验证，本专利技术中3,5
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甲氧基苄醇(DHMBA)可在2～2.2min时间内得到对称的色谱分离峰。相比其它萃取溶剂，用75％乙腈作萃取溶剂，受到的基质干扰较小，分离效果最好。目标化合物在5～750ng/mL范围内呈现良好线性关系(r2>0.9999)；检出限为0.5ng/mL，定量限为2ng/mL；相对标准偏差小于8％；样品加标回收率为80～110％。
附图说明
[0031]图1为优化条件下DHMBA标准品的MRM色谱图。
[0032]图2为DHMBA标准品的校正曲线图。
[0033]图3为添加甲酸流动相测定条件下DHMBA测定MRM谱图。
[0034]图4为实施例3中流动相条件下DHMBA的MRM色谱图。
具体实施方式
[0035]以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本申请的专利技术作出多种改变和修饰，而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。
[0036]下面以具体实施例的方式对本专利技术作进一步的说明。本专利技术实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于液相色谱质谱联用的3,5
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甲氧基苄醇的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下步骤：（1）样品溶液制备；（2）DHMBA标准品溶液制备；（3）将上述制得的标准品溶液和空白溶液进行液相色谱质谱检测，该液相色谱质谱的色谱条件为：色谱柱： C18柱；流动相：A水，B乙腈；柱温：30℃；流速：0.2mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，90%A；5min，5%A；7min，5%A，柱后2.5min；（4）制备标准曲线；（5）对样品溶液进行上述条件下的液相质谱检测，并根据标准曲线进行定量分析。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）具体为：（1）取样品，如贝类及藻类湿料：进行匀浆，匀浆后样液，经胶体磨进一步处理后获得样品储备液；或取样品，如贝类及藻类干料：样品剪碎、研磨为粉末状，精确称取一定量的样品，使用超纯水配置得到样品储备液；（2）取样品储备液加入乙腈溶液，混合后再进行超声，冷却至室温后，离心，取上清液，过滤膜后，得到样品溶液。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述1）中按照质量比(1:1)进行匀浆10min；使用超纯水配置为20mg/mL的样品储备液；所述2）中，样品储备液250μL，加入750μL乙腈溶液，涡旋混...

【专利技术属性】
技术研发人员：李若姝，张凤艳，冯婷玉，任盈，刘威嘉，刘晔，姜晓明，许凯，魏迎新，丛培旭，马良伟，姜宇珊，刘红英，姜坤昊，
申请(专利权)人：青岛海洋食品营养与健康创新研究院，
类型：发明
国别省市：