基于NanoSPR生物芯片的定性或定量检测人或动物体内中和抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于NanoSPR生物芯片的定量检测人或动物体内中和抗体的方法，涉及新冠病毒检测技术领域；采用两步法，先在集成有NanoSPR生物芯片的芯片微孔板上孵育、修饰病毒片段蛋白或受体蛋白；再将不同浓度的待测样本稀释液加至芯片微孔板的每个微孔中；使用酶标仪记录数据初始状态检测值；最后相应地加入用受体蛋白或病毒片段蛋白标记的胶体金；反应结束后，采用酶标仪记录数据完成检测。本方法能够检测人或动物的大部分传染病类病原微生物或病毒载体的中和抗体，相比ELISA方法，本方法整个检测阶段耗时不超过30min，无需反复加样和洗板，可实现高通量、快速、超灵敏度的中和抗体检测。抗体检测。抗体检测。

【技术实现步骤摘要】
基于NanoSPR生物芯片的定性或定量检测人或动物体内中和抗体的方法


[0001]本专利技术涉及中和抗体检测
，特别涉及基于NanoSPR生物芯片的定性或定量检测人或动物体内中和抗体的方法。

技术介绍

[0002]新冠病毒超快的变异速度，以及超强的传播力和致病力，给疫情防控和抗疫科学研究都带来了不小的挑战。为了快速适应新冠肺炎流行变异株的常态化防控，变异株疫苗和中和抗体药物的开发依旧是两个重要的方向。中和抗体(Nautralizing Antibody)是一种自然产生的抗体，是人体免疫系统反应的一部分；可由感染或疫苗接种触发，用于抑制或破坏侵入人体的外来因素的影响。中和抗体除了能够直接与病毒结合，阻止它们感染细胞以外，还是变异株新疫苗研发、临床评价、疫苗接种后有效性评估的重要的指标之一。
[0003]为了判断疫苗接种的效果(针对COVID
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19的任意疫苗)，衡量社会的免疫力，检测先前感染者的免疫状态，寻找抗血清捐赠者(捐赠给ICU重症患者)，助力变异株疫苗的研发与临床评价，目前检测中和抗体的金标准是感染抑制试验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取集成有纳米等离子共振生物芯片的芯片微孔板，在每个微孔的NanoSPR生物芯片上孵育、修饰病毒片段蛋白或受体蛋白；将待测样本梯度稀释后待用；S2、将步骤S1制备的待测样本梯度稀释液加入到步骤S1所得的芯片微孔板中反应；用酶标仪记录数据初始状态检测值；反应一段时间后，在芯片微孔板中加入标记有受体蛋白或病毒片段的胶体金溶液进行反应，反应结束后用酶标仪记录终点状态检测值；所述中和抗体为病原微生物侵入人或动物体内时产生的具有相应的中和能力的抗体，所述病原微生物为传染病类病原微生物或病毒载体；所述受体蛋白是与病毒片段蛋白特异性结合的蛋白。2.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S1具体为：取集成有NanoSPR生物芯片的芯片微孔板，在每个微孔的NanoSPR生物芯片上先用病毒片段蛋白或受体蛋白进行第一次孵育，孵育温度4
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37℃，孵育时间2
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24h；用缓冲液清洗并氮气吹干后，加入酪蛋白封闭液进行第二次孵育，孵育温度4
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37℃，孵育时间0.5
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2h；用缓冲液清洗并氮气吹干后，备用；将待测样本用稀释液梯度稀释后待用。3.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S1中，稀释待测样本的稀释液是质量分数2％NaCl的PBST缓冲液。4.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S2中，标记有受体蛋白或病毒片段蛋白的胶体金溶液的制备方法具体为：取1ml胶体金溶液，加入6
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20μL 0.1M碳酸钾溶液，混匀；然后加入1
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10μg受体蛋白或病毒片段蛋白混匀、静置；再加入5
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15μL10％的PEG 20000混匀，静置；冷冻离心，去上清后取沉淀加入100
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500μL复溶液混匀。5.根据权利要求4所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S2中制备标记有受体蛋白或病毒片段蛋白的胶体金溶液时，冷冻离心的条件为2
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8℃、7000
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10000rpm离心20
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40min。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丽萍，李睿，周翰霖，刘钢，
申请(专利权)人：量准武汉生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：