具有增强的碳水化合物的高强度酸性Α-葡糖苷酶制造技术

披露了源自CHO细胞的重组人α葡糖苷酶(rhGAA)组合物，该组合物包含更优化的聚糖组合物，该聚糖组合物由rhGAA和在复合寡糖上的低量的末端半乳糖组成，该rhGAA比常规rhGAA更高量、包含携带甘露糖

【技术实现步骤摘要】
具有增强的碳水化合物的高强度酸性
Α
‑
葡糖苷酶
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是申请日为2015年09月30日、申请号为201580052512.5、专利技术 名称为“具有增强的碳水化合物的高强度酸性Α
‑
葡糖苷酶”的专利技术专利申请 的分案申请。
[0003]专利技术背景
专利

[0004]本专利技术涉及医学、遗传学和重组糖蛋白生物化学领域，并且具体地涉及 重组人α葡糖苷酶(rhGAA)组合物，这些组合物具有较高总含量的带有甘 露糖6
‑
磷酸的聚糖，这些聚糖有效靶向肌细胞上的CIMPR并随后将rhGAA 递送至溶酶体，在该溶酶体中该rhGAA可分解异常高水平的累积的糖原。与 常规rhGAA产品相比，本专利技术的rhGAA表现出优秀的对肌细胞的靶向和随 后向溶酶体的递送，并且表现出使其对患有庞贝氏病(Pompe disease)的受 试者的酶替代疗法特别有效的其他药代动力学性质。
[0005]相关技术说明
[0006]针对庞贝氏病的现有酶替代疗法使用常规rhGAA产品，这些常规rhGAA 产品具有低总含量的带有M6P和双
‑
M6P的聚糖。已知已知和阿葡糖苷酶α名下的常规产品。“Lumizyme”和“Myozyme”是 由健赞公司(Genzyme)作为生物制剂生产或销售的且由美国食品和药物管 理局批准的常规形式的rhGAA，并且该“Lumizyme”和“Myozyme”通过参 考医生案头参考(Physician
’
s Desk Reference)(2014)(其通过引用结合在 此)或由FDA于2014年10月1日批准在美国使用的名为或 的产品来描述。阿葡糖苷酶α被鉴定为化学名称[199
‑
精氨 酸,223
‑
组氨酸]前原
‑
α
‑
葡糖苷酶(人)；分子式：C
4758
H
7262
N
1274
O
1369
S
35
； CAS号420794
‑
05
‑
0。将这些产品给予于患有庞贝氏病(又称糖原贮积症II型 (GSD
‑
II)或酸性麦芽糖酶缺乏症)的受试者。酶替代疗法寻求通过给予 rhGAA替换溶酶体中缺失的GAA，从而恢复细胞分解溶酶体糖原的能力来治 疗庞贝氏病。
[0007]庞贝氏病是由于酸性α
‑
葡糖苷酶(GAA)活性缺乏导致的遗传性溶酶体 贮积症。患有庞贝氏病的人没有或具有降低水平的酸性α
‑
葡糖苷酶 (GAA)，该酶分解糖原和身体用作能量源的物质。这种酶缺乏导致溶酶体 中过量的糖原累积，这些溶酶体是包含通常分解糖原和其他细胞碎片或废物 的酶的内细胞器。患有庞贝氏病的受试者的某些组织(尤其是肌肉)中的糖 原累积损害了细胞正常运行的能力。在庞贝氏病中，在溶酶体中，特别是在 骨骼肌细胞中，糖原没有适当地代谢并逐渐累积，并且在该疾病的婴儿发病 形式中，在心肌细胞中，糖原没有适当地代谢并逐渐累积。糖原的积累损害 肌细胞和神经细胞以及其他受影响的组织中的那些肌细胞和神经细胞。
[0008]传统上，取决于发病年龄，庞贝氏病在临床上被确认为是早期婴儿形式 或晚期发病形式。发病年龄倾向于与导致庞贝氏病的遗传突变的严重性相 应。最严重的基因突变导致GAA活性的完全丧失，显现为婴儿期的早发性疾 病。减少GAA活性但不完全消除GAA活性的遗传突变与具有延迟发病和进展 的庞贝氏病的形式相关。婴儿发病的庞贝氏病在出生
后不久显现，并且其表 征为肌无力、呼吸功能不全和心力衰竭。未经治疗，它通常在两年内是致命 的。儿童和成人发病的庞贝氏病在生命晚期显现，并且通常进展比婴儿发病 更慢。这种形式的疾病，虽然它通常不影响心脏，但由于骨骼肌和参与呼吸 的那些肌肉的弱化，也可以导致死亡。
[0009]当前庞贝氏病的非姑息治疗涉及使用重组人GAA(rhGAA)如 或的酶替代疗法(ERT)。给予rhGAA以试图在患有庞 贝氏病的受试者中替换或补充缺失的或缺乏的GAA。然而，由于常规rhGAA 产品中的大多数rhGAA不靶向肌肉组织，因此在给予后其被非生产性地消 除。
[0010]发生这种状况是因为常规rhGAA缺乏高总含量的带有M6P和双
‑
M6P的聚 糖，这些聚糖将rhGAA分子靶向靶肌细胞上的CIMPR，随后在这些靶肌细胞 中将该rhGAA转运到细胞的溶酶体中。这种用于酶替代疗法的rhGAA的细胞 摄取通过专门的碳水化合物(甘露糖
‑6‑
磷酸(M6P))进行促进，该M6P结 合至存在于细胞表面上的阳离子非依赖性甘露糖6
‑
磷酸受体(CIMPR)，用 于随后将外源酶递送至溶酶体。
[0011]在rhGAA上存在七个潜在的N
‑
联糖基化位点。由于每个糖基化位点在存 在的N
‑
联寡糖(N
‑
聚糖)的类型中是异质的，所以rhGAA由具有N
‑
聚糖的蛋 白的复杂混合物组成，这些N
‑
聚糖对M6P受体和其他碳水化合物受体具有不 同结合亲和力。包含具有一个M6P基团(单
‑
M6P)的高甘露糖N
‑
聚糖的 rhGAA以低(约6,000nM)亲和力结合至CIMPR，而在相同N
‑
聚糖上包含两 个M6P基团(双
‑
M6P)的rhGAA以高(约2nM)亲和力来结合。非磷酸化 的、单
‑
M6P、和双
‑
M6P聚糖的代表性结构如图1A所示。甘露糖
‑6‑
P基团如图 1B所示。一旦在溶酶体内，rhGAA可以酶促降解累积的糖原。然而，常规 rhGAA具有低总水平的带有M6P和双
‑
M6P的聚糖，并且因此靶向肌细胞很 差，导致rhGAA至溶酶体的较差递送。这些常规产品中的大多数rhGAA分子 不具有磷酸化的N
‑
聚糖，从而缺乏对CIMPR的亲和力。非磷酸化的高甘露糖 聚糖也可以被甘露糖受体清除，该甘露糖受体导致ERT的非生产性清除(图 2)。
[0012]包含半乳糖和唾液酸的其他类型的N
‑
聚糖、复合碳水化合物，也存在于 rhGAA上。由于复合的N
‑
聚糖没有被磷酸化，所以它们对CIMPR没有亲和 力。然而，具有暴露的半乳糖残基的复合型N
‑
聚糖对肝脏肝细胞上的脱唾液 酸糖蛋白受体具有中度至高度亲和力，这导致rhGAA的快速非生产性清除 (图2)。
[0013]GAA或rhGAA的糖基化可以通过磷酸转移酶和坎菲尔德(Canfield)等 人，美国专利号6,534,300所描述的揭酶(uncovering enzyme)在体外进行酶 促修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种源自CHO细胞的rhGAA组合物，该rhGAA组合物包含比通过(阿葡糖苷酶α；CAS 420794
‑
05
‑
0)所例示的常规rhGAA更高量的rhGAA，该更高量的rhGAA包含携带单
‑
甘露糖
‑6‑
磷酸(M6P)或双
‑
M6P的N
‑
聚糖。2.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中该rhGAA包括与通过SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列具有至少95％一致性的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中30％或更多的rhGAA结合至阳离子非依赖性甘露糖
‑6‑
磷酸受体(CIMPR)，或者30％或更多的rhGAA包含携带单
‑
M6P或双
‑
M6P的N
‑
聚糖。4.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中50％或更多的rhGAA结合至阳离子非依赖性甘露糖
‑6‑
磷酸受体(CIMPR)，或者50％或更多的rhGAA包含携带单
‑
M6P或双
‑
M6P的N
‑
聚糖。5.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中90％至100％的rhGAA结合至阳离子非依赖性甘露糖
‑6‑
磷酸受体(CIMPR)，或者90％至100％或更多的rhGAA包含携带单
‑
M6P或双
‑
M6P的N
‑
聚糖。6.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中携带M6P的N
‑
聚糖的平均含量范围是从0.5至7.0mol/mol rhGAA。7.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中携带M6P的N
‑
聚糖的平均含量范围是从1.0至4.0mol/mol rhGAA。8.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中携带M6P的N
‑
聚糖的平均含量范围是从5.0至6.0mol/mol rhGAA。9.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中平均来说，这些N
‑
聚糖包含大于3mol/mol的M6P和大于4mol/mol的唾液酸。10.如权利要求1所述的rhGAA组合物，其中平均来说，该rhGAA上的40％至60％的N
‑
聚糖是复合型N
‑
聚糖；其中该rhGAA上的不超过6.5％的N
‑
聚糖是杂合型N
‑
聚糖，并且其中该rhGAA上的不超过15％的高甘露糖型N
‑
聚糖是非磷酸化的，该rhGAA上的至少10％的高甘露糖型N
‑
聚糖是单
...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉塞尔，
申请(专利权)人：阿米库斯治疗学公司，
类型：发明
国别省市：