变体IGF2构建体制造技术

本文提供了用于治疗溶酶体贮积症的新型IGF2肽、融合蛋白以及编码新型IGF2肽和融合蛋白的核酸序列，其中这些IGF2肽赋予增强的特性，例如增强的表达、分泌和细胞摄取。本文提供的构建体可通过酶替代疗法和基因疗法两者用于治疗溶酶体贮积症。于治疗溶酶体贮积症。于治疗溶酶体贮积症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】变体IGF2构建体
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于2019年10月10日提交的美国临时申请62/913,677和于2019年10月31日提交的美国临时申请62/929,054的优先权权益，每个临时申请皆通过引用以其全文并入本文。

技术介绍

[0002]遗传障碍是经由在基因组的基因编码区中发生的可遗传突变或新生(de novo)突变引起的。在一些情况下，通过施用替代由患有遗传障碍的个体中突变的基因编码的蛋白质的蛋白质或通过施用编码这种蛋白质的基因疗法载体来治疗此类遗传障碍。然而，这样的治疗具有挑战，因为施用的蛋白质或由基因疗法载体编码的蛋白质并不总使蛋白质到达需要它的器官、细胞或细胞器。需要具有改善的细胞内靶向(例如，针对溶酶体)的蛋白质，以及编码它们的基因疗法载体。

技术实现思路

[0003]在某些方面，提供了核酸构建体，这些核酸构建体包含：(a)编码治疗性蛋白质的核酸序列，和(b)编码变体IGF2(vIGF2)肽的核酸序列。在一些实施例中，该vIGF2肽具有与表3的IGF2变体肽有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，该vIGF2肽包含与选自由表3的SEQ ID NO:90
‑
123组成的组的IGF2变体肽有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，该vIGF2肽进一步包含接头，该接头具有与选自由SEQ ID NO:181
‑
188组成的组的序列有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施例中，与原生IGF2肽相比，该vIGF2肽对胰岛素受体和IGFR1具有降低的亲和力或没有亲和力。在一些实施例中，与原生IGF2肽相比，该vIGF2肽对CI
‑
MPR的亲和力增加。在一些实施例中，与原生IGF2肽相比，该vIGF2肽赋予融合蛋白改善的表达和/或分泌。在一些实施例中，该vIGF2肽能够促进该治疗性蛋白质摄取到细胞中的溶酶体中。在一些实施例中，该治疗性蛋白质能够替代患有遗传障碍的受试者中与遗传障碍相关的有缺陷的或缺乏的蛋白质。在一些实施例中，遗传障碍是溶酶体贮积症。在一些实施例中，遗传障碍选自由以下组成的组：天冬氨酰葡糖胺尿症、CLN1病、CLN2病、胱氨酸病、法布里病(Fabry disease)、I型戈谢病(Gaucher disease)、II型戈谢病、III型戈谢病、庞贝病(Pompe disease)、泰
‑
萨克斯病(Tay Sachs disease)、桑德霍夫病(Sandhoff disease)、异染性脑白质营养不良、I型黏脂贮积病、II型黏脂贮积病、III型黏脂贮积病、IV型黏脂贮积病、贺勒病(Hurler disease)、亨特病(Hunter disease)、A型圣菲利波病(Sanfilippo disease)、B型圣菲利波病、C型圣菲利波病、D型圣菲利波病、A型莫基奥病(Morquio disease)、B型莫基奥病、马罗托
‑
拉米病(Maroteau
‑
Lamy disease)、斯莱病(Sly disease)、A型尼曼
‑
皮克病(Niemann
‑
Pick disease)、B型尼曼
‑
皮克病、C1型尼曼
‑
皮克病、C2型尼曼
‑
皮克病、I型辛德勒病(Schindler disease)、II型辛德勒病、腺苷脱氨酶重症联合免疫缺陷(ADA
‑
SCID)、慢性肉芽肿病(CGD)以及神经元蜡样质脂褐质沉积症。在一
些实施例中，遗传障碍是庞贝病。在一些实施例中，遗传障碍是神经元蜡样质脂褐质沉积症。在一些实施例中，该治疗性蛋白质包含选自由以下组成的组的酶：α
‑
半乳糖苷酶(A或B)、β
‑
半乳糖苷酶、β
‑
己糖胺酶(A或B)、半乳糖神经酰胺酶、芳基硫酸酯酶(A或B)、β
‑
葡萄糖脑苷脂酶、葡萄糖脑苷脂酶、溶酶体酸性脂肪酶、溶酶体酶酸性鞘磷脂酶、甲酰甘氨酸生成酶、艾杜糖醛酸酶(例如，α
‑
L)、乙酰辅酶A：α
‑
氨基葡糖苷N
‑
乙酰转移酶、糖胺聚糖α
‑
L
‑
艾杜糖醛酸水解酶、乙酰肝素N
‑
硫酸酯酶、N
‑
乙酰基
‑
α
‑
D
‑
氨基葡糖苷酶(NAGLU)、艾杜糖醛酸
‑2‑
硫酸酯酶、半乳糖胺
‑6‑
硫酸硫酸酯酶、N
‑
乙酰半乳糖胺
‑6‑
硫酸酯酶、N
‑
磺基葡糖胺磺基水解酶、糖胺聚糖N
‑
乙酰半乳糖胺4
‑
硫酸酯酶、β
‑
葡糖醛酸糖苷酶、透明质酸酶、α
‑
N
‑
乙酰神经氨酸酶(唾液酸酶)、神经节苷脂唾液酸酶、磷酸转移酶、α
‑
葡糖苷酶、α
‑
D
‑
甘露糖苷酶、β
‑
D
‑
甘露糖苷酶、天冬氨酰氨基葡糖苷酶、α
‑
L
‑
岩藻糖苷酶、巴滕素(battenin)、棕榈酰蛋白硫酯酶和其他巴滕病(Batten)相关蛋白(例如，蜡样质脂褐质沉积症神经元蛋白6)，或其酶活性片段。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是α
‑
葡糖苷酶，或其酶活性片段。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是三肽基肽酶1(TPP1)。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是天冬氨酰氨基葡糖苷酶。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是NAGLU(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，该治疗性蛋白质是NAGLU的成熟肽，对应于去除原生信号肽(SEQ ID NO:180)后保留的SEQ ID NO:54的氨基酸24
‑
743。在一些实施例中，该核酸构建体进一步包含翻译起始序列。在一些实施例中，该翻译起始序列包含Kozak序列。在一些实施例中，编码vIGF2的核酸序列在编码治疗性蛋白质的核酸序列的5
’
端。在一些实施例中，编码vIGF2的核酸序列在编码治疗性蛋白质的核酸序列的3
’
端。在一些实施例中，该核酸构建体进一步包含接头序列，该接头序列编码在vIGF2核苷酸序列和编码治疗性蛋白质的核酸序列之间的接头肽。在一些实施例中，该接头肽包含SEQ ID NO:181
‑
188。在一些实施例中，该核酸构建体是病毒载体。在一些实施例中，病毒载体是腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、牛痘病毒载体、腺病毒载本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸构建体，其包含：(a)编码治疗性蛋白质的核酸序列，和(b)编码变体IGF2(vIGF2)肽的核酸序列，所述vIGF2肽与选自SEQ ID NO:90
‑
103的至少一个序列有至少95％同一性。2.如权利要求1所述的核酸构建体，其中所述vIGF2肽具有与选自SEQ ID NO:106、109、111、119、120、121的IGF2变体肽有至少98％同一性的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的核酸构建体，其中所述vIGF2肽包含与选自由SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:121组成的组的IGF2变体肽有至少98％同一性的氨基酸序列。4.如权利要求1至3中任一项所述的核酸构建体，其进一步包含编码接头的序列，所述接头具有与选自由SEQ ID NO:181
‑
188组成的组的序列有至少98％同一性的序列。5.如权利要求1至4中任一项所述的核酸构建体，其中与具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的vIGF2肽相比，所述vIGF2肽能够增加治疗性蛋白质的表达和/或分泌。6.如权利要求1至4中任一项所述的核酸构建体，其中与具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的vIGF2肽相比，所述vIGF2肽对CI
‑
MPR具有增加的亲和力。7.如权利要求1至4所述的核酸构建体，其中所述vIGF2肽能够提高所述治疗性蛋白质摄取到细胞中。8.如权利要求1至7中任一项所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质能够替代患有遗传障碍的受试者中与所述遗传障碍相关的有缺陷的或缺乏的蛋白质。9.如权利要求8所述的核酸构建体，其中遗传障碍是溶酶体贮积症。10.如权利要求8所述的核酸构建体，其中所述遗传障碍选自由以下组成的组：天冬氨酰葡糖胺尿症、神经元蜡样质脂褐质沉积症、CLN1/PPT1病、CLN2/PPT1病、胱氨酸病、法布里病、I型戈谢病、II型戈谢病、III型戈谢病、庞贝病、泰
‑
萨克斯病、桑德霍夫病、异染性脑白质营养不良、I型黏脂贮积病、II型黏脂贮积病、III型黏脂贮积病、IV型黏脂贮积病、贺勒病、亨特病、A型圣菲利波病、B型圣菲利波病、C型圣菲利波病、D型圣菲利波病、A型莫基奥病、B型莫基奥病、马罗托
‑
拉米病、斯莱病、A型尼曼
‑
皮克病、B型尼曼
‑
皮克病、C1型尼曼
‑
皮克病、C2型尼曼
‑
皮克病、I型辛德勒病、II型辛德勒病、腺苷脱氨酶重症联合免疫缺陷(ADA
‑
SCID)以及神经元蜡样质脂褐质沉积症。11.如权利要求8或权利要求9所述的核酸构建体，其中所述遗传障碍选自由CLN1/PPT1病、CLN2/PPT1病、庞贝病和MPS IIIB病组成的组。12.如权利要求11所述的核酸构建体，其中所述遗传障碍是CLN1/PPT1病或CLN2/PPT1病。13.如权利要求1至12中任一项所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质包含选自由以下组成的组的人酶：α
‑
半乳糖苷酶(A或B)、β
‑
半乳糖苷酶、β
‑
己糖胺酶(A或B)、半乳糖神经酰胺酶、芳基硫酸酯酶(A或B)、β
‑
葡萄糖脑苷脂酶、葡萄糖脑苷脂酶、溶酶体酸性脂肪酶、溶酶体酶酸性鞘磷脂酶、甲酰甘氨酸生成酶、艾杜糖醛酸酶(例如，α
‑
L)、乙酰辅酶A：α
‑
氨基葡糖苷N
‑
乙酰转移酶、糖胺聚糖α
‑
L
‑
艾杜糖醛酸水解酶、乙酰肝素N
‑
硫酸酯酶、N
‑
乙酰基
‑
α
‑
D
‑
氨基葡糖苷酶(NAGLU)、艾杜糖醛酸
‑2‑
硫酸酯酶、半乳糖胺
‑6‑
硫酸硫酸酯酶、N
‑
乙酰半乳糖胺
‑6‑
硫酸酯酶、N
‑
磺基葡糖胺磺基水解酶、糖胺聚糖N
‑
乙酰半乳糖胺4
‑
硫酸酯酶、β
‑
葡糖醛酸糖苷酶、透明质酸酶、α
‑
N
‑
乙酰神经氨酸酶(唾液酸酶)、神经节苷脂唾液酸酶、
磷酸转移酶、α
‑
葡糖苷酶、α
‑
D
‑
甘露糖苷酶、β
‑
D
‑
甘露糖苷酶、天冬氨酰氨基葡糖苷酶、α
‑
L
‑
岩藻糖苷酶、巴滕素、PPT1、TPP1和其他巴滕病相关蛋白(例如，蜡样质脂褐质沉积症神经元蛋白6)，或其酶活性片段。14.如权利要求13所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质是α
‑
葡糖苷酶，或其酶活性片段。15.如权利要求13所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质是人PPT1。16.如权利要求13所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质是人TPP1。17.如权利要求13所述的核酸构建体，其中所述治疗性蛋白质是人NAGLU。18.如权利要求1所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体进一步包含编码信号肽的序列。19.如权利要求18所述的核酸构建体，其中所述信号肽是选自由SEQ ID NO:169
‑
180组成的组的序列之一。20.如权利要求1至19中任一项所述的核酸构建体，其中所述编码vIGF2的核酸序列在所述编码治疗性蛋白质的核酸序列的5
’
端。21.如权利要求1至19中任一项所述的核酸构建体，其中所述编码vIGF2的核酸序列在所述编码治疗性蛋白质的核酸序列的3
’
端。22.一种基因疗法载体，其包含如权利要求1至21中任一项所述的核酸构建体。23.如权利要求22所述的基因疗法载体，其中所述基因疗法载体是病毒载体。24.如权利要求23所述的基因疗法载体，其中所述病毒载体是腺病毒载体、腺相关病毒(AAV)载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、牛痘病毒载体、腺病毒腺病毒载体或疱疹病毒载体。25.如权利要求1至21中任一项所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体是质粒。26.一种药物组合物，其包含治疗有效量的如权利要求1至23中任一项所述的核酸构建体或如权利要求22至24中任一项所述的基因疗法载体，和药学上可接受的载剂或赋形剂。27.如权利要求25所述的药物组合物，其中所述赋形剂包括非离子型低渗透性化合物、缓冲剂、聚合物、盐或其组合。28.一种治疗遗传障碍的方法，其包括向有需要的受试者施用如权利要求1至23中任一项所述的核酸构建体或如权利要求25或权利要求26所述的药物组合物。29.如权利要求27所述的方法，其中所述遗传障碍是溶酶体贮积症。30.如权利要求27或权利要求28所述的方法，其中所述遗传障碍选自由以下组成的组：天冬氨酰葡糖胺尿症、神经元蜡样质脂褐质沉积症、CLN1/PPT1病、CLN2/PPT1病、胱氨酸病、法布里病、I型戈谢病、II型戈谢病、III型戈谢病、庞贝病、泰
‑
萨克斯病、桑德霍夫病、异染性脑白质营养不良、I型黏...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：阿米库斯治疗学公司，
类型：发明
国别省市：