淀粉酶变体制造技术

具有淀粉酶活性的基因工程化的酶、包含所述酶的组合物以及制备和使用所述酶的方法。基因工程化的淀粉酶可用于许多不同的应用，例如衣物洗涤剂、餐具洗涤剂和用于家庭的清洁产品、工业、车辆护理、烘焙、动物饲料、纸浆和纸加工、淀粉加工、酿造和乙醇生产。酿造和乙醇生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】淀粉酶变体


[0001]在本专利技术中提供了新的淀粉酶。更具体地，本专利技术提供了基因工程化的淀粉酶、包含该酶的组合物以及使用该酶或包含该酶的组合物的方法。基因工程化的淀粉酶可用于许多不同的应用，例如衣物洗涤剂、餐具洗涤剂和用于家庭的清洁产品、工业、车辆护理、烘焙、动物饲料、纸浆和纸加工、淀粉加工和乙醇生产。淀粉酶已用于去除淀粉污渍，并已添加到各种组合物中，例如清洁产品。这些应用中的许多需要使用在升高的温度下或在变性条件下稳定的淀粉酶。因此，需要具有改善的特性，特别是具有改善的稳定性和改善的性能的基因工程化的淀粉酶。

技术实现思路

[0002]本专利技术涉及具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽，其包含A和B结构域和C结构域，其中A和B结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％相同，并且C结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少75％相同。
[0003]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的多肽由A和B结构域和C结构域组成，其中A和B结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少75％相同，并且C结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少75％相同。
[0004]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的多肽的A和B结构域与具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的A和B结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
[0005]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的多肽的C结构域与具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的C结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
[0006]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽在一个或多个位置包含取代、缺失和/或插入。
[0007]优选地，具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽包含序列TQXDYLDHPDVIGWTREGDXXHXXSGLAXLMSDGPXGXKWMXVGKNNAGEXWXDITGNQTNTVTINXDGXGQFXVXXGSXSIYXQX，其中X可以是任何氨基酸。
[0008]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽具有一个或多个选自以下的基于SEQ ID NO：39的编号的氨基酸残基：402R，H；419S，G，D；420V，I；422A，V；423N，D，G，K；428T，A；435G，R，E；437S，A；441N，E，D；444K，E；450V，I；452Y，H，R；466K，R；469W，S；473H，Q，R；475S，N；476G，E；479V，A；483V，I；和485R，Q，K，优选地选自基于SEQ ID NO：39的编号的402R；419D；420V；422A；423D；428A，T；435R；437S；441E；444K；450V；452Y；466K；469W；473R；475S；476G；479V；483V；和485Q。
[0009]优选地，基于SEQ ID NO：39的编号，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽包含在一个或多个选自430和454的位置上的取代，优选地，本专利技术的淀粉酶包含氨基酸残基430M和/或430I，优选地，产生430M和/或454I的取代，优选地，选自I430M和
M454I的取代。
[0010]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽在一个或多个选自401、403、405、411、413、415、424、426、428、432、455、477、479和481的氨基酸位置(根据SEQ ID NO：39编号)上包含如SEQ ID NO：39所示的氨基酸残基。
[0011]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽在一个或多个选自309、313、347、348、350、351、354、355、358、359、388、389、392和396的氨基酸位置(根据SEQ ID NO：39编号)上包含如SEQ ID NO：40所示的氨基酸残基。
[0012]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽在对应于SEQ ID NO：39的编号的相应于位置181、182、183和184包含一个或多个氨基酸的缺失，优选地包含相应于位置181、182、183和184的两个或更多个氨基酸的缺失，优选地包含相应于位置181和182、182和183或183和184的氨基酸的缺失(根据SEQ ID NO：39编号)。
[0013]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽在一个或多个选自根据SEQ ID NO：39编号的9、130、195、206、244、202、179、181、186、和190的位置上包含取代，优选地，包含选自根据SEQ ID NO:39编号的M9L、E130V、N195F、I206L、S244Q、M202L、K179L、R181E、G186E/N/Q/S和E190P中的一个或多个取代。
[0014]优选地，所述具有α
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淀粉酶活性的分离的、合成的或重组的多肽包含：
[0015](a)与SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、或SEQ ID NO:37具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的氨基酸序列；
[0016](b)由与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:9,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:37具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)由与SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:38具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列，(c)由多核苷酸编码的氨基酸序列，所述多核苷酸在高严格条件下与以下序列的互补序列杂交：(i)SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:37的编码序列；或者(ii)SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:38所示的多核苷酸；或者(d)具有淀粉酶活性的(a)、(b)或(c)的片段。14.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述淀粉酶与SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40所示的淀粉酶相比，具有增加的表达、活性、热稳定性、稳定性、洗衣性能、比活性、底物特异性、pH依赖的活性、pH依赖的稳定性、氧化稳定性、Ca2+依赖性或其任意组合，优选地，与SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40所示的淀粉酶相比，所述淀粉酶具有增加的热稳定性。15.一种分离的、合成的或重组的核酸，其包含：(a)核酸序列，其与SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:38具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，其中所述核酸编码具有淀粉酶活性的多肽；(b)核酸序列，所述核酸序列编码与SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:15,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:23,SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：