一种透明质酸酶液体制剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种透明质酸酶液体制剂，所述液体制剂包括含有透明质酸酶的发酵产品和乳酸盐，其中所述液体制剂使用乳酸将pH调节为5.0

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸酶液体制剂及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种透明质酸酶液体制剂及其应用。

技术介绍

[0002]透明质酸酶(hyaluronidase，HAase)，也称玻璃酸酶，是一种能够特异性水解透明质酸的酶类的总称。
[0003]透明质酸酶是一类能够降解透明质酸的酶的总称。早在1928年Duran
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Reynals在研究哺乳动物睾丸及其他组织提取物时发现了一种“扩散因子”，可以促进皮下注射的疫苗、染料、毒素等更好地扩散。1940年Meyer将这种“扩散因子”命名为Hyaluronidase。此后，人们许多组织及生物体内检测到了透明质酸酶，包括细菌病毒、细菌、真菌等，非脊椎动物如水蛭、甲壳类动物的毒液中也产生透明质酸酶。脊椎动物中，在蛇、蜥蜴的毒液中，睾丸及其他器官如肝脏、肾脏、淋巴系统及皮肤中均发现透明质酸酶的存在。
[0004]透明质酸酶同样是透明质酸相关研究不可或缺的工具酶，专利CN201811508968.X《一种测定透明质酸含量的方法》提供了利用透明质酸酶酶解透明质酸盐及相关产品进而测定透明质酸含量的方法。专利CN201810999774.8《一种测定交联透明质酸凝胶体外酶解性能的方法》利用透明质酸酶对交联透明质酸酶解速率的不同，提供了一种测定交联透明质酸凝胶体外酶解性能的方法。专利CN201911259050.0《一种三偏磷酸钠交联透明质酸粉末的制备方法及所得产品和应用》利用透明质酸酶确认了三偏磷酸钠交联透明质酸粉末与透明质酸相比的抗酶解性能。专利CN202010243080.9《交联或高分子量透明质酸类物质的微生物限度检测方法》利用透明质酸酶降低交联或高分子量透明质酸溶液黏度，进而对其进行微生物限度的检测方法。
[0005]同时，透明质酸酶是低分子及寡聚透明质酸及其盐生产不可或缺的工具酶，因此，生产用透明质酸酶制剂在制备的过程中需要结合低分子及寡聚透明质酸及其盐后期纯化工艺，不能额外引入杂质，影响低分子及寡聚透明质酸及盐成品品质。
[0006]透明质酸酶制剂，常使用复杂的酶活保护剂、稳定剂、缓冲剂来保持其酶活的稳定性。专利CN201610081945.X《一种重组人透明质酸酶液体制剂及其制备方法和应用》提供了一种重组人透明质酸酶液体制剂包含组分：1400000～500000000IU重组人透明质酸酶、5～10g缓冲剂、60～180g冷冻保护剂、180～300g赋形剂、5～12g酶活保护剂和0.3～5g表面活性剂。专利CN201380057659.4《用于透明质酸酶的稳定剂和包括透明质酸酶的液体制剂》所述稳定剂含有：缓冲剂，以提供pH 4.0至6.0；0.001至0.5v/v％的非离子表面活性剂；和0.1至5mM的螯合剂或MgCl2。这些稳定剂、保护剂、表面活性剂均会对透明质酸酶的应用产生一定的影响和干扰，特别是在含有透明质酸的复杂体系中，如饮料、化妆品溶液中的含量检测等。
[0007]乳酸及乳酸盐在紫外区无吸收，在常温条件即具备良好的防腐性能，且因透明质酸发酵生产过程中即会产生大量乳酸，因此，以乳酸及乳酸盐作为透明质酸酶的酶活稳定剂及防腐剂，在应用于低分子及寡聚透明质酸及其盐的生产时不会额外引入杂质。

技术实现思路

[0008]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术提供一种透明质酸酶液体制剂及其应用具体来说，本专利技术涉及如下方面：
[0009]1、一种透明质酸酶液体制剂，其特征在于，所述液体制剂包括含有透明质酸酶的发酵产品和乳酸盐，其中所述液体制剂使用乳酸将pH调节为5.0
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6.0。
[0010]2、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，以所述液体制剂的体积为基准，所述液体制剂中所述透明质酸酶的含量为106～109IU/L。
[0011]3、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，以所述液体制剂的体积为基准，所述乳酸盐的含量为50～300g/L。
[0012]4、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，所述含有透明质酸酶的发酵产品中透明质酸酶比活为104IU/mg～106IU/mg。
[0013]5、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，所述含有透明质酸酶的发酵产品由芽孢杆菌(Bacillus sp.)A50 CGMCC NO.5744生产并纯化得到。
[0014]6、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，所述乳酸盐选自乳酸钠和乳酸钾中的一种或两种。
[0015]7、根据项1所述的液体制剂，其特征在于，所述液体制剂由透明质酸酶发酵产品、乳酸盐和纯化水构成，其中所述液体制剂使用乳酸将pH调节为5.0
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6.0。
[0016]8、透明质酸酶液体制剂在检测中的应用，所述透明质酸酶液体制剂为项1
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7中任一项所述的液体制剂。
[0017]9、透明质酸酶液体制剂在生产低分子或寡聚透明质酸盐中的应用，所述透明质酸酶液体制剂为项1
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7中任一项所述的液体制剂。
[0018]本专利技术与现有技术相比，本专利技术提供了一种芽孢杆菌透明质酸酶液体制剂的极简配方，能够长期维持透明质酸酶酶活的稳定性，具有以下优点：
[0019]该透明质酸酶制剂采用芽孢杆菌透明质酸酶为主料，以50～300g/L的乳酸钠或乳酸钾为稳定剂及防腐剂，且采用乳酸调pH5.0～6.0，成分单一，且为常用惰性盐分，不会对透明质酸酶制剂的使用产生干扰。
[0020]尽管该透明质酸酶制剂配方简单，但是能够保持良好的酶活稳定性，其在
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20℃冷冻条件下，24个月后透明质酸酶酶活可以维持95％以上，在25℃下，30天后透明质酸酶酶活同样可以维持95％以上，为透明质酸酶的生产加工及应用提供了便利。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例进一步说明本专利技术，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本专利技术，并非用于限制本专利技术。
[0022]除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但不用来限制本专利技术的范围。
[0023]如上所述，透明质酸酶是透明质酸相关研究不可或缺的工具酶，在检测领域具有
广泛的应用，例如可以用于测定样品中透明质酸或其盐的含量，测定透明质酸凝胶的体外酶解性能，测定交联透明质酸酶的抗酶解性能等。当前使用透明质酸酶进行检测时，通常需要将透明质酸冻干制剂配制为酶液进行使用。这种方式使用不方便，同时由于每次称量的量比较少，以及每次操作的差异，容易造成检测误差。而将透明质酸酶配制成液体制剂进行检测，往往需要加入复杂的稳定剂或保护剂，从而导致检测不准确。而在低分子及寡聚透明质酸及其盐的生产时，复杂的稳定剂或保护剂则会额外引入杂质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸酶液体制剂，其特征在于，所述液体制剂包括含有透明质酸酶的发酵产品和乳酸盐，其中所述液体制剂使用乳酸将pH调节为5.0
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6.0。2.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，以所述液体制剂的体积为基准，所述液体制剂中所述透明质酸酶的含量为106～109IU/L。3.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，以所述液体制剂的体积为基准，所述乳酸盐的含量为50～300g/L。4.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述含有透明质酸酶的发酵产品中透明质酸酶比活为104IU/mg～106IU/mg。5.根据权利要求1所述的液体制剂，其特征在于，所述含有透明质酸酶的发酵产品由芽孢杆菌(Ba...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔莉苹，周宁，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：