一种透明质酸酶冻干制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种透明质酸酶冻干制剂，所述冻干制剂包括透明质酸酶和透明质酸盐。本发明专利技术与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：本配方创新性的采用透明质酸盐作为透明质酸酶的酶活保护剂及分散剂，在生产低分子及寡聚透明质酸的过程中，不会引入额外的杂质。在不存在表面活性剂、缓冲剂的情况下，该透明质酸酶冻干制剂可实现高的酶活回收率，高酶活稳定性。透明质酸酶冻干制剂的制备方法适应面广，无论是发酵液上清或是经过不同方法纯化的酶液均可以采用该方法进行冷冻干燥。以采用该方法进行冷冻干燥。

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸酶冻干制剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种透明质酸酶冻干粉制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]透明质酸酶(hyaluronidase，HAase)，也称玻璃酸酶，是一种能够特异性水解透明质酸的酶类的总称。
[0003]透明质酸酶是一类能够降解透明质酸的酶的总称。早在1928年Duran
‑
Reynals在研究哺乳动物睾丸及其他组织提取物时发现了一种“扩散因子”，可以促进皮下注射的疫苗、染料、毒素等更好地扩散。1940年Meyer将这种“扩散因子”命名为Hyaluronidase。此后，人们在许多组织及生物体内检测到了透明质酸酶，包括细菌病毒、细菌、真菌等，非脊椎动物如水蛭、甲壳类动物的毒液中也产生透明质酸酶。脊椎动物中，在蛇、蜥蜴的毒液中，睾丸及其他器官如肝脏、肾脏、淋巴系统及皮肤中均发现透明质酸酶的存在。
[0004]透明质酸酶制剂，常常使用复杂的酶活保护剂、稳定剂、缓冲剂来保持其酶活的稳定性。专利CN201610081945.X一种重组人透明质酸酶冻干制剂及其制备方法和应用提供了一种重组人透明质酸酶冻干制剂，包含组分：1400000～500000000IU重组人透明质酸酶、5～10g缓冲剂、60～180g冷冻保护剂、180～300g赋形剂、5～12g酶活保护剂和0.3～5g表面活性剂。专利CN201380057659.4用于透明质酸酶的稳定剂和包括透明质酸酶的冻干粉制剂，所述稳定剂含有：缓冲剂，以提供pH 4.0至6.0；0.001至0.5v/v％的非离子表面活性剂；和0.1至5mM的螯合剂或MgCl2。
[0005]这些稳定剂、保护剂、表面活性剂成分种类多，体系复杂，均会对透明质酸酶的应用产生一定的影响和干扰，用于生产低分子及寡聚透明质酸盐时容易引入杂质，最后干扰低分子及寡聚透明质酸盐成品的品质。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术提供一种透明质酸酶冻干制剂及其制备方法。
[0007]具体来说，本专利技术涉及如下方面：
[0008]1、一种透明质酸酶冻干制剂，其特征在于，所述冻干制剂包括透明质酸酶和透明质酸盐。
[0009]2、根据项1所述的冻干制剂，其特征在于，以所述冻干制剂的质量为基准，所述冻干制剂中所述透明质酸酶的含量为1
×
106～1
×
108IU/g，所述透明质酸盐的质量含量为50％～99％。
[0010]3、根据项1所述的冻干制剂，其特征在于，所述透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、透明质酸镁中的一种或两种以上。
[0011]4、根据项1所述的冻干制剂，其特征在于，所述透明质酸盐的分子量为400Da～100kDa。
[0012]5、根据项1所述的冻干制剂，其特征在于，所述透明质酸酶为芽孢杆菌(Bacillus sp.)A50 CGMCC NO.5744产透明质酸酶。
[0013]6、一种透明质酸酶冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
[0014]配制含有透明质酸酶和透明质酸盐的料液；
[0015]将所述料液冷冻干燥，得到透明质酸酶冻干制剂。
[0016]7、根据项6所述的制备方法，其特征在于，以所述料液的体积为基准，所述料液中所述透明质酸酶的含量为1
×
107～1
×
109IU/L，所述透明质酸盐的含量为0.1～10g/L。
[0017]8、根据项6所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、透明质酸镁中的一种或两种以上。
[0018]9、根据项6所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸盐的分子量为400Da～100kDa。
[0019]10、根据项6所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸酶为芽孢杆菌(Bacillus sp.)A50 CGMCC NO.5744产透明质酸酶。
[0020]11、根据项10所述的制备方法，其特征在于，所述透明质酸酶选自发酵液上清、盐析复溶酶液、超滤酶液、离子交换洗脱酶液中的一种或两种以上。
[0021]12、根据项6所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥过程为：
[0022]在
‑
18℃～
‑
20℃环境下预冻10～24h；
[0023]在
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35℃～
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40℃环境下预冻24～48h；
[0024]在
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15℃～
‑
40℃，10～20mbar环境下干燥48～72h。
[0025]13、一种透明质酸酶冻干制剂，其由项6
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12任一项所述的制备方法制得。
[0026]14、透明质酸酶冻干制剂在生产低分子或寡聚透明质酸盐中的应用，其特征在于，所述透明质酸酶冻干制剂为项1
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5任一项所述的冻干制剂或项13所述的冻干制剂。
[0027]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点：
[0028]本配方创新性的采用透明质酸盐作为透明质酸酶的酶活保护剂及分散剂，在生产低分子及寡聚透明质酸的过程中，不会引入额外的杂质。
[0029]在不存在表面活性剂、缓冲剂的情况下，该透明质酸酶冻干粉制剂可实现高的酶活回收率和酶活稳定性。
[0030]透明质酸酶冻干制剂的制备方法适应面广，无论是发酵液上清或是经过不同方法纯化的酶液均可以采用该方法进行冷冻干燥。
具体实施方式
[0031]下面结合实施例进一步说明本专利技术，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本专利技术，并非用于限制本专利技术。
[0032]除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但不用来限制本专利技术的范围。
[0033]酶纯化结束后，为了更方便后期的使用，及最大限度的保存酶活，一般将酶制备成干粉。其中干粉的制备一般采用冷冻干燥技术，因此酶通常以冻干制剂的形式存在。透明质酸酶冻干制剂常使用复杂的酶活保护剂、稳定剂、缓冲剂来保持其酶活的稳定性。目前使用的稳定剂、保护剂、表面活性剂成分种类多，体系复杂，均会对透明质酸酶的应用产生一定的影响和干扰，用于生产透明质酸盐时容易引入杂质，最后影响低分子及寡聚透明质酸盐的品质。
[0034]本专利技术提供一种透明质酸酶冻干制剂，所述冻干制剂包括透明质酸酶和透明质酸盐。其中透明质酸盐一方面作为透明质酸酶的酶活保护剂和分散剂，可以使透明质酸酶保持较高的酶活，另一方面在透明质酸酶用作透明质酸盐的生产时，透明质酸盐本身作为产物成分，不会引入额外的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸酶冻干制剂，其特征在于，所述冻干制剂包括透明质酸酶和透明质酸盐。2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，以所述冻干制剂的质量为基准，所述冻干制剂中所述透明质酸酶的含量为1
×
106～1
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108IU/g，所述透明质酸盐的质量含量为50％～99％。3.根据权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、透明质酸镁中的一种或两种以上，优选所述透明质酸盐的分子量为400Da～100kDa，进一步优选所述透明质酸酶为芽孢杆菌(Bacillus sp.)A50 CGMCC NO.5744产透明质酸酶。4.一种透明质酸酶冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：配制含有透明质酸酶和透明质酸盐的料液；将所述料液冷冻干燥，得到透明质酸酶冻干制剂。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，以所述料液的体积为基准，所述料液中所述透明质酸酶的含量为1
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107～1
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109IU/L，所述透明质酸盐的含量为0.1～10g/L。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述透明...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔莉苹，周宁，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：