一种结合CD40L的融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种结合CD40L的融合蛋白及其应用，属于生物医药领域。本发明专利技术提供的结合CD40L的融合蛋白不含有人抗体Fc结构域，通过研究发现该融合蛋白在结合CD40L的同时，不引起任何血小板的活化，在保证其生物活性的同时，极大地提高了其安全性，降低了治疗副作用，为免疫系统疾病的治疗提供了一种新思路及方法。另外，该融合蛋白在稳转细胞系的构建和筛选过程中表现出了极高的表达量，有益于大规模的开发和生产。的开发和生产。的开发和生产。

【技术实现步骤摘要】
一种结合CD40L的融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种结合CD40L的融合蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]CD40L(SEQ ID NO:24)又称CD154，属于肿瘤坏死因子(TNF)家族成员。CD40L是Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要表达于成熟的活化CD4阳性T淋巴细胞和血小板，部分表达于自然杀伤细胞、树突状细胞、单核巨噬细胞、B淋巴细胞，以及非造血系统起源的内皮细胞、上皮细胞和血管平滑肌细胞等(D'Orlando O,et al."Outside inside signalling in CD40
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mediated B cell activation."J Biol Regul Homeost Agents.2007；21(3
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4):49
‑
62.；Antoniades C,et al."The CD40/CD40 ligand system:linking inflammation with atherothrombosis."Journal of the American College of Cardiology,2009,54(8):669
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677.)。CD40L通常以膜结合型CD40配体(mCD40L)和可溶性CD40L(sCD40L)两种形式存在。mCD40L与sCD40L均以三聚体形式与相应受体CD40(SEQ ID NO:25)结合，在启动免疫、调节炎症反应中发挥重要作用。
[0003]CD40与CD40L结合活化后激活包括核转录因子NF
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κB在内的下游信号通路，促进T细胞、B细胞的活化，增加IL
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1，IL
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6，IL
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8，IL
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12，IFN
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γ，TNF
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α，单核细胞趋化蛋白(MCP
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1)和巨噬细胞炎性蛋白
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1(MIP
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1)等炎症因子在单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞上的表达。CD40/CD40L通过这一系列生物学效应，在自身免疫性疾病的发生发展和炎症反应的调节中发挥重要的作用(Karnell,Jodi L.,et al."Targeting the CD40
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CD40L pathway in autoimmune diseases:Humoral immunity and beyond."Advanced Drug Delivery Reviews 141(2018).)。免疫系统长时间的过度激活会诱发诸如类风湿性关节炎、多发应硬化、银屑病等自身免疫性疾病，而开发针对CD40/CD40L通路的免疫拮抗型药物具有治疗多种自身免疫性疾病的潜力。
[0004]针对CD40L蛋白开发的抗体类药物在WO2002018445、CN1247472A、CN108135969A、US20180193454A1、CN106687133A等专利中已有报道，这些抗体类的药物含有人抗体Fc结构域或者通过PEG化的形式延长了药物在体内的半衰期。然而含有人抗体Fc的抗CD40L抗体类药物在临床实验中出现了严重的血栓栓塞，导致药物的研发失败，原因是抗体Fc段与其受体FcγRIIa结合后会导致血小板的活化和聚集进而引发血栓栓塞。另一方面，考虑通过PEG化的方式消除该风险，但是经过PEG化的蛋白免疫原性会增加，同时PEG化还会影响蛋白的功能结构域导致活性下降，另外PEG化存在连接位点不确定导致工艺质控难度增加。
[0005]目前尚未有针对CD40L的治疗性抗体药物上市，亟需开发结合CD40L的融合蛋白分子用于免疫系统疾病的治疗，同时进一步降低其副作用。

技术实现思路

[0006]针对上述不足，本专利技术提供了一种结合CD40L的融合蛋白及其应用。本专利技术提供的结合CD40L的融合蛋白不含有人抗体Fc结构域，通过研究发现该融合蛋白在结合CD40L的同
时，不引起任何血小板的活化，在保证其生物活性的同时，极大地提高了其安全性，降低了治疗副作用，为免疫系统疾病的治疗提供了一种新思路及方法。另外，该融合蛋白在稳转细胞系的构建和筛选过程中表现出了极高的表达量，有益于大规模的开发和生产。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，所述的融合蛋白包括结合人CD40L蛋白的抗体片段和人血清白蛋白或结合人血清白蛋白的抗体片段。
[0009]具体地，所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：
[0010](1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区1LCDR1；
[0011](2)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区2LCDR2；
[0012](3)SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区3LCDR3；
[0013](4)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区1HCDR1；
[0014](5)SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区2HCDR2；
[0015](6)SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区3HCDR3；
[0016]优选地，所述变体序列为与其来源的CDR相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的CDR序列；所述的置换为保守置换。
[0017]进一步具体地，所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：
[0018](1)、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；和/或，SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链可变区VH；
[0019]或者(2)、与(1)中VL相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VL；和/或，与(1)中VH相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VH；
[0020]或者(3)、与(1)中VL相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VL；和/或，与(1)中VH相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VH；所述的置换是保守置换。
[0021]进一步具体地，所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：
[0022](1)、包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的轻链LC；和/或，SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的重链HC；
[0023]或者(2)、重链和轻链，其中，与(1)中的重链和轻链相比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于：所述的融合蛋白包括结合人CD40L蛋白的抗体片段和人血清白蛋白或结合人血清白蛋白的抗体片段。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：(1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区1LCDR1；(2)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区2LCDR2；(3)SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体序列的轻链互补决定区3LCDR3；(4)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区1HCDR1；(5)SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区2HCDR2；(6)SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或其变体序列的重链互补决定区3HCDR3；所述变体序列为与其来源的CDR相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的CDR序列；所述的置换为保守置换。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：(1)、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区VL；和/或，SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链可变区VH；或者(2)、与(1)中VL相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VL；和/或，与(1)中VH相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的VH；或者(3)、与(1)中VL相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VL；和/或，与(1)中VH相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的VH；所述的置换是保守置换。4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于：所述的结合人CD40L蛋白的抗体片段包含：(1)、包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的轻链LC；和/或，SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的重链HC；或者(2)、重链和轻链，其中，与(1)中的重链和轻链相比，所述重链具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性；和/或，所述轻链具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少9...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，郭树华，马琳，
申请(专利权)人：苏州普乐康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：