一种抗VEGF/PD-L1双特异性抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种抗PD

【技术实现步骤摘要】
一种抗VEGF/PD-L1双特异性抗体及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗VEGF/PD-L1双特异性抗体及其用途。

技术介绍

[0002]程序性死亡因子1配体1(programmed death 1 ligand 1，PD-L1)又称CD274，为B7家族成员，是PD-1的配体。PD-L1属于I型跨膜蛋白，共290个氨基酸，包含1个IgV样区、1个IgC样区、1个跨膜疏水区和1个由30个氨基酸组成的胞内区。与其他B7家族分子不同的是，PD-L1具有负向调节免疫应答的作用。研究发现，PD-L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，除淋巴细胞外，PD-L1也表达于其他多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞，以及各类非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、头颈癌等。PD-L1在调节自身反应性T、B细胞和免疫耐受方面具有一定广泛性，并且在外周组织T和B细胞应答起作用。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达与癌症患者的不良预后相关。
[0003]血管内皮生长因子又称血管通透因子(vascular permeability factor,VPF)或血管调理素(vasculotropin),最先从肿瘤细胞分离出来,是一种能与肝素结合的二聚体糖蛋白分子,并能特异性地作用于血管内皮细胞,是血管内皮细胞特异的有丝分裂素。具有增加微静脉、小静脉通透性,促进血管内皮细胞分裂、增殖以及诱导血管形成等作用。VEGF参与许多血管生成依赖性疾病的发病及其进展，包括癌症、某些炎性疾病以及糖尿病视网膜病变等。因此，在抗肿瘤药物研究中，VEGF是一个重要的靶点。
[0004]目前上市在售的抗体药物多为单克隆抗体，治疗性单克隆抗体已被用于治疗癌症、自身免疫病、炎症和其他疾病，多数是针对一个靶标的特异性。然而，病人接受单克隆抗体治疗可能产生耐药性或无应答。并且有些疾病在体内的影响因素是多方面的，包括不同的信号通路、不同的细胞因子和受体的调节机制等，单一靶点的免疫疗法似乎并不足以摧毁癌细胞。因此，需要通过组合不同的药物，或是使用多特异性抗体的多重靶向策略来实现。
[0005]双功能抗体虽然是抗体药物研发的方向，但面临诸多挑战，比如临床前评价模型、表达量低、稳定性差、工艺复杂、质控差异性大等问题，因此一直以来双功能抗体的研发困难重重。
[0006]因此，本领域迫切开发一种特异性佳、疗效好且易于制备的抗肿瘤双特异性抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是提供一种特异性佳、疗效好且易于制备的抗VEGF/PD-L1双特异性抗体。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包括：
[0009](a)抗PD-L1单域抗体；和
[0010](b)抗VEGF的抗体或元件。
[0011]在另一优选例中，所述的双特异性抗体包括1-3个抗PD-L1单域抗体，较佳地，包括1或2个抗PD-L1单域抗体。
[0012]在另一优选例中，所述的PD-L1单域抗体可以阻断PD-1和PD-L1的相互作用。
[0013]在另一优选例中，所述的双特异性抗体还包含Fc段。
[0014]在另一优选例中，所述双特异性抗体的Fc段选自下组：人IgG结构域、CH1+CL1结构域，或其组合。
[0015]在另一优选例中，所述人IgG结构域是经过改造的突变型IgG结构域，优选地为LALA突变型的IgG结构域。
[0016]在另一优选例中，所述的双特异性抗体含有如式I和式II所示结构的多肽，
[0017]A1-L1-CH-L2-B
ꢀꢀꢀ
(式I)
[0018]A2-L3-CL
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(式II)
[0019]其中，
[0020]A1是抗VEGF抗体的重链可变区VH；
[0021]A2是抗VEGF抗体的轻链可变区VL；
[0022]B是抗PD-L1单域抗体；
[0023]L1、L2和L3各自独立地为无或连接元件；
[0024]CH是人IgG重链恒定区CH(优选地为LALA突变型)；
[0025]CL是人κ轻链恒定区CL；和
[0026]“-”
为肽键；
[0027]并且其中，式I所示的多肽与式II所示的多肽通过二硫键作用而形成异源二聚体。
[0028]在另一优选例中，所述双特异性抗体是具有如式III或式IV所示结构的多肽，
[0029]A3-L4-Fc-L5-B
ꢀꢀꢀ
(式III)
[0030]B-L6-Fc-L7-A3
ꢀꢀꢀ
(式IV)
[0031]其中，
[0032]A3是可以结合VEGF并阻断其活性的结构域；
[0033]B是抗PD-L1单域抗体；
[0034]L4、L5、L6和L7各自独立地为无或连接元件；
[0035]Fc是人IgG的Fc区段(优选地为LALA突变型)；和
[0036]“-”
为肽键。
[0037]在另一优选例中，所述抗VEGF的重链可变区VH具有衍生自贝伐单抗(Bevacizumab)的重链可变区氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或与SEQ ID NO:3所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0038]在另一优选例中，所述抗VEGF的轻链可变区VL具有衍生自贝伐单抗(Bevacizumab)的轻链可变区氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，或与SEQ ID NO:9所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0039]在另一优选例中，所述抗VEGF的重链可变区VH具有衍生自雷尼单抗(Ranibizumab)的重链可变区氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，或与SEQ ID NO:13所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0040]在另一优选例中，所述抗VEGF的轻链可变区VL具有衍生自雷尼单抗
(Ranibizumab)的轻链可变区氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，或与SEQ ID NO:15所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0041]在另一优选例中，所述可以结合VEGF并阻断其活性的结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，或与SEQ ID NO:17所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0042]在另一优选例中，所述抗PD-L1单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，或与SEQ ID NO:5所示序列具有≥85％(优选地90％，更优选地95％)的序列同一性。
[0043]在另一优选例中，所述人IgG重链恒定区CH中具有LALA突变，其氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括：(a)抗PD-L1单域抗体；和(b)抗VEGF的抗体或元件。2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述的双特异性抗体含有如式I和式II所示结构的多肽，A1-L1-CH-L2-B
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(式I)A2-L3-CL
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(式II)其中，A1是抗VEGF抗体的重链可变区VH；A2是抗VEGF抗体的轻链可变区VL；B是抗PD-L1单域抗体；L1、L2和L3各自独立地为无或连接元件；CH是人IgG重链恒定区CH(优选地为LALA突变型)；CL是人κ轻链恒定区CL；和
“-”
为肽键；并且其中，式I所示的多肽与式II所示的多肽通过二硫键作用而形成异源二聚体。3.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体是具有如式III或式IV所示结构的多肽，A3-L4-Fc-L5-B
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(式III)B-L6-Fc-L7-A3
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(式IV)其中，A3是可以结合VEGF并阻断其活性的结构域；B是抗PD-L1单域抗体；L4、L5、L6和L7各自独立地为无或连接元件；Fc是人IgG的Fc区段(优选地为LALA突变型)；和
“-”
为肽键。4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪小牛，陈乘，袁志军，黄威峰，曾竣玮，孙左宇，
申请(专利权)人：普米斯生物技术珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：