抗制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合

【技术实现步骤摘要】
抗CD40抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及特异性结合
CD40
的抗体或其抗原结合片段以及含有所述抗体或其抗原结合片段的组合物
。
此外，此专利技术涉及编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸及包含其的宿主细胞，以及相关用途
。
此外，此专利技术涉及这些抗体或其抗原结合片段的治疗和检测用途
。

技术介绍

[0002]CD40
，也称为
TNFRSF5
，是
TNF
受体超家族蛋白成员，在多种细胞类型上均有表达，包括免疫
B
细胞
、
抗原呈递细胞
(APC)
及一些肿瘤细胞
。CD40
前体含有
297aa
，为
I
型跨膜糖蛋白，由
N
端信号肽
(20aa)、
胞膜外区
(193aa)、
跨膜区
(22aa)
和胞浆区
(62aa)
组成
。
胞膜外区包含4个
CDR
，共有
22
个半胱氨酸
。CD40
的糖基化程度较高，根据氨基酸序列推算的分子量为
28kD
，但糖基化后的分子量是
40
‑
50kD。
[0003]CD40
的同源配体是
CD154(TNFSF5/CD40L)
，其为一种
39kDa
的
II
型跨膜蛋白
。CD40L
的表达通常可诱导并局限于造血系统的细胞，如血小板
、
粒细胞
、
活化
T
细胞
、
活化
B
细胞和活化自然杀伤细胞
(NK)
细胞，但内皮细胞和平滑肌细胞也有弱表达
。
[0004]大量研究证实
CD40
‑
CD40L
在免疫反应中对
CD8
细胞毒性
T
淋巴细胞
(CTL)
功能起着至关重要的作用，是适应性免疫应答所必需的
。
[0005]CD40
在单核细胞及其成熟子代
DC
细胞和巨噬细胞以及
B
细胞上的广泛表达，对于免疫细胞的功能发挥起着重要的作用
。
单核细胞是固有免疫前体细胞，具有很高的可塑性
。
它们具有分化为多种细胞类型的能力，如髓源性抑制细胞
(MDSC)、
巨噬细胞和
DC
细胞
。CD40
信号是单核细胞成熟过程的重要触发因素，主要驱动分化为
M1
谱系的巨噬细胞和
DC
细胞
。CD40
与
DC
细胞表面的结合促进了细胞因子和趋化因子的产生，诱导共刺激分子的表达，并促进抗原的交叉呈递
。CD40L
的主要功能之一是通过激活
DC
细胞来增强抗原对
T
细胞的提呈
。
这一步称为“许可”，通过上调表面蛋白如
CD54
和
CD86
，增加
DC
与
T
细胞的相互作用，从而激活后者
。
[0006]B
细胞也是
CD40L
活性的靶点
。B
细胞与活化的表达
CD40L
的
T
细胞的相互作用增加了
MHC
‑
II
和
CD80
或
CD86
等共刺激分子的表达，并诱导
B
细胞中的
Ig
类别转换
。
活化的
B
细胞迁移到淋巴器官，在那里向
T
细胞呈递抗原，
CD40
激活的
DC
和
B
细胞通过释放免疫刺激性细胞因子和趋化因子如
IL
‑
12p70、CXCL10
和
TNF
α
来支持免疫应答
。
此外，
CD40
活化的
B
细胞能够通过促进
TNF
α
和
IFN
γ
等细胞因子的分泌来诱导抗原特异性
CD8+T
细胞
。
一些研究证明，体外活化的表达
CD40
的
B
细胞是完全功能性抗原提呈的
B
细胞，随后用这些细胞进行过继细胞转移
(ACT)
治疗可提高抗肿瘤的疗效
。
[0007]由于
CD40
在抗肿瘤免疫反应中发挥关键作用，诱导
CD40
信号的各种策略已经被广泛地研究探索
。
目前针对
CD40
的药物研发可以分为激活
(
激动剂
)
或抑制
(
拮抗剂
)
，以分别应对需要增强免疫活性的癌症环境及需要抑制免疫系统的自身免疫疾病环境
。
然而作为单剂治疗法，
CD40
抗体仅显示出适度的活性，肿瘤客观反应率低于
20
％，在免疫反应不足的
“
冷肿瘤”或在免疫细胞尚未高度浸润的肿瘤中尤为如此，许多
CD40
单抗项目因此陷入停滞
。
[0008]鉴于
CD40
在肿瘤免疫反应中的重要作用，
CD40
被认为是一个极具吸引力的肿瘤免疫治疗靶点
。
因此，本领域存在开发新的
CD40
抗体需求，尤其是开发出不同表位的
CD40
抗体，阻断和非阻断配体
CD40L
的结合，在肿瘤免疫和自身性免疫疾病中都存在着不同的应用潜力，结合考虑临床上的组合疗法，用于疾病治疗，尤其是癌症治疗
。

技术实现思路

[0009]本申请的专利技术人经过大量的研究，筛选获得了系列抗
CD40
的全人源抗体，其与
CD40
的结合亲和力高，具备与人
、
食蟹猴
CD40
的交叉反应活性，可阻断或者非阻断人
CD40
与其配体
CD40L
结合
。
基于此，本申请还提供了含有所述抗体或其抗原结合片段的组合物，编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸及包含其的宿主细胞，以及相关用途
。
[0010]抗体或其抗原结合片段
[0011]因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
能够特异性结合
CD40
的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(1)
下述3个重链可变区
(VH)
互补决定区
(CDR)
：
(a)VH CDR1
，其具有选自以下的结构：
FTFX1X2YX3MH(SEQ ID NO:76)
，
GSISSYYWS(SEQ ID NO:6)
；
(b)VH CDR2
，其具有选自以下的结构：
VIX4YX5X6X7X8KYYAX9SVKG(SEQ ID NO:77)
，
GISWSSX
10
SIX
11
YADSVKG(SEQ ID NO:78)
，
SIYYSGSTNYNPSLKS(SEQ ID NO:22)
；
(c)VH CDR3
，其具有选自以下的结构：
ARDTSRGHDI(SEQ ID NO:23)
，
AKDPTATTGARGYFDL(SEQ ID NO:24)
，
ARDANYYKWHPY(SEQ ID NO:25)
；和
/
或，
(2)
下述3个轻链可变区
(VL)CDR
：
(d)VL CDR1
，其具有选自以下的结构：
X
12
ASQSVSX
13
X
14
YLA(SEQ ID NO:79)
，
X
15
ASX
16
X
17
ISSWLA(SEQ ID NO:7)
；
(e)VL CDR2
，其具有选自以下的结构：
GASX
18
X
19
X
20
X
21
(SEQ ID NO:8)
，
AASX
22
LX
23
S(SEQ ID NO:9)
；
(f)VL CDR3
，其具有选自以下的结构：
X
24
X
25
YX
26
DYPPFT(SEQ ID NO:10)
，
QQX
27
X
28
SX
29
PPT(SEQ ID NO:11)
；其中，
X1选自
(i)
氨基酸残基
S
，
E
，
G
，
D
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X2选自
(i)
氨基酸残基
S
，
K
，
D
，
T
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X3选自
(i)
氨基酸残基
G
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X4选自
(i)
氨基酸残基
S
，
H
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X5选自
(i)
氨基酸残基
E
，
H
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X6选自
(i)
氨基酸残基
G
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X7选自
(i)
氨基酸残基
S
，
E
，
T
，
V
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X8选自
(i)
氨基酸残基
N
，
S
，
I
，
K
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X9选自
(i)
氨基酸残基
D
，
E
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
10
选自
(i)
氨基酸残基
G
，
D
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
11
选自
(i)
氨基酸残基
G
，
H
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
12
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
Q
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
13
选自
(i)
氨基酸残基
Y
，
S
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
14
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
D
，
N
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
15
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
E
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
16
选自
(i)
氨基酸残基
Q
，
K
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
17
选自
(i)
氨基酸残基
G
，
V
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
18
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
T
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
19
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
L
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
20
选自
(i)
氨基酸残基
N
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
21
选自
(i)
氨基酸残基
T
，
N
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
22
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
Y
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
23
选自
(i)
氨基酸残基
E
，
Q
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
24
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
G
，
Q
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
25
选自
(i)
氨基酸残基
E
，
Q
，
D
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
26
选自
(i)
氨基酸残基
A
，
S
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
27
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
H
，
V
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
28
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
L
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
29
选自
(i)
氨基酸残基
F
，
Y
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基
。2.
权利要求1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(1)
下述3个重链可变区
(VH)
互补决定区
(CDR)
：
(a)VH CDR1
，其具有如
FTFX1X2YX3MH(SEQ ID NO:76)
所示的结构；
(b)VH CDR2
，其具有如
VIX4YX5X6X7X8KYYAX9SVKG(SEQ ID NO:77)
所示的结构；
(c)VH CDR3
，其具有如
ARDTSRGHDI(SEQ ID NO:23)
所示的结构；和
/
或，
(2)
下述3个轻链可变区
(VL)CDR
：
(d)VL CDR1
，其具有如
X
12
ASQSVSX
13
X
14
YLA(SEQ ID NO:79)
所示的结构；
(e)VL CDR2
，其具有如
GASX
18
X
19
X
20
X
21
(SEQ ID NO:8)
所示的结构；
(f)VL CDR3
，其具有如
X
24
X
25
YX
26
DYPPFT(SEQ ID NO:10)
所示的结构；其中，
X1选自
(i)
氨基酸残基
S
，
E
，
G
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X2选自
(i)
氨基酸残基
S
，
K
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X3选自
(i)
氨基酸残基
G
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X4选自
(i)
氨基酸残基
S
，
H
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X5选自
(i)
氨基酸残基
E
，
H
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X6选自
(i)
氨基酸残基
G
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X7选自
(i)
氨基酸残基
S
，
E
，
T
，
V
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X8选自
(i)
氨基酸残基
N
，
S
，
I
，
K
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X9选自
(i)
氨基酸残基
D
，
E
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
12
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
Q
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
13
选自
(i)
氨基酸残基
Y
，
S
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
14
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
D
，
N
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
18
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
T
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
19
选自
(i)
氨基酸残基
R
，
L
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
20
选自
(i)
氨基酸残基
N
，
A
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
21
选自
(i)
氨基酸残基
T
，
N
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
24
选自
(i)
氨基酸残基
S
，
G
，
Q
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
25
选自
(i)
氨基酸残基
E
，
Q
，
D
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
X
26
选自
(i)
氨基酸残基
A
，
S
和
(ii)
相对于
(i)
是保守置换的氨基酸残基；
优选地，
X1选自氨基酸残基
S
，
E
，
G
；
X2选自氨基酸残基
S
，
K
；
X3为氨基酸残基
G
；
X4选自氨基酸残基
S
，
H
；
X5选自氨基酸残基
E
，
H
；
X6选自氨基酸残基
G
，
A
；
X7选自氨基酸残基
S
，
E
，
T
，
V
；
X8选自氨基酸残基
N
，
S
，
I
，
K
；
X9选自氨基酸残基
D
，
E
；
X
12
选自氨基酸残基
R
，
Q
；
X
13
选自氨基酸残基
Y
，
S
；
X
14
选自氨基酸残基
S
，
D
，
N
；
X
18
选自氨基酸残基
S
，
T
，
A
；
X
19
选自氨基酸残基
R
，
L
；
X
20
选自氨基酸残基
N
，
A
；
X
21
选自氨基酸残基
T
，
N
；
X
24
选自氨基酸残基
S
，
G
，
Q
；
X
25
选自氨基酸残基
E
，
Q
，
D
；
X
26
选自氨基酸残基
A
，
S。3.
权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其包含：如
SEQ ID NOs:1
‑3任一项所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NOs:12
‑
18、82
任一项所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NOs:37
‑
40
任一项所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NOs:45
‑
50
任一项所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NOs:54
‑
57
任一项所示的
VL CDR3
；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(1)
如
SEQ ID NO:1
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:12
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:37
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:45
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:54
所示的
VL CDR3
；
(2)
如
SEQ ID NO:1
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:13
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:37
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:45
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:54
所示的
VL CDR3
；
(3)
如
SEQ ID NO:2
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:14
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:38
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:46
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:55
所示的
VL CDR3
；
(4)
如
SEQ ID NO:2
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:15
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:39
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:47
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:56
所示的
VL CDR3
；
(5)
如
SEQ ID NO:2
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:16
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:39
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:48
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:57
所示的
VL CDR3
；
(6)
如
SEQ ID NO:2
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:17
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:40
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:49
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:57
所示的
VL CDR3
；
(7)
如
SEQ ID NO:3
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:18
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:38
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:50
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:54
所示的
VL CDR3
；或
(8)
如
SEQ ID NO:2
所示的
VH CDR1
；如
SEQ ID NO:82
所示的
VH CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:23
所示的
VH CDR3
；如
SEQ ID NO:39
所示的
VL CDR1
；如
SEQ ID NO:48
所示的
VL CDR2
；以及，如
SEQ ID NO:57
所示的
VL CDR3。4.
权利要求1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(1)
下述3个重链可变区
(VH)
互补决定区
(CDR)
：
(a)VH CDR1
，其具有如
FTFX1X2YX3MH(SEQ ID NO:76)
所示的结构；
(b)VH CDR2
，其具有如
GISWSSX
10

【专利技术属性】
技术研发人员：张振清，贾云莉，曾竣玮，比昂卡，
申请(专利权)人：普米斯生物技术珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：